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公开(公告)号：CN102517268A
公开(公告)日：2012-06-27
申请号：CN201110437777.0
申请日：2011-12-23
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种碱性蛋白酶的生产方法，其中菌株的分类命名为嗜碱芽孢杆菌Bacillus alcalophilus，保藏编号为：CGMCC No.5313，本发明中发酵方法采用清液发酵与补料分批发酵相结合，将粗料棉籽饼粉制备为棉籽饼粉酶水解液，并采用流加碳氮源的发酵方式，有效的提高了发酵酶活，7L规模发酵罐酶活力达到41000U/mL，较原始7L规模发酵罐酶活力36000U/mL提高了13.9％，同时降低了后期酶分离纯化的难度，降低了生产成本，并获得良好的经济效益。
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公开(公告)号：CN102286440A
公开(公告)日：2011-12-21
申请号：CN201110206481.8
申请日：2011-07-22
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种高活力磷脂酶D及细胞表面展示磷脂酶D酵母全细胞催化剂的制备，属于用重组DNA技术定点突变野生型磷脂酶D，以改善其活性，并将突变后基因与酵母展示载体pPIC9K-Flo连接，将其在毕赤酵母细胞表面高效展示的方法，涉及具有高活力磷脂酶D及表面展示磷脂酶D酵母全细胞催化剂的制备方法。本发明提高了野生型磷脂酶D的活力，并将其展示在酵母细胞表面，提高其稳定性，具有固定化酶的优点。其技术方案是从微生物特别是色褐链霉菌中分离野生型磷脂酶D基因，对其Glu69、Ser285的氨基酸残基进行突变，经在毕赤酵母细胞表面高效表达，检测高活力磷脂酶D酶活较野生型磷脂酶D提高11％，重组菌株GS115/pPIC9K-Flo-pldm高密度发酵制备的全细胞催化剂酶活为120U/(g·干细胞)。
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公开(公告)号：CN102286440B
公开(公告)日：2012-11-21
申请号：CN201110206481.8
申请日：2011-07-22
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种高活力磷脂酶D及细胞表面展示磷脂酶D酵母全细胞催化剂的制备，属于用重组DNA技术定点突变野生型磷脂酶D，以改善其活性，并将突变后基因与酵母展示载体pPIC9K-Flo连接，将其在毕赤酵母细胞表面高效展示的方法，涉及具有高活力磷脂酶D及表面展示磷脂酶D酵母全细胞催化剂的制备方法。本发明提高了野生型磷脂酶D的活力，并将其展示在酵母细胞表面，提高其稳定性，具有固定化酶的优点。其技术方案是从微生物特别是色褐链霉菌中分离野生型磷脂酶D基因，对其Glu69、Ser285的氨基酸残基进行突变，经在毕赤酵母细胞表面高效表达，检测高活力磷脂酶D酶活较野生型磷脂酶D提高11％，重组菌株GS115/pPIC9K-Flo-pldm高密度发酵制备的全细胞催化剂酶活为120U/(g·干细胞)。
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公开(公告)号：CN102382786A
公开(公告)日：2012-03-21
申请号：CN201110333678.8
申请日：2011-10-28
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及碱性蛋白酶高产菌株及碱性蛋白酶，其中菌株的分类命名为嗜碱芽孢杆菌Bacillus alcalophilus，保藏编号为：CGMCC No.5313，保藏日期：2011年9月30日，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，酶由碱性蛋白酶高产菌株发酵得到。本发明中诱变获得的产碱性蛋白酶菌株是由嗜碱芽孢杆菌经过低能N+离子注入诱变而得的碱性蛋白酶高产菌株，有效地提高了菌株的产酶能力，其碱性蛋白酶的摇瓶活力最大值到30700U/mL，较出发菌株提高了37.7％。
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公开(公告)号：CN102277344A
