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公开(公告)号：CN110628796B
公开(公告)日：2023-03-24
申请号：CN201910418664.2
申请日：2019-05-20
申请人： 广东海洋大学深圳研究院 , 广东海洋大学 , 深圳义海生物科技有限公司
摘要： 本发明提供了鱼类诺卡氏菌病共同抗原DNA疫苗及其制备和应用，制备方法包括：运用双向电泳技术，比较这三种鱼类诺卡氏菌的免疫印迹结果，根据等电点和分子量筛选共同免疫印迹蛋白点；根据共同抗原的等电点和分子量大小，切下相应的蛋白点进行质谱分析及N端测序；结合质谱分析和蛋白测序，鉴定出共同抗原的编码基因；根据共同抗原编码基因，以及反向疫苗学预测的疫苗候选共同抗原的编码基因，两者相互印证后选定共同抗原候选基因；根据共同抗原候选基因的序列设计引物，克隆到载体中，获得真核表达重组质粒。本发明制备的DNA疫苗对鱼类诺卡氏菌病有不同程度的防治作用。
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公开(公告)号：CN110628796A
公开(公告)日：2019-12-31
申请号：CN201910418664.2
申请日：2019-05-20
申请人： 广东海洋大学深圳研究院 , 广东海洋大学 , 深圳义海生物科技有限公司
摘要： 本发明提供了鱼类诺卡氏菌病共同抗原DNA疫苗及其制备和应用，制备方法包括：运用双向电泳技术，比较这三种鱼类诺卡氏菌的免疫印迹结果，根据等电点和分子量筛选共同免疫印迹蛋白点；根据共同抗原的等电点和分子量大小，切下相应的蛋白点进行质谱分析及N端测序；结合质谱分析和蛋白测序，鉴定出共同抗原的编码基因；根据共同抗原编码基因，以及反向疫苗学预测的疫苗候选共同抗原的编码基因，两者相互印证后选定共同抗原候选基因；根据共同抗原候选基因的序列设计引物，克隆到载体中，获得真核表达重组质粒。本发明制备的DNA疫苗对鱼类诺卡氏菌病有不同程度的防治作用。
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公开(公告)号：CN113005069B
公开(公告)日：2023-09-26
申请号：CN202110121677.0
申请日：2021-01-28
申请人： 广东海洋大学 , 广东海洋大学深圳研究院 , 深圳义海生物科技有限公司
摘要： 本发明适用于基因工程技术领域，提供了一种减毒鰤鱼诺卡氏菌及其制备方法和应用，该减毒鰤鱼诺卡氏菌为缺失血红素蛋白相关蛋白基因的鰤鱼诺卡氏菌菌株；其中，血红素蛋白相关蛋白基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示，血红素蛋白相关蛋白基因对应的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。本发明提供的减毒鰤鱼诺卡氏菌，可用作疫苗或免疫佐剂；其通过基因敲除的方法缺失血红素蛋白相关蛋白基因后，能有效降低细菌的致病性，但仍保留了较好的免疫原性。另外，由于本发明是在鰤鱼诺卡氏菌基因组上直接进行敲除，菌内不含抗性质粒，符合生物安全，并且不会因为质粒的丢失而影响鰤鱼诺卡氏菌的生长。
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公开(公告)号：CN116083448A
公开(公告)日：2023-05-09
申请号：CN202211464980.1
申请日：2022-11-22
申请人： 广东海洋大学 , 广东海洋大学深圳研究院 , 深圳义海生物科技有限公司
IPC分类号： C12N15/31 , C12N15/54 , C12N15/53 , C12N15/60 , C12N15/52 , C40B30/04 , C12N15/10 , C12N15/85 , A61K39/05 , A61P31/04
摘要： 本发明公开了鰤鱼诺卡氏菌体内诱生抗原的体内诱导基因和筛选方法及其疫苗的制备，利用IVIAT技术获得六个鰤鱼诺卡氏菌体内诱生抗原的体内诱导基因，基于体内诱生抗原制备疫苗，对防治诺卡氏菌病具有一定的免疫保护效果。本发明具有成产成本低廉、易于组成多价疫苗、可诱导机体同时产生体液免疫和细胞免疫、安全性较好等优点，能进一步促进诺卡氏菌致病机制的理解，在建立筛选诺卡氏菌病疫苗抗原候选分子的新途径中具有良好的应用。
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公开(公告)号：CN110129228A
公开(公告)日：2019-08-16
申请号：CN201910409358.2
申请日：2019-05-16
申请人： 广东海洋大学深圳研究院 , 广东海洋大学 , 深圳义海生物科技有限公司
摘要： 本发明提供一种诺卡氏菌感受态细胞的制备方法与诺卡氏菌基因编辑方法。本发明的诺卡氏菌感受态细胞的制备方法采用溶菌酶对诺卡氏菌进行处理，从而降低了诺卡氏菌细胞壁的厚度，最终制备出容易接受外源DNA的诺卡氏菌感受态细胞，该方法操作简便快捷，具有较高的应用价值。本发明的诺卡氏菌基因编辑方法首次将CRISPR/Cas9系统运用到诺卡氏菌中，构建了CRISPR/Cas9基因编辑质粒并将其转化进入诺卡氏菌对目的基因进行编辑，该方法操作简便快捷，具有较高的应用价值，为研究诺卡氏菌基因功能、构建诺卡氏菌基因缺失株以及制备诺卡氏菌基因缺失株疫苗奠定了基础。
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公开(公告)号：CN109575116A
公开(公告)日：2019-04-05
申请号：CN201811330295.3
申请日：2018-11-09
申请人： 广东海洋大学 , 广东海洋大学深圳研究院
IPC分类号： C07K14/47 , C07K19/00 , C12N15/12 , C12N15/62 , C12N15/85 , G01N33/68 , A61K47/42 , A61P35/00 , A61P7/00 , A61P31/12 , A61P33/00 , A61P31/04
