-
公开(公告)号:CN113564171A
公开(公告)日:2021-10-29
申请号:CN202111126097.7
申请日:2021-09-26
申请人: 奥锐特药业(天津)有限公司
IPC分类号: C12N15/113 , C12N1/21 , C12N15/70 , C12P21/00 , C07K14/605 , C12R1/19
摘要: 本发明公开了一种提高多肽可溶性表达产量的方法,具体包括以E.coliBL21(DE3)为出发菌株,利用CRISPRi技术抑制蛋白酶基因,减少蛋白酶的形成,从而减少蛋白酶对多肽片段的降解,进而间接提高多肽的产量;同时,采用融合表达,筛选出更适宜的linker显著增加融合蛋白的产量及可溶性,从而进一步提高多肽表达量。
-
公开(公告)号:CN113249241B
公开(公告)日:2021-10-15
申请号:CN202110682829.4
申请日:2021-06-21
申请人: 奥锐特药业(天津)有限公司
摘要: 本发明提供了一种酿酒酵母蛋白酶缺失菌株的构建及其应用。具体地,本发明提供了基因组中整合有表达外源蛋白的表达盒并且内源蛋白酶基因被敲除的重组酵母菌株,其中,所述的蛋白酶包括:Pep4、Yap3、Prb1和CYM1。本发明的重组酵母菌株可以高效分泌表达外源蛋白,具有广泛的应用前景。
-
公开(公告)号:CN113249241A
公开(公告)日:2021-08-13
申请号:CN202110682829.4
申请日:2021-06-21
申请人: 奥锐特药业(天津)有限公司
摘要: 本发明提供了一种酿酒酵母蛋白酶缺失菌株的构建及其应用。具体地,本发明提供了基因组中整合有表达外源蛋白的表达盒并且内源蛋白酶基因被敲除的重组酵母菌株,其中,所述的蛋白酶包括:Pep4、Yap3、Prb1和CYM1。本发明的重组酵母菌株可以高效分泌表达外源蛋白,具有广泛的应用前景。
-
公开(公告)号:CN113249288B9
公开(公告)日:2021-11-09
申请号:CN202110786966.2
申请日:2021-07-13
申请人: 奥锐特药业(天津)有限公司
IPC分类号: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/113 , C07K14/605 , C12R1/19
摘要: 本发明公开了一种高效表达胰高血糖素样肽1(GLP-1)或其类似物的重组菌。本发明的重组菌包括表达GLP-1或其类似物的载体以及干扰重组菌中蛋白酶表达的载体。其中干扰重组菌中蛋白酶表达的载体为通过RNA干扰的方法设计的干扰ClpA、ClpP、ClpQ、ClpX、ClpY、Dcp、PepD、HflB蛋白酶表达的表达载体。本发明通过对重组菌中蛋白酶的表达进行抑制干扰,可以有效解决GLP-1类似物发酵过程中被宿主菌的蛋白酶降解的问题,同时构建时加入亲水性氨基酸可显著增加蛋白可溶性,减少包涵体产生,可溶部分占比80%,从而将GLP-1类似物的表达量提高到2g/L以上。本发明的重组菌可高效表达GLP-1类似物融合蛋白,进而高效制备GLP-1类似物。
-
公开(公告)号:CN113249288B
公开(公告)日:2021-09-28
申请号:CN202110786966.2
申请日:2021-07-13
申请人: 奥锐特药业(天津)有限公司
IPC分类号: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/113 , C07K14/605 , C12R1/19
摘要: 本发明公开了一种高效表达胰高血糖素样肽1(GLP‑1)或其类似物的重组菌。本发明的重组菌包括表达GLP‑1或其类似物的载体以及干扰重组菌中蛋白酶表达的载体。其中干扰重组菌中蛋白酶表达的载体为通过RNA干扰的方法设计的干扰ClpA、ClpP、ClpQ、ClpX、ClpY、Dcp、PepD、HflB蛋白酶表达的表达载体。本发明通过对重组菌中蛋白酶的表达进行抑制干扰,可以有效解决GLP‑1类似物发酵过程中被宿主菌的蛋白酶降解的问题,同时构建时加入亲水性氨基酸可显著增加蛋白可溶性,减少包涵体产生,可溶部分占比80%,从而将GLP‑1类似物的表达量提高到2g/L以上。本发明的重组菌可高效表达GLP‑1类似物融合蛋白,进而高效制备GLP‑1类似物。
-
公开(公告)号:CN113249288A
公开(公告)日:2021-08-13
申请号:CN202110786966.2
申请日:2021-07-13
申请人: 奥锐特药业(天津)有限公司
IPC分类号: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/113 , C07K14/605 , C12R1/19
摘要: 本发明公开了一种高效表达胰高血糖素样肽1(GLP‑1)或其类似物的重组菌。本发明的重组菌包括表达GLP‑1或其类似物的载体以及干扰重组菌中蛋白酶表达的载体。其中干扰重组菌中蛋白酶表达的载体为通过RNA干扰的方法设计的干扰ClpA、ClpP、ClpQ、ClpX、ClpY、Dcp、PepD、HflB蛋白酶表达的表达载体。本发明通过对重组菌中蛋白酶的表达进行抑制干扰,可以有效解决GLP‑1类似物发酵过程中被宿主菌的蛋白酶降解的问题,同时构建时加入亲水性氨基酸可显著增加蛋白可溶性,减少包涵体产生,可溶部分占比80%,从而将GLP‑1类似物的表达量提高到2g/L以上。本发明的重组菌可高效表达GLP‑1类似物融合蛋白,进而高效制备GLP‑1类似物。
-
公开(公告)号:CN113564171B
公开(公告)日:2021-12-31
申请号:CN202111126097.7
申请日:2021-09-26
申请人: 奥锐特药业(天津)有限公司
IPC分类号: C12N15/113 , C12N1/21 , C12N15/70 , C12P21/00 , C07K14/605 , C12R1/19
摘要: 本发明公开了一种提高多肽可溶性表达产量的方法,具体包括以E.coliBL21(DE3)为出发菌株,利用CRISPRi技术抑制蛋白酶基因,减少蛋白酶的形成,从而减少蛋白酶对多肽片段的降解,进而间接提高多肽的产量;同时,采用融合表达,筛选出更适宜的linker显著增加融合蛋白的产量及可溶性,从而进一步提高多肽表达量。
-
公开(公告)号:CN112725211A
公开(公告)日:2021-04-30
申请号:CN202011502087.4
申请日:2020-12-18
申请人: 奥锐特药业(天津)有限公司 , 扬州联澳生物医药有限公司
摘要: 本发明公开了一种毕赤酵母重组菌、培养方法及用途,制备培养得到的重组酵母可高效表达GLP‑1类似物,进而高效制备GLP‑1类似物。
-
-
-
-
-
-
-