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公开(公告)号：CN103937746A
公开(公告)日：2014-07-23
申请号：CN201410097949.8
申请日：2014-03-18
申请人： 广东温氏食品集团股份有限公司
摘要： 本发明公开了一种制备动物转基因阳性单细胞克隆的方法，步骤为：（1）构建包括目的基因、荧光标记基因和药物筛选标记基因的质粒；（2）质粒转染已培养至对数生长期的宿主动物细胞；（3）经转染的细胞生长恢复后，进行消化、离心和重悬稀释，再置于荧光显微镜下，用内径20~80μm的吸针吸取表达荧光标记基因的单个细胞，分别接种至不同份的细胞培养基中；（4）各单个细胞生长成克隆团后，消化其中稳定表达荧光标记基因的细胞克隆团进行传代扩增，即得到转基因阳性单细胞的克隆。该方法转基因阳性单个细胞分离和接种技术操作简单快速、克隆形成率高，大大简化了不同转基因动物个体的检测鉴定工作，降低检测成本，省时省力。
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公开(公告)号：CN108060117A
公开(公告)日：2018-05-22
申请号：CN201711245659.3
申请日：2017-12-01
申请人： 广东温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC分类号： C12N5/073
CPC分类号： C12N5/0604 , C12N2500/84
摘要： 本发明涉及动物克隆方法领域，具体涉及一种提高猪克隆胚胎发育效率的方法。本发明方法主要包括在猪克隆胚胎的基础培养液中添加母猪的子宫液。本发明方法显著提高了克隆胚胎早期发育的囊胚率和囊胚内总细胞数。通过早期胚胎的转录组测序结果显示添加母猪子宫液培养使克隆胚胎与正常体内受精胚胎之间的差异表达基因数目减少。最为重要的是，通过添加母猪子宫液还提高了克隆胚胎的受体母猪的分娩率和窝均活仔数，表明本发明方法有效地提高了克隆胚胎体内发育的最终效率。
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公开(公告)号：CN107937558A
公开(公告)日：2018-04-20
申请号：CN201711123554.0
申请日：2017-11-14
申请人： 广东温氏食品集团股份有限公司
IPC分类号： C12Q1/6888 , C12N15/11
CPC分类号： C12Q1/6888 , C12Q2600/124 , C12Q2600/156
摘要： 本发明涉及SNP位点，具体公开了一个与猪平均日采食量相关的SNP位点(Chr1：42212110)及其应用。本发明通过测定并记录杜洛克猪的平均日采食量，利用优化的GBS技术对3702头杜洛克猪体进行猪平均日采食量GWAS研究，得到了一个与猪平均日采食量显著相关的SNP(Chr1：42212110)位点。统计该SNP位点在重测序的地方猪种(金华猪、五指山猪、陆川猪、梅山猪、荣昌猪、莱芜猪、二花脸猪、河套猪和民猪)与商品猪种(杜洛克猪、长白猪、约克夏猪和杜长大猪)中的SNP频率，发现其SNP频率分布在地方猪种和商品猪种中存在显著差异，商品猪中G为优势等位基因，地方猪中A为优势等位基因，为猪的标记辅助选择提供了科学依据。
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公开(公告)号：CN104946581B
公开(公告)日：2017-10-13
申请号：CN201510210334.6
申请日：2015-04-28
申请人： 广东温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC分类号： C12N5/0735
摘要： 本发明公开了一种培养猪滋养层干细胞的专用培养基及方法，该专用培养基成分包括bFGF、activin A、Y27632、Knockout SR和β‑巯基乙醇。培养方法是将干细胞培养器皿预先用细胞外基质包被；然后将猪囊胚用蛋白酶消化去除透明带，转入干细胞培养器皿中，添加本发明的专用培养基；培养至形成总细胞数为1000~2000个的滋养层干细胞克隆团时，消化成单细胞，转入新的经细胞外基质包被的培养器皿进行细胞的传代培养。本发明的专用培养基成分确定，使用安全性高，避免异源细胞的污染。培养方法简单高效，对猪滋养层干细胞培养具有克隆形成率高、细胞凋亡率低、增殖传代能力强和安全稳定的优点。
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公开(公告)号：CN102943093B
公开(公告)日：2014-02-12
申请号：CN201210474265.6
申请日：2012-11-20
申请人： 广东温氏食品集团股份有限公司
IPC分类号： C12N15/877
摘要： 本发明公开了一种提高猪体细胞核移植效率的方法，包括以下步骤：S1、选择和培养卵母细胞；S2、分离和培养供体细胞；S3、采用盲吸法去除成熟卵母细胞核及第一极体，注入一个供体细胞于卵周隙中；电融合重构胚并激活重构胚；S4、将重构胚置于含有浓度为100-200μM的RG108和浓度为100-500nM的Scriptaid的PZM-3培养液中培养14-16小时，再将重构胚置于PZM-3培养液中培养；本发明能显著提高猪克隆早期胚胎的发育囊胚率和囊胚质量；同时调节存在紧密联系和协同作用的基因甲基化和乙酰化两大表观遗传修饰，比单独用Scriptaid处理的效果更好，能调节胚胎早期基因表达趋于正常，最终提高猪体细胞核移植效率。
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公开(公告)号：CN102943093A
公开(公告)日：2013-02-27
申请号：CN201210474265.6
