公开(公告)号：CN117551630A

公开(公告)日：2024-02-13

申请号：CN202311604003.1

申请日：2022-11-11

申请人： 山东理工大学 ,  山东金城生物药业有限公司

发明人： 马钦元 ,  王辉 ,  高秀珍 ,  张同 ,  沈剑 ,  荣金雷 ,  梁寒冰 ,  张成国

IPC分类号： C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/04 ,  C12R1/19

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种基于121位点的S‑腺苷蛋氨酸合成酶突变体及其应用。本发明S‑腺苷蛋氨酸合成酶突变体的野生菌来源于Guyparkeria sp.XI15，经定点突变获得与酶催化活性相关的核心氨基酸发生突变的突变体；在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第1至390位中仅存在下述之一的突变：D22S；G121D；D244A；K251I；G266S；A307S；其氨基酸序列为SEQ ID NO:3‑8之一所示；本发明的S‑腺苷蛋氨酸合成酶突变体实现了在S‑腺苷蛋氨酸生物合成中的应用，使得S‑腺苷蛋氨酸的产率能够达到25.7g/L、过程产品纯度能够达到89.7%。

公开(公告)号：CN117535263A

公开(公告)日：2024-02-09

申请号：CN202311603842.1

申请日：2022-11-11

申请人： 山东理工大学 ,  山东金城生物药业有限公司

发明人： 马钦元 ,  王辉 ,  高秀珍 ,  张同 ,  沈剑 ,  荣金雷 ,  梁寒冰 ,  张成国

IPC分类号： C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/04 ,  C12R1/19

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种基于297位点的S‑腺苷蛋氨酸合成酶突变体及其应用。本发明S‑腺苷蛋氨酸合成酶突变体的野生菌来源于Guyparkeria sp.XI15，经定点突变获得与酶催化活性相关的核心氨基酸发生突变的突变体；在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第1至390位中仅存在下述之一的突变：D22S；G123D；D244A；K251I；G266S；A297S；其氨基酸序列为SEQ ID NO:3‑8之一所示；本发明的S‑腺苷蛋氨酸合成酶突变体实现了在S‑腺苷蛋氨酸生物合成中的应用，使得S‑腺苷蛋氨酸的产率能够达到25.7g/L、过程产品纯度能够达到89.7%。

公开(公告)号：CN118308282B

公开(公告)日：2024-09-03

申请号：CN202410740819.5

申请日：2024-06-11

申请人： 山东金城生物药业有限公司 ,  山东理工大学

发明人： 马钦元 ,  杨绍梅 ,  王辉 ,  高秀珍 ,  张同 ,  付首颖 ,  李莹 ,  金伟 ,  王宾 ,  冯旭

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12P19/30 ,  C12R1/125

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种以葡萄糖为底物从头合成胞磷胆碱的重组工程菌、制备方法及应用。本发明所提供的重组工程菌具体是：以BS168N为出发菌，首先将S.cerevisiae来源的磷脂酰乙醇胺N‑甲基转移酶基因PEM1和磷脂酰‑N‑乙醇胺N‑甲基转移酶基因PEM2整合到BS168N的基因组上进行诱导表达，打通磷脂酰乙醇胺到磷脂酰胆碱的合成通路；随后，将S.cerevisiae的CKI和CCT基因继续整合到表达PEM1‑PEM2的BS168N基因组上，打通胆碱到CDPC的合成通路，获得所述的重组工程菌，进一步将该重组工程菌进行摇瓶发酵，即可实现以葡萄糖为底物从头合成胞磷胆碱。本发明的方法为将来工业上通过合成生物学手段，构建从头高效合成胞磷胆碱的细胞工厂提供了基础研究和理论依据。

公开(公告)号：CN116790466B

公开(公告)日：2023-11-03

申请号：CN202310882430.X

申请日：2023-07-19

申请人： 山东理工大学 ,  山东金城生物药业有限公司

发明人： 杨绍梅 ,  马钦元 ,  王辉 ,  高秀珍 ,  崔希礼 ,  张同 ,  马志鑫 ,  沈剑

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/54 ,  C12N15/31 ,  C12P19/30 ,  C12R1/125

