SlugCas9突变体蛋白及其相关应用
    3.
    发明公开

    公开(公告)号:CN116804190A

    公开(公告)日:2023-09-26

    申请号:CN202310692499.6

    申请日:2023-06-12

    Applicant: 复旦大学

    Inventor: 王永明 齐涛

    Abstract: 本发明涉及基因编辑技术领域,具体地涉及一种Slug突变体蛋白、包括其的CRISPR/Cas9基因编辑系统、及其应用。更具体地,本发明的SlugCas9突变体蛋白与单链向导RNA形成的复合体,较野生型SlugCas9复合体的PAM更简单,具有更大的靶向范围,能够精确地定位靶向DNA序列并产生切割,使所述靶序列发生双链断裂损伤,具有高的特异性,能够降低细胞中或体外进行基因编辑的脱靶率,具有广泛的应用前景。

    CRISPR/SauriCas9基因编辑系统及其应用

    公开(公告)号:CN110499335B

    公开(公告)日:2023-03-28

    申请号:CN201910731803.7

    申请日:2019-08-08

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域,具体为一种CRISPR/SauriCas9基因编辑系统以及其应用。本发明基因编辑系统为SauriCas9蛋白与sgRNA形成的复合体,能精确靶向DNA序列,并产生切割,使DNA发生双链断裂损伤;所述基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑;SauriCas9蛋白小,为1061个氨基酸,识别的PAM序列简单,所述SauriCas9蛋白具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列,所述sgRNA具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。本发明在基因编辑领域中具有广泛的应用前景。

    CRISPR/Sa-SauriCas9基因编辑系统及其应用

    公开(公告)号:CN110577971B

    公开(公告)日:2022-11-18

    申请号:CN201910731401.7

    申请日:2019-08-08

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域,具体为一种CRISPR/Sa‑SauriCas9基因编辑系统以及其应用。本发明基因编辑系统为Sa‑SauriCas9蛋白与sgRNA形成的复合体,能精确靶向DNA序列,并产生切割,使DNA发生双链断裂损伤;所述基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑;Sa‑SauriCas9为融合蛋白,把SaCas9的PAM识别结构域(PAM interacting,PI)替换为SauriCas9的PAM识别结构域(SauriCas9‑PI)。Sa‑SauriCas9蛋白小,为1056个氨基酸,识别的PAM序列简单,所述Sa‑SauriCas9蛋白具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列,所述sgRNA具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。本发明在基因编辑领域中具有广泛的应用前景。

    SlugCas9-HF蛋白、含有SlugCas9-HF蛋白的基因编辑系统及应用

    公开(公告)号:CN112159801B

    公开(公告)日:2022-11-15

    申请号:CN202011003871.0

    申请日:2020-09-22

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本申请涉及基因编辑技术领域,具体公开一种SlugCas9‑HF蛋白、含有该蛋白的重组载体、CRISPR/Cas9‑HF基因编辑系统及应用等。所述SlugCas9‑HF蛋白具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列或具有与SEQ ID NO:1至少80%相同、且至少保留了R247A、N415A、T421A及R656A中的一种或两种以上突变的氨基酸序列,所述该蛋白的重组载体是将编码SlugCas9‑HF蛋白氨基酸的基因序列连接到基础载体上而得,CRISPR/Cas9‑HF基因编辑系统由SlugCas9‑HF蛋白和sgRNA组成,其可以高特异性编辑靶基因,编辑效率高,脱靶率在2.87%以内。

    一种在细胞系中条件性敲除必需基因的方法

    公开(公告)号:CN109777830B

    公开(公告)日:2022-05-20

    申请号:CN201910022784.0

    申请日:2019-01-10

    Applicant: 复旦大学

    Inventor: 王永明 王贝

    Abstract: 本发明属于基因工程领域,具体为一种在细胞系中条件性敲除必需基因的方法。本发明首先构建双质粒系统:敲除质粒(KO质粒)编码用于敲除必需基因的Cas9和sgRNA,营救质粒(Rescue质粒)编码由Tet‑off系统调控的外源补偿基因,然后将两个质粒同时转入细胞后用药筛若干天,分选单克隆,通过测序鉴定,获得必需基因纯合敲除细胞系。本发明中可以通过加Doxcyclin关闭外源基因表达,以研究必需基因的功能。另外,本发明中Rescue质粒可以被另外一个含有不同抗性基因的Rescue2质粒替换,Rescue2质粒上编码必需基因的突变体,用以研究必需基因突变体的功能。本方法操作简单,实验周期短。

    CRISPR/Sa-SlutCas9基因编辑系统及其应用

    公开(公告)号:CN110577970A

    公开(公告)日:2019-12-17

    申请号:CN201910731398.9

    申请日:2019-08-08

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域,具体为一种CRISPR/Sa-SlutCas9基因编辑系统以及其应用。本发明基因编辑系统为Sa-SlutCas9蛋白与sgRNA形成的复合体,能精确靶向DNA序列,并产生切割,使DNA发生双链断裂损伤;所述基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑;Sa-SlutCas9为融合蛋白,把SaCas9的PAM识别结构域(PAM interacting,PI)替换为SlutCas9的PAM识别结构域(SlutCas9-PI)。Sa-SlutCas9蛋白小,为1056个氨基酸,识别的PAM序列简单,所述Sa-SlutCas9蛋白具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列,所述sgRNA具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。本发明在基因编辑领域中具有广泛的应用前景。

    CRISPR/ShaCas9基因编辑系统及其应用

    公开(公告)号:CN110551762A

    公开(公告)日:2019-12-10

    申请号:CN201910731794.1

    申请日:2019-08-08

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域,具体为一种CRISPR/ShaCas9基因编辑系统以及其应用。本发明基因编辑系统为ShaCas9蛋白与sgRNA形成的复合体,能精确靶向DNA序列,并产生切割,使DNA发生双链断裂损伤;所述基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑;ShaCas9蛋白小,为1055个氨基酸,识别的PAM序列简单,所述ShaCas9蛋白具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列,所述sgRNA具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。本发明在基因编辑领域中具有广泛的应用前景。

    CRISPR/SauriCas9基因编辑系统及其应用

    公开(公告)号:CN110499335A

    公开(公告)日:2019-11-26

    申请号:CN201910731803.7

    申请日:2019-08-08

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域,具体为一种CRISPR/SauriCas9基因编辑系统以及其应用。本发明基因编辑系统为SauriCas9蛋白与sgRNA形成的复合体,能精确靶向DNA序列,并产生切割,使DNA发生双链断裂损伤;所述基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑;SauriCas9蛋白小,为1061个氨基酸,识别的PAM序列简单,所述SauriCas9蛋白具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列,所述sgRNA具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。本发明在基因编辑领域中具有广泛的应用前景。

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