-
公开(公告)号：CN109251963B
公开(公告)日：2022-11-18
申请号：CN201811342073.3
申请日：2018-11-12
Applicant: 复旦大学
IPC: C12Q1/6844 , C12Q1/689 , C12Q1/04 , C12R1/35
Abstract: 本发明属于核酸检测技术领域，具体为一种恒温检测细胞培养液中支原体污染的方法及试剂盒。本发明方法包括：构建反应体系，包含：RPA恒温扩增反应成分，特异性扩增支原体的引物对，Cas12a蛋白，靶向目标序列的crRNA和单链DNA报告分子；取1mL细胞培养上清液，加热培养，取1uL作为检测样品加入到一体化检测体系中，经过反应，可直接观察检测体系荧光变化进行支原体检测；试剂盒含有：扩增支原体16s rRNA保守区域DNA序列的引物对，RPA恒温扩增反应成分，Cas12a蛋白，与靶基因互补的crRNA和两端分别被荧光基团和猝灭基团修饰的单链DNA报告分子。本发明操作简单，检验周期短，并且解决了常规支原体检测过程中出现的开盖污染问题。
-
公开(公告)号：CN109777830B
公开(公告)日：2022-05-20
申请号：CN201910022784.0
申请日：2019-01-10
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体为一种在细胞系中条件性敲除必需基因的方法。本发明首先构建双质粒系统：敲除质粒(KO质粒)编码用于敲除必需基因的Cas9和sgRNA，营救质粒(Rescue质粒)编码由Tet‑off系统调控的外源补偿基因，然后将两个质粒同时转入细胞后用药筛若干天，分选单克隆，通过测序鉴定，获得必需基因纯合敲除细胞系。本发明中可以通过加Doxcyclin关闭外源基因表达，以研究必需基因的功能。另外，本发明中Rescue质粒可以被另外一个含有不同抗性基因的Rescue2质粒替换，Rescue2质粒上编码必需基因的突变体，用以研究必需基因突变体的功能。本方法操作简单，实验周期短。
-
公开(公告)号：CN109251963A
公开(公告)日：2019-01-22
申请号：CN201811342073.3
申请日：2018-11-12
Applicant: 复旦大学
IPC: C12Q1/6844 , C12Q1/689 , C12Q1/04 , C12R1/35
CPC classification number: C12Q1/6844 , C12Q1/689 , C12Q2521/507 , C12Q2522/101
Abstract: 本发明属于核酸检测技术领域，具体为一种恒温检测细胞培养液中支原体污染的方法及试剂盒。本发明方法包括：构建反应体系，包含：RPA恒温扩增反应成分，特异性扩增支原体的引物对，Cas12a蛋白，靶向目标序列的crRNA和单链DNA报告分子；取1mL细胞培养上清液，加热培养，取1uL作为检测样品加入到一体化检测体系中，经过反应，可直接观察检测体系荧光变化进行支原体检测；试剂盒含有：扩增支原体16s rRNA保守区域DNA序列的引物对，RPA恒温扩增反应成分，Cas12a蛋白，与靶基因互补的crRNA和两端分别被荧光基团和猝灭基团修饰的单链DNA报告分子。本发明操作简单，检验周期短，并且解决了常规支原体检测过程中出现的开盖污染问题。
-
公开(公告)号：CN109777830A
公开(公告)日：2019-05-21
申请号：CN201910022784.0
申请日：2019-01-10
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体为一种在细胞系中条件性敲除必需基因的方法。本发明首先构建双质粒系统：敲除质粒(KO质粒)编码用于敲除必需基因的Cas9和sgRNA，营救质粒(Rescue质粒)编码由Tet-off系统调控的外源补偿基因，然后将两个质粒同时转入细胞后用药筛若干天，分选单克隆，通过测序鉴定，获得必需基因纯合敲除细胞系。本发明中可以通过加Doxcyclin关闭外源基因表达，以研究必需基因的功能。另外，本发明中Rescue质粒可以被另外一个含有不同抗性基因的Rescue2质粒替换，Rescue2质粒上编码必需基因的突变体，用以研究必需基因突变体的功能。本方法操作简单，实验周期短。
-
-
-
Search Results
4
records
(took 0.014 seconds)