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种工程改造枯草芽孢杆菌发酵生产胞磷胆碱的方法。本发明以枯草芽孢杆菌为底盘，首先在枯草芽孢杆菌基因组上共表达酿酒酵母的胆碱激酶基因CKI和磷酸胆碱胞苷酰转移酶基因CCT，向发酵培养基中添加前体物氯化胆碱和5'‑胞苷单磷酸，然后整合表达内源的甘氨酸甜菜碱和砷酸甜菜碱转运蛋白基因opuD，最后缺陷5′‑核苷酸酶YfkN，以期减少CMP到胞苷的合成。结果表明：经本发明工程改造之后获得的枯草芽孢杆菌能够发酵合成胞磷胆碱，具有精确修饰目标基因、次级突变概率低、遗传育种周期短的优势，本发明的方法为将来工业上通过合成生物学手段，构建高效合成胞磷胆碱的枯细胞工厂提供了基础研究和理论依据。

公开(公告)号：CN116790466A

公开(公告)日：2023-09-22

申请号：CN202310882430.X

申请日：2023-07-19

申请人： 山东理工大学 ,  山东金城生物药业有限公司

发明人： 杨绍梅 ,  马钦元 ,  王辉 ,  高秀珍 ,  崔希礼 ,  张同 ,  马志鑫 ,  沈剑

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/54 ,  C12N15/31 ,  C12P19/30 ,  C12R1/125

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种工程改造枯草芽孢杆菌发酵生产胞磷胆碱的方法。本发明以枯草芽孢杆菌为底盘，首先在枯草芽孢杆菌基因组上共表达酿酒酵母的胆碱激酶基因CKI和磷酸胆碱胞苷酰转移酶基因CCT，向发酵培养基中添加前体物氯化胆碱和5'‑胞苷单磷酸，然后整合表达内源的甘氨酸甜菜碱和砷酸甜菜碱转运蛋白基因opuD，最后缺陷5′‑核苷酸酶YfkN，以期减少CMP到胞苷的合成。结果表明：经本发明工程改造之后获得的枯草芽孢杆菌能够发酵合成胞磷胆碱，具有精确修饰目标基因、次级突变概率低、遗传育种周期短的优势，本发明的方法为将来工业上通过合成生物学手段，构建高效合成胞磷胆碱的枯细胞工厂提供了基础研究和理论依据。

公开(公告)号：CN116042561B

公开(公告)日：2023-10-24

申请号：CN202211409009.9

申请日：2022-11-11

申请人： 山东理工大学 ,  山东金城生物药业有限公司

发明人： 马钦元 ,  王辉 ,  高秀珍 ,  张同 ,  沈剑 ,  荣金雷 ,  梁寒冰 ,  张成国

IPC分类号： C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种S‑腺苷蛋氨酸合成酶突变体及其应用。本发明S‑腺苷蛋氨酸合成酶突变体的野生菌来源于Guyparkeria sp.XI15，经定点突变获得与酶催化活性相关的核心氨基酸发生突变的突变体；在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第1至390位中仅存在下述之一的突变：D22S；G123D；D244A；K251I；G266S；A307S；其氨基酸序列为SEQ ID NO:3‑8之一所示；本发明的S‑腺苷蛋氨酸合成酶突变体实现了在S‑腺苷蛋氨酸生物合成中的应用，使得S‑腺苷蛋氨酸的产率能够达到25.7g/L、过程产品纯度能够达到89.7%。

公开(公告)号：CN116042561A

公开(公告)日：2023-05-02

申请号：CN202211409009.9

申请日：2022-11-11

申请人： 山东理工大学 ,  山东金城生物药业有限公司

发明人： 马钦元 ,  王辉 ,  高秀珍 ,  张同 ,  沈剑 ,  荣金雷 ,  梁寒冰 ,  张成国

IPC分类号： C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种S‑腺苷蛋氨酸合成酶突变体及其应用。本发明S‑腺苷蛋氨酸合成酶突变体的野生菌来源于Guyparkeria sp.XI15，经定点突变获得与酶催化活性相关的核心氨基酸发生突变的突变体；在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第1至390位中仅存在下述之一的突变：D22S；G123D；D244A；K251I；G266S；A307S；其氨基酸序列为SEQ ID NO:3‑8之一所示；本发明的S‑腺苷蛋氨酸合成酶突变体实现了在S‑腺苷蛋氨酸生物合成中的应用，使得S‑腺苷蛋氨酸的产率能够达到25.7g/L、过程产品纯度能够达到89.7%。

