公开(公告)号：CN113980905B

公开(公告)日：2024-01-23

申请号：CN202010735516.6

申请日：2020-07-27

申请人： 四川大学华西医院 ,  成都华西精准医学产业技术研究院有限公司

发明人： 包骥 ,  步宏 ,  高孟雨

IPC分类号： C12N5/10 ,  C12N15/55 ,  C12N15/867 ,  C12N15/90 ,  G16B20/30 ,  G16B25/20 ,  G16B30/10

摘要： 本发明公开了一种用于猪基因编辑sgRNA筛选的体外细胞平台，属于基因编辑领域。本发明的平台适用于CRISPR‑Cas9基因编辑技术中的sgRNA筛选，主要包括特定的猪细胞及其转录组、蛋白质组数据平台，以及基因编辑sgRNA筛选方法。所述细胞是稳定表达Cas9基因的猪髋动脉内皮细胞PIEC、猪肾上皮细胞PK15、猪肾传代细胞IBRS‑2或猪睾丸细胞ST。使用者可根据待编辑的基因在数据平台中的表达水平，选取特定细胞，进行基因编辑sgRNA的筛选。本发明的体外细胞平台提高了sgRNA筛选效率，具有良好的应用前(56)对比文件高孟雨等.靶向猪基因组单链向导RNA快速筛选以及利用图案微阵列收获单克隆细胞的研究.生物医学工程学杂志.2021,第38卷(第1期),第111-121页.刘海龙等.靶向miRNA前体不同类型sgRNA的丰度及特异性评估.遗传.2018,(第7期),第57-67页.覃鸿妮等.慢病毒载体介导稳定表达Cas9基因的293T细胞系构建及其基因编辑效率验证.扬州大学学报(农业与生命科学版).2020,(第4期),第32-38页.

公开(公告)号：CN111484994B

公开(公告)日：2022-04-19

申请号：CN201910088732.3

申请日：2019-01-29

申请人： 四川大学华西医院

发明人： 包骥 ,  高孟雨 ,  步宏

IPC分类号： C12N15/12 ,  C12N15/113 ,  C12N15/861 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10

摘要： 为了解决猪Fah、Rag2双基因敲除效率低、筛选困难的问题，本发明提供了一组Fah、Rag2双基因的靶序列，以及它们在CRISPR‑Cas9特异性敲除猪Fah、Rag2双基因的用途。本发明还提供了一种CRISPR‑Cas9敲除猪Fah、Rag2双基因的方法。通过验证，本发明可以有效实现猪Fah、Rag2双基因的敲除，其双敲除效率高达50％，筛选也十分简单。

公开(公告)号：CN111484994A

公开(公告)日：2020-08-04

申请号：CN201910088732.3

申请日：2019-01-29

申请人： 四川大学华西医院

发明人： 包骥 ,  高孟雨 ,  步宏

IPC分类号： C12N15/12 ,  C12N15/113 ,  C12N15/861 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10

摘要： 为了解决猪Fah、Rag2双基因敲除效率低、筛选困难的问题，本发明提供了一组Fah、Rag2双基因的靶序列，以及它们在CRISPR-Cas9特异性敲除猪Fah、Rag2双基因的用途。本发明还提供了一种CRISPR-Cas9敲除猪Fah、Rag2双基因的方法。通过验证，本发明可以有效实现猪Fah、Rag2双基因的敲除，其双敲除效率高达50％，筛选也十分简单。

公开(公告)号：CN113980905A

公开(公告)日：2022-01-28

申请号：CN202010735516.6

申请日：2020-07-27

申请人： 四川大学华西医院 ,  成都华西精准医学产业技术研究院有限公司

发明人： 包骥 ,  步宏 ,  高孟雨

IPC分类号： C12N5/10 ,  C12N15/55 ,  C12N15/867 ,  C12N15/90 ,  G16B20/30 ,  G16B25/20 ,  G16B30/10

摘要： 本发明公开了一种用于猪基因编辑sgRNA筛选的体外细胞平台，属于基因编辑领域。本发明的平台适用于CRISPR‑Cas9基因编辑技术中的sgRNA筛选，主要包括特定的猪细胞及其转录组、蛋白质组数据平台，以及基因编辑sgRNA筛选方法。所述细胞是稳定表达Cas9基因的猪髋动脉内皮细胞PIEC、猪肾上皮细胞PK15、猪肾传代细胞IBRS‑2或猪睾丸细胞ST。使用者可根据待编辑的基因在数据平台中的表达水平，选取特定细胞，进行基因编辑sgRNA的筛选。本发明的体外细胞平台提高了sgRNA筛选效率，具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN111826396B

公开(公告)日：2022-05-13

申请号：CN201910909456.2

申请日：2019-09-24

申请人： 四川大学华西医院

发明人： 包骥 ,  杨光 ,  杨阳 ,  步宏 ,  高孟雨 ,  廖光能 ,  何宇婷 ,  张炳琪

IPC分类号： C12N15/864 ,  C12N15/90 ,  C12N9/22 ,  A01K67/027

摘要： 本发明提供了一种适用于猪的快速、高效的基因改造方法，它是将基因编辑工具包装于3型或6型腺相关病毒，得到重组腺相关病毒，再将重组腺相关病毒注射入母猪输卵管。本发明的方法相比传统的体细胞核移植方法和胚胎显微注射方法，操作简便高效，基因改造效率高，极具应用前景。

公开(公告)号：CN111826396A

公开(公告)日：2020-10-27

申请号：CN201910909456.2

申请日：2019-09-24

申请人： 四川大学华西医院

发明人： 包骥 ,  杨光 ,  杨阳 ,  步宏 ,  高孟雨 ,  廖光能 ,  何宇婷 ,  张炳琪

IPC分类号： C12N15/864 ,  C12N15/90 ,  C12N9/22 ,  A01K67/027

摘要： 本发明提供了一种适用于猪的快速、高效的基因改造方法，它是将基因编辑工具包装于3型或6型腺相关病毒，得到重组腺相关病毒，再将重组腺相关病毒注射入母猪输卵管。本发明的方法相比传统的体细胞核移植方法和胚胎显微注射方法，操作简便高效，基因改造效率高，极具应用前景。