公开(公告)日：2011-12-14
申请号：CN201110220386.3
申请日：2011-08-03
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种低温碱性蛋白酶及其制备方法，属于用重组DNA技术定点突变野生型碱性蛋白酶基因，以改善其特性，并将突变后基因与大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒pBE2S连接，将其在枯草芽孢杆菌中高效表达的方法，涉及具有适冷性及碱稳定性的低温碱性蛋白酶及其制备方法。本发明解决了碱性蛋白酶在低温环境下活性较低，以致应用受限的问题。其技术方案是从微生物特别是嗜碱芽孢杆菌分离野生型碱性蛋白酶基因，对其Glu110、Glu134的氨基酸残基进行突变，经在枯草芽孢杆菌中高效表达，检测其发酵液酶活力达到1985U/mL，在40℃下，该低温碱性蛋白酶(Glu110&134Ala)比野生型碱性蛋白酶活力提高了28％；在10℃下，比野生型碱性蛋白酶活力提高了62％。
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公开(公告)号：CN102277394B
公开(公告)日：2013-04-17
申请号：CN201110206069.6
申请日：2011-07-22
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种细胞表面展示磷脂酶D酵母全细胞催化剂催化制备磷脂酰丝氨酸的方法，步骤为：将全细胞催化剂加入含有丝氨酸、CaCl2、Triton-X100的醋酸缓冲液中，与含有卵磷脂的氯仿溶液混合均匀，在30℃下混合得到均匀的乳状液反应5-6小时；反应结束后静止自然分层，提取有机相；有机溶剂挥发后剩余物经氯仿洗涤两次，即可得到磷脂酰丝氨酸。本发明利用磷脂酶D的高度专一性，催化卵磷脂和丝氨酸生成磷脂酰丝氨酸，且全细胞催化剂具有固定化酶的优点，可重复使用，有效解决了目前提浸法和化学合成法存在的问题，制备工艺简单，适合工业化生产。
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公开(公告)号：CN102277344B
公开(公告)日：2012-12-12
申请号：CN201110220386.3
申请日：2011-08-03
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种低温碱性蛋白酶及其制备方法，属于用重组DNA技术定点突变野生型碱性蛋白酶基因，以改善其特性，并将突变后基因与大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒pBE2S连接，将其在枯草芽孢杆菌中高效表达的方法，涉及具有适冷性及碱稳定性的低温碱性蛋白酶及其制备方法。本发明解决了碱性蛋白酶在低温环境下活性较低，以致应用受限的问题。其技术方案是从微生物特别是嗜碱芽孢杆菌分离野生型碱性蛋白酶基因，对其Glu110、Glu134的氨基酸残基进行突变，经在枯草芽孢杆菌中高效表达，检测其发酵液酶活力达到1985U/mL，在40℃下，该低温碱性蛋白酶(Glu110&134Ala)比野生型碱性蛋白酶活力提高了28％；在10℃下，比野生型碱性蛋白酶活力提高了62％。
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公开(公告)号：CN102277394A
公开(公告)日：2011-12-14
申请号：CN201110206069.6
申请日：2011-07-22
申请人： 天津科技大学
摘要： 本发明涉及一种细胞表面展示磷脂酶D酵母全细胞催化剂催化制备磷脂酰丝氨酸的方法，步骤为：将全细胞催化剂加入含有丝氨酸、CaCl2、Triton-X100的醋酸缓冲液中，与含有卵磷脂的氯仿溶液混合均匀，在30℃下混合得到均匀的乳状液反应5-6小时；反应结束后静止自然分层，提取有机相；有机溶剂挥发后剩余物经氯仿洗涤两次，即可得到磷脂酰丝氨酸。本发明利用磷脂酶D的高度专一性，催化卵磷脂和丝氨酸生成磷脂酰丝氨酸，且全细胞催化剂具有固定化酶的优点，可重复使用，有效解决了目前提浸法和化学合成法存在的问题，制备工艺简单，适合工业化生产。
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