公开(公告)号：CN118308282A

公开(公告)日：2024-07-09

申请号：CN202410740819.5

申请日：2024-06-11

申请人： 山东金城生物药业有限公司 ,  山东理工大学

发明人： 马钦元 ,  杨绍梅 ,  王辉 ,  高秀珍 ,  张同 ,  付首颖 ,  李莹 ,  金伟 ,  王宾 ,  冯旭

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12P19/30 ,  C12R1/125

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种以葡萄糖为底物从头合成胞磷胆碱的重组工程菌、制备方法及应用。本发明所提供的重组工程菌具体是：以BS168N为出发菌，首先将S.cerevisiae来源的磷脂酰乙醇胺N‑甲基转移酶基因PEM1和磷脂酰‑N‑乙醇胺N‑甲基转移酶基因PEM2整合到BS168N的基因组上进行诱导表达，打通磷脂酰乙醇胺到磷脂酰胆碱的合成通路；随后，将S.cerevisiae的CKI和CCT基因继续整合到表达PEM1‑PEM2的BS168N基因组上，打通胆碱到CDPC的合成通路，获得所述的重组工程菌，进一步将该重组工程菌进行摇瓶发酵，即可实现以葡萄糖为底物从头合成胞磷胆碱。本发明的方法为将来工业上通过合成生物学手段，构建从头高效合成胞磷胆碱的细胞工厂提供了基础研究和理论依据。

公开(公告)号：CN117551629A

公开(公告)日：2024-02-13

申请号：CN202311603692.4

申请日：2022-11-11

申请人： 山东理工大学 ,  山东金城生物药业有限公司

发明人： 马钦元 ,  王辉 ,  高秀珍 ,  张同 ,  沈剑 ,  荣金雷 ,  梁寒冰 ,  张成国

IPC分类号： C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/04 ,  C12R1/19

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种基于244位点的S‑腺苷蛋氨酸合成酶突变体及其应用。本发明S‑腺苷蛋氨酸合成酶突变体的野生菌来源于Guyparkeria sp.XI15，经定点突变获得与酶催化活性相关的核心氨基酸发生突变的突变体；在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第1至390位中仅存在下述之一的突变：D22S；G123D；D244A；K251I；G266S；A307S；其氨基酸序列为SEQ ID NO:3‑8之一所示；本发明的S‑腺苷蛋氨酸合成酶突变体实现了在S‑腺苷蛋氨酸生物合成中的应用，使得S‑腺苷蛋氨酸的产率能够达到25.7g/L、过程产品纯度能够达到89.7%。

公开(公告)号：CN117511904A

公开(公告)日：2024-02-06

申请号：CN202311603526.4

申请日：2022-11-11

申请人： 山东理工大学 ,  山东金城生物药业有限公司

发明人： 马钦元 ,  王辉 ,  高秀珍 ,  张同 ,  沈剑 ,  荣金雷 ,  梁寒冰 ,  张成国

IPC分类号： C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P13/04 ,  C12R1/19

摘要： 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种基于251位点的S‑腺苷蛋氨酸合成酶突变体及其应用。本发明S‑腺苷蛋氨酸合成酶突变体的野生菌来源于Guyparkeria sp.XI15，经定点突变获得与酶催化活性相关的核心氨基酸发生突变的突变体；在对应于SEQ ID NO:1的氨基酸序列的第1至390位中仅存在下述之一的突变：D22S；G123D；D244A；K251I；G266S；A307S；其氨基酸序列为SEQ ID NO:3‑8之一所示；本发明的S‑腺苷蛋氨酸合成酶突变体实现了在S‑腺苷蛋氨酸生物合成中的应用，使得S‑腺苷蛋氨酸的产率能够达到25.7g/L、过程产品纯度能够达到89.7%。