申请日：2012-11-20
申请人： 广东温氏食品集团股份有限公司
IPC分类号： C12N15/877
摘要： 本发明公开了一种提高猪体细胞核移植效率的方法，包括以下步骤：S1、选择和培养卵母细胞；S2、分离和培养供体细胞；S3、采用盲吸法去除成熟卵母细胞核及第一极体，注入一个供体细胞于卵周隙中；电融合重构胚并激活重构胚；S4、将重构胚置于含有浓度为100-200μM的RG108和浓度为100-500nM的Scriptaid的PZM-3培养液中培养14-16小时，再将重构胚置于PZM-3培养液中培养；本发明能显著提高猪克隆早期胚胎的发育囊胚率和囊胚质量；同时调节存在紧密联系和协同作用的基因甲基化和乙酰化两大表观遗传修饰，比单独用Scriptaid处理的效果更好，能调节胚胎早期基因表达趋于正常，最终提高猪体细胞核移植效率。
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公开(公告)号：CN107828896A
公开(公告)日：2018-03-23
申请号：CN201711122292.6
申请日：2017-11-14
申请人： 广东温氏食品集团股份有限公司
IPC分类号： C12Q1/6888 , C12N15/11
CPC分类号： C12Q1/6888 , C12Q2600/124 , C12Q2600/156
摘要： 本发明提供一种与猪达100kg体重日龄相关的SNP分子标记及其应用。通过优化的GBS技术对3702头具有重要经济性能记录的杜洛克猪群体进行GWAS研究，通过对GWAS结果的分析得到一个影响猪100kg体重日龄的SNP(chr1：179368307)位点，对这个位点在中国地方猪种及商品猪种中进行SNP频率分析，发现其SNP频率分布在地方猪种和商品猪种中存在显著差异，商品猪中A为优势等位基因，地方猪中G为优势等位基因。商品猪生长速度要高于地方猪种，说明该SNP位点可作为分子标记应用于优良猪种的选育。在生长速度慢的群体中，通过选择等位基因A的个体进行育种，可以提高猪群体的生长速度。
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公开(公告)号：CN108285906A
公开(公告)日：2018-07-17
申请号：CN201711477805.5
申请日：2017-12-29
申请人： 广东温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC分类号： C12N15/85 , C12N5/10 , A01K67/027
CPC分类号： C12N15/85 , A01K67/0275 , A01K2227/108 , A01K2267/02
摘要： 本发明公开了一种定点整合外源DNA转基因猪的构建方法，包括以下步骤：S1、安全靶点筛选及靶点绑定gRNA切割效率验证；S2、构建同源臂供体质粒，并获得定点整合转基因细胞系；S3、外源DNA定点整合转基因猪的构建。本发明在供体质粒中引入gRNA靶点序列，利用细胞内转录gRNA诱导Cas9核酸酶切割靶基因同时，线性化供体质粒，大大简化试验步骤，节约人力，且有利于提高共转染效率。本发明定点整合所用载体较少，同源臂大小适中，更有利于获得转基因细胞系，将高效定点整合技术，高活力定点转基因细胞培育技术与体细胞克隆技术结合，有利于定点整合转基因动物高效制备，加快转基因动物新品种培育速度。
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公开(公告)号：CN107828898A
公开(公告)日：2018-03-23
申请号：CN201711123466.0
申请日：2017-11-14
申请人： 广东温氏食品集团股份有限公司
IPC分类号： C12Q1/6888 , C12N15/11
CPC分类号： C12Q1/6888 , C12Q2600/124 , C12Q2600/156 , C12Q2600/172
摘要： 本发明提供一种与猪100kg体重背膘厚相关的SNP分子标记及其应用。通过优化的GBS技术对3702头具有重要经济性能记录的杜洛克猪群体进行GWAS研究，通过对GWAS结果的分析得到一个影响猪100kg体重背膘厚的SNP(chr1：177645657)位点，对这个位点在中国地方猪种及商品猪种中进行SNP频率分析，发现其SNP频率分布在地方猪种和商品猪种中存在显著差异，商品猪中C为优势等位基因，地方猪中T为优势等位基因。商品猪瘦肉率要高于地方猪种，说明该SNP位点可作为分子标记应用于优良猪种的选育。在瘦肉率低的群体中，通过选择等位基因C的个体进行育种，可以提高群体的瘦肉率。
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公开(公告)号：CN104946581A
公开(公告)日：2015-09-30
申请号：CN201510210334.6
申请日：2015-04-28
申请人： 广东温氏食品集团股份有限公司 , 华南农业大学
IPC分类号： C12N5/0735
摘要： 本发明公开了一种培养猪滋养层干细胞的专用培养基及方法，该专用培养基成分包括bFGF、activin A、Y27632、Knockout SR和β-巯基乙醇 。培养方法是将干细胞培养器皿预先用细胞外基质包被；然后将猪囊胚用蛋白酶消化去除透明带，转入干细胞培养器皿中，添加本发明的专用培养基；培养至形成总细胞数为1000~2000个的滋养层干细胞克隆团时，消化成单细胞，转入新的经细胞外基质包被的培养器皿进行细胞的传代培养。本发明的专用培养基成分确定，使用安全性高，避免异源细胞的污染。培养方法简单高效，对猪滋养层干细胞培养具有克隆形成率高、细胞凋亡率低、增殖传代能力强和安全稳定的优点。
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