公开(公告)号：CN118146391A

公开(公告)日：2024-06-07

申请号：CN202410286140.3

申请日：2024-03-13

Applicant: 安徽工程大学

Inventor： 刘坤 ,  薛正莲 ,  童珍 ,  张轩绮

IPC: C07K19/00 ,  C07K14/79 ,  C12N15/12 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  A61L15/36 ,  A61L15/32 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明涉及生物合成技术领域，具体涉及一种分泌表达人乳铁蛋白的毕赤酵母及其构建方法和应用。本发明首先筛选源自亚洲人种的乳铁蛋白氨基酸序列，基于已报道的不同人种的乳铁蛋白晶体结构，截断乳铁蛋白氨基酸端的信号肽序列。然后，筛选酵母表达分泌蛋白所用信号肽替换乳铁蛋白氨基端的信号肽，形成一条新的分泌型人乳铁蛋白氨基酸序列，并将该序列编码的基因通过CRISPR‑Cas9整合到毕赤酵母基因组位点。最后，通过优化人乳铁蛋白表达框的拷贝数，获得一株高效分泌表达人乳铁蛋白的毕赤酵母。本发明建立了一种高分泌表达人乳铁蛋白的毕赤酵母构建方法，为工业化制备人乳铁蛋白提供了一种非常有前景的工程菌株。