一种半滑舌鳎伪雄鱼性腺细胞系的构建与应用方法

    公开(公告)号:CN104152402A

    公开(公告)日:2014-11-19

    申请号:CN201410422656.2

    申请日:2014-08-26

    IPC分类号: C12N5/071 C12R1/91

    摘要: 本发明的目的在于提供一种海水经济鱼类半滑舌鳎伪雄鱼性腺组织细胞系的建立方法,从而建立半滑舌鳎伪雄鱼性腺组织细胞系,为研究半滑舌鳎性别分化和性别反转调控机制提供基础。本发明的构建方法是利用半滑舌鳎伪雄鱼性腺组织成功建立了半滑舌鳎伪雄鱼性腺细胞系,建立的细胞系可以连续传代,经过这种方法所获得的传代细胞可传60代以上,能提供大量的伪雄鱼性腺细胞。可广泛用于外源基因、质粒的转染,性别相关基因功能的研究,也可用于鱼类常见病毒的繁殖及病毒与细胞相互作用机制的研究,还可以进行环境污染物检测等,具有重要的实际应用价值。

    一种半滑舌鳎卵巢细胞系的构建与应用方法

    公开(公告)号:CN103756952A

    公开(公告)日:2014-04-30

    申请号:CN201410010517.9

    申请日:2014-01-09

    IPC分类号: C12N5/071

    摘要: 本发明的目的是提供半滑舌鳎卵巢组织细胞系的构建,包括如下的步骤:1)在无菌条件下去除半滑舌鳎卵巢组织最外层膜,在培养液中将组织剪成小块,将组织块用PBS溶液冲洗,再用胰蛋白酶溶液消化,胰酶消化后的溶液中含有细胞,细胞团和没有消化完全的组织块;2)将溶液离心去掉上清胰酶,用培养液悬浮细胞、细胞团和小组织块沉淀;制成悬液后,接种到用Ⅰ型胶原处理好的培养板中,添加培养液后置于24℃生化培养箱中培养,经过传代培养完成卵巢细胞系的构建。本发明的构建方法是利用半滑舌鳎卵巢组织成功建立了半滑舌鳎卵巢组织细胞系,建立的细胞系可以连续传代,经过这种方法所获得的传代细胞可传60代以上,能提供大量的卵巢细胞。

    半滑舌鳎精巢细胞系的构建与鉴定方法

    公开(公告)号:CN102304491A

    公开(公告)日:2012-01-04

    申请号:CN201110189213.X

    申请日:2011-07-07

    摘要: 本发明涉及一种半滑舌鳎精巢细胞系的构建与鉴定方法,采用MEM基础培养基添加20%的胎牛血清、0.1%的β-巯基乙醇、2ng/ml人碱性成纤维细胞生长因子、1ng/ml白血病抑制因子、1nmol的丙酮酸钠、1nmol的谷氨酰胺,配制成完全培养基,将组织块接种在培养瓶中,翻瓶倒置培养3h,待组织块贴壁后再正置培养瓶使组织块浸泡在培养基中培养。采用胰酶消化方法进行细胞的传代培养。采用上述方法建立半滑舌鳎精巢细胞系1个,已传代培养至第50代,同时本发明还提供了所构建细胞系的染色体和分子标记水平的鉴定方法,以及该细胞系对相关病毒敏感性的鉴定方法。本发明建立的半滑舌鳎精巢细胞系的构建方法可以应用于其它鱼类性腺细胞培养和细胞系建立,具有较为广泛的推广应用前景。

    半滑舌鳎性别特异分子标记及遗传性别鉴定方法

    公开(公告)号:CN1814793A

    公开(公告)日:2006-08-09

    申请号:CN200510045554.4

    申请日:2005-12-15

    IPC分类号: C12Q1/68

    摘要: 一种半滑舌鳎性别特异分子标记及遗传性别检测方法,它的方法是血液DNA的提取,基因组DNA的AFLP分析、性别特异AFLP分子标记的筛选以及半滑舌鳎遗传性别鉴定方法的建立。本发明确定了从半滑舌鳎血液中提取基因组DNA的条件和方法,建立了半滑舌鳎AFLP分析技术,从64个引物组合中筛选到4个引物组合能够产生雌性特异DNA片段,筛选出半滑舌鳎雌性特异的AFLP分子标记7个,创建了半滑舌鳎遗传性别鉴定的分子标记技术。本发明首次筛选到半滑舌鳎雌性特异AFLP分子标记,建立了半滑舌鳎遗传性别鉴定的分子标记技术。本发明方法具有先进、高效、准确、可靠的特点,在半滑舌鳎单性苗种生产中具有重要应用价值,同时在其它鱼类遗传性别鉴定和性别控制研究中也具有广阔应用前景。