一种调控PCV2病毒增殖的序列及其应用

    公开(公告)号:CN110055251B

    公开(公告)日:2022-05-27

    申请号:CN201910336909.7

    申请日:2019-04-25

    摘要: 本发明提供了一种调控PCV2病毒增殖的gRNAs序列。本发明设计了与PCV2复制相关的8个gRNA靶向片段:gRNA‑Oc8,gRNA‑O13,gRNA‑O134,gRNA‑O26,gRNA‑NPS,gRNA‑NQT和gRNA‑NAT,分别靶向PCV2复制起点的八聚体结构、ORF1和ORF3的重叠区、ORF1,ORF3和ORF4的重叠区、ORF2和ORF6的重叠区、ORF1的23‑25aa糖基化位点、ORF1的256‑258aa糖基化位点及ORF1的286‑288aa糖基化位点。以pX458为表达载体,获得PCV2 Cas9/gRNAs重组质粒,并对阳性Cas9/gRNAs克隆进行了测序鉴定。同时,成功得到以PCV2 Cas9/gRNAs重组质粒转染的PK‑15细胞系,且PCV2 Cas9/gRNAs重组质粒能对PCV2基因组进行有效编辑,并抑制PCV2在PK‑15细胞内的增殖复制。