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公开(公告)号：CN117721246A
公开(公告)日：2024-03-19
申请号：CN202311473311.5
申请日：2023-11-07
申请人： 广东省农业科学院动物卫生研究所
摘要： 本发明属于病毒检测技术领域，公开了用于检测野生鸟类γ和δ属冠状病毒的组合物及其试剂盒和应用。具体公开了一种试剂，包括引物组和/或探针组。本发明提供的试剂可用于对δ、γ属冠状病毒进行检测，可同时快速检测鉴定禽鸟中γ冠状病毒属和δ冠状病毒属，且具备极高的检测敏感性与特异性，检测结果准确可靠。实现了在一管反应中只进行1次荧光定量PCR扩增即可对冠状病毒属的病原进行检测。
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公开(公告)号：CN114591995A
公开(公告)日：2022-06-07
申请号：CN202210197668.4
申请日：2022-03-01
申请人： 广东省农业科学院动物卫生研究所
IPC分类号： C12N15/74 , C12N15/66 , C07K14/145 , C07K19/00 , A61K39/205 , A61P31/14 , C12R1/01
摘要： 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种重组牛流行热病毒糖蛋白乳酸乳球菌载体及其构建方法和应用，本发明首先将pgsA基因连接至NICE表达系统中构建得到pgsA重组质粒，然后将牛流行热病毒的G基因连接至上述的pgsA重组质粒中，最后转化至乳酸乳球菌感受态细胞中构建得到重组牛流行热病毒糖蛋白乳酸乳球菌载体。本发明构建的重组牛流行热病毒糖蛋白乳酸乳球菌载体利用pgsA锚定蛋白的特性，将牛流行热病毒糖蛋白融合表达，使牛流行热病毒糖蛋白表达在乳酸乳球菌的外表面，不仅可以用于制备牛流行热病毒的重组G蛋白，而且可以为跨膜表达体系的建立和新型口服基因工程疫苗的研制奠定基础。
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公开(公告)号：CN114250202A
公开(公告)日：2022-03-29
申请号：CN202111528039.7
申请日：2021-12-14
申请人： 广东省农业科学院动物卫生研究所
IPC分类号： C12N5/10 , C12N15/85 , C12N15/113 , C12N15/11 , C12N15/12 , C12N15/55 , C12N15/90 , C12N7/00 , C07K14/705 , C12R1/91
摘要： 本发明属于细胞重组与蛋白表达技术领域，具体涉及一种稳定表达CD163蛋白的猪肾细胞系及其构建方法和应用，本发明的猪肾细胞系PK15‑CD163于2021年11月11日送往广东省微生物菌种保藏中心保藏，保藏编号为GDMCC No:62053。本发明是通过将目的基因CD163导入到猪基因组的ROSA26安全位点，从而构建得到的，所得细胞系可以将外源基因整合入基因组内已知的安全位点，实现转入基因的正常表达而又不影响细胞的正常生理功能。其构建过程简单，可重复性好，效率高，克隆准确度高，能高效确保正确克隆的获取，可以为蓝耳病毒的分离及病毒与宿主的致病机制研究等提供参考。
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公开(公告)号：CN114107176A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111525599.7
申请日：2021-12-14
申请人： 广东省农业科学院动物卫生研究所
摘要： 本发明属于细胞重组与蛋白表达技术领域，具体涉及一种稳定表达非洲猪瘟CD2v蛋白的CHO细胞系及其构建方法和应用，本发明公开了一种稳定表达非洲猪瘟CD2v蛋白的CHO细胞系，所述细胞系为中国仓鼠卵巢细胞CHO‑CD2v，于2021年11月11日送往广东省微生物菌种保藏中心保藏，保藏编号为GDMCC No:62052。本发明的细胞系是将外源基因CD2v整合入中国仓鼠基因组内已知的安全位点，从而实现转入基因的正常表达而又不影响细胞的正常生理功能，其构建过程简单，克隆准确度高。该细胞系可以用于高产CD2v蛋白，非洲猪瘟药效筛选、疫苗生产等方面，对于非洲猪瘟的诊断和疫苗生产具有非常重要的意义。
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公开(公告)号：CN109655610A
公开(公告)日：2019-04-19
申请号：CN201811424706.5
申请日：2018-11-27
申请人： 广东省农业科学院动物卫生研究所
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/535 , G01N33/543
摘要： 本发明公开了一种伪狂犬病病毒的间接ELISA检测试剂盒。包括抗原重组蛋白的制备、间接ELISA方法的建立、判定标准和临床血清学应用。所述的抗原重组蛋白的制备方法为，人工合成如SEQ ID NO:2所示的序列，构建质粒表达载体，在大肠杆菌中进行原核表达，最终用镍柱亲和纯化获得。该试剂盒用于检测伪狂犬病病毒抗体，对伪狂犬病病毒2001年以后的流行病毒具有更准确的检测效果，其准确性具体表现为，其检验结果与基于流行毒株的微量血清抗体中和试验具有更好的符合率，因此更符合临床实际的抗体保护力水平。