摘要： 本发明公开了一种线粒体定位导肽及其编码序列和应用。本发明提供的线粒体定位信号肽，为如下(a)或(b)：(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的多肽；(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有线粒体定位导肽功能的由序列1衍生的多肽。本发明提供了一种线粒体定位导肽及其编码序列。本发明提供的线粒体定位导肽可将目标蛋白靶向定位于真核细胞线粒体上。将本发明提供的线粒体定位导肽和适宜的目标蛋白形成融合蛋白，可以得到用于治疗遗传病、恶性肿瘤、血液病，病毒、寄生虫、细菌感染等疾病的疫苗和药物，并实现高效定向给药。本发明对于生物技术领域和医药领域具有重大价值。
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公开(公告)号：CN110129228B
公开(公告)日：2023-06-06
申请号：CN201910409358.2
申请日：2019-05-16
申请人： 广东海洋大学深圳研究院 , 广东海洋大学 , 深圳义海生物科技有限公司
摘要： 本发明提供一种诺卡氏菌感受态细胞的制备方法与诺卡氏菌基因编辑方法。本发明的诺卡氏菌感受态细胞的制备方法采用溶菌酶对诺卡氏菌进行处理，从而降低了诺卡氏菌细胞壁的厚度，最终制备出容易接受外源DNA的诺卡氏菌感受态细胞，该方法操作简便快捷，具有较高的应用价值。本发明的诺卡氏菌基因编辑方法首次将CRISPR/Cas9系统运用到诺卡氏菌中，构建了CRISPR/Cas9基因编辑质粒并将其转化进入诺卡氏菌对目的基因进行编辑，该方法操作简便快捷，具有较高的应用价值，为研究诺卡氏菌基因功能、构建诺卡氏菌基因缺失株以及制备诺卡氏菌基因缺失株疫苗奠定了基础。
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公开(公告)号：CN109575116B
公开(公告)日：2022-04-22
申请号：CN201811330295.3
申请日：2018-11-09
申请人： 广东海洋大学 , 广东海洋大学深圳研究院
IPC分类号： C07K14/47 , C07K19/00 , C12N15/12 , C12N15/62 , C12N15/85 , G01N33/68 , A61K47/42 , A61P35/00 , A61P7/00 , A61P31/12 , A61P33/00 , A61P31/04
摘要： 本发明公开了一种线粒体定位导肽及其编码序列和应用。本发明提供的线粒体定位信号肽，为如下(a)或(b)：(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的多肽；(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有线粒体定位导肽功能的由序列1衍生的多肽。本发明提供了一种线粒体定位导肽及其编码序列。本发明提供的线粒体定位导肽可将目标蛋白靶向定位于真核细胞线粒体上。将本发明提供的线粒体定位导肽和适宜的目标蛋白形成融合蛋白，可以得到用于治疗遗传病、恶性肿瘤、血液病，病毒、寄生虫、细菌感染等疾病的疫苗和药物，并实现高效定向给药。本发明对于生物技术领域和医药领域具有重大价值。
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公开(公告)号：CN113005069A
公开(公告)日：2021-06-22
申请号：CN202110121677.0
申请日：2021-01-28
申请人： 广东海洋大学 , 广东海洋大学深圳研究院 , 深圳义海生物科技有限公司
摘要： 本发明适用于基因工程技术领域，提供了一种减毒鰤鱼诺卡氏菌及其制备方法和应用，该减毒鰤鱼诺卡氏菌为缺失血红素蛋白相关蛋白基因的鰤鱼诺卡氏菌菌株；其中，血红素蛋白相关蛋白基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示，血红素蛋白相关蛋白基因对应的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。本发明提供的减毒鰤鱼诺卡氏菌，可用作疫苗或免疫佐剂；其通过基因敲除的方法缺失血红素蛋白相关蛋白基因后，能有效降低细菌的致病性，但仍保留了较好的免疫原性。另外，由于本发明是在鰤鱼诺卡氏菌基因组上直接进行敲除，菌内不含抗性质粒，符合生物安全，并且不会因为质粒的丢失而影响鰤鱼诺卡氏菌的生长。
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公开(公告)号：CN113862277A
公开(公告)日：2021-12-31
申请号：CN202111340895.X
申请日：2021-11-12
申请人： 广东海洋大学深圳研究院 , 深圳义海生物科技有限公司
IPC分类号： C12N15/12 , C07K14/46 , C12N15/81 , C12N15/66 , C12N1/19 , C12P21/02 , A61K38/17 , A61P31/04 , A23K20/147 , A23K20/195 , A23K50/80 , C12R1/84
摘要： 本发明公开了一种斜带石斑鱼抗菌肽NK‑Lysin成熟肽重组蛋白制备方法和应用，通过编码斜带石斑鱼抗菌肽NK‑Lysin基因的ORF获得斜带石斑鱼抗菌肽NK‑Lysin成熟肽蛋白，并利用斜带石斑鱼抗菌肽NK‑Lysin成熟肽蛋白构建能够大量表达斜带石斑鱼抗菌肽NK‑Lysin成熟肽重组蛋白的重组毕赤酵母GS115菌株，获得的斜带石斑鱼抗菌肽NK‑Lysin成熟肽重组蛋白纯化后能够制备抗革兰氏阳性和/或革兰氏阴性菌的水产养殖饲料添加剂或抗菌药物或日化用品添加剂。
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