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公开(公告)号：CN104450781A
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201410547146.8
申请日：2014-10-15
申请人： 广东省农业科学院动物卫生研究所
摘要： 本发明公开了一种过表达CIAPIN1蛋白的细胞系及其制备方法和应用；该细胞系名称为BHK-21CIAPIN1+，保藏编号为CCTCCC2014149，其表达CIAPIN1蛋白的量是正常BHK-21细胞的10倍；该细胞系的制备方法为将CIAPIN1的cDNA序列插入真核表达质粒pIRESneo中，再转染BHK-21细胞；经含G418培养液筛选后细胞经极限稀释法获得阳性单克隆细胞，即为永生化过表达CIAPIN1蛋白的细胞系。本发明细胞系培养狂犬病病毒可显著影响病毒增值滴度，对该病毒的高效培养及其灭活疫苗的生产意义重大，本发明细胞系在狂犬病病毒的培养中具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN117701639A
公开(公告)日：2024-03-15
申请号：CN202311544593.3
申请日：2023-11-17
申请人： 广东省农业科学院动物卫生研究所
摘要： 本发明属于分子生物学技术领域，公开了利用慢病毒载体表达非洲猪瘟B119L基因及其构建方法和应用，具体公开了一种重组慢病毒载体。本发明提供了一种可表达B119L蛋白的重组慢病毒载体，将该重组慢病毒载体与慢病毒四质粒系统共转染至人胚胎肾上皮细胞(HEK‑293T)进行慢病毒包装，可稳定表达B119L蛋白。通过稳转HEK‑293T细胞系，收集上清液，纯化后得到B119L蛋白，其蛋白的表达时间和水平可以人为的控制，纯化便捷，且该B119L蛋白具有良好的免疫原性，可以为进一步开展研究非洲猪瘟慢病毒载体疫苗提供可靠平台。
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公开(公告)号：CN111040998B
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN201911357734.4
申请日：2019-12-25
申请人： 广东省农业科学院动物卫生研究所
IPC分类号： C12N5/10 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12N15/47 , C12P21/02 , C07K14/145 , A61K39/205 , A61P31/14
摘要： 本发明公开了一种稳定表达狂犬病毒糖蛋白细胞株的构建及其应用，使用CRISPR‑Cas9技术将狂犬病毒糖蛋白基因定点敲入鼠源神经瘤母细胞(N2a cells)的Rosa26Safe‑harbor位点，经嘌呤霉素压力筛选和有限稀释法获得稳定表达狂犬病毒糖蛋白的细胞株，再逐步扩大培养，以实现狂犬病毒糖蛋白稳定高效表达，获得的蛋白纯度高、稳定性好。为疫苗研制和狂犬病致病机理研究提供平台，有利于狂犬病毒的疾病诊断和深层次的分子机制研究。
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公开(公告)号：CN108456692B
公开(公告)日：2022-06-14
申请号：CN201810086771.5
申请日：2018-01-30
申请人： 广东省农业科学院动物卫生研究所
IPC分类号： C12N15/86 , C12N15/66 , A61K48/00 , A61K31/713 , A61P31/14
摘要： 本发明公开了一种抗口蹄疫病毒miRNA载体，载体上有针对FMDV 3C蛋白的3C1片段序列、3C2片段序列及针对FMDV 3D蛋白的3D1片段序列、3D2片段序列。该载体可以突破血清型的壁垒，解决传统疫苗免疫血清型不能交叉保护的问题；可有效的激活细胞免疫；而使用减毒鼠伤寒沙门氏菌作为疫苗活载体具有能够激发宿主产生针对其所携带外源抗原的特异性免疫应答，增强粘膜、细胞免疫的功能，制备简单，易于储存运输，抗原无需提纯、成本低廉等优点。
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公开(公告)号：CN114438113A
公开(公告)日：2022-05-06
申请号：CN202210199555.8
申请日：2022-03-01
申请人： 广东省农业科学院动物卫生研究所
IPC分类号： C12N15/74 , C12N15/66 , A61K39/205 , A61P31/14
摘要： 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种重组狂犬病毒糖蛋白乳酸乳球菌载体及其构建方法和应用，为利用NICE表达系统和pgsA基因使狂犬病毒G蛋白表达在乳酸乳球菌中，本发明公开了一种重组狂犬病毒糖蛋白乳酸乳球菌载体的构建方法，利用枯草芽孢杆菌pgsA锚定蛋白的特性，将枯草芽孢杆菌pgsA基因与RABV的G基因连接到pNZ8149表达载体上进行融合性表达，使RABV的G蛋白表达在乳酸乳球菌的外表面，为跨膜表达体系的建立和新型狂犬病毒口服基因工程疫苗的研制奠定基础。
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