基于环境DNA技术对红耳龟生物量评估的引物及其方法

    公开(公告)号:CN108486227A

    公开(公告)日:2018-09-04

    申请号:CN201810510162.8

    申请日:2018-05-24

    IPC分类号: C12Q1/6851 C12N15/11

    摘要: 本发明公开了一种基于环境DNA技术对红耳龟生物量评估的引物及其方法。本发明所述的方法包括以下步骤:1)通过qPCR技术制作红耳龟DNA浓度与Ct值的标准曲线;2)根据标准曲线测定不同红耳龟放养密度环境下的水体中的红耳龟eDNA浓度;3)将测得的红耳龟eDNA浓度与对应的红耳龟生物量制成相应曲线。结果表明,红耳龟eDNA浓度与其生物量成线性关系,R2为0.9429。本发明提供的方法在实验室环境下可通过检测水体对红耳龟进行快速识别,并且能够根据eDNA浓度评估红耳龟的生物量,为红耳龟的野外分布调查、数量评估及入侵程度等级评估等提供技术支撑。

    一种平胸龟幼苗的饲养装置

    公开(公告)号:CN106417162A

    公开(公告)日:2017-02-22

    申请号:CN201610811267.8

    申请日:2016-09-08

    发明人: 龚世平 葛研

    IPC分类号: A01K67/02

    CPC分类号: A01K67/02

    摘要: 本发明公开了一种平胸龟幼苗的饲养装置。本发明基于长期的养殖实验研究,提供了一种平胸龟幼苗的饲养装置,与现有技术相比,该方法充分考虑了平胸龟幼苗凶猛好斗的行为学特点和干扰条件下容易产生应激的生物学特点。运用该方法,可以有效解决平胸龟幼苗在饲养过程中相互伤残问题,避免饲养操作过程中对龟苗的干扰,减少龟苗的应激反应;并且可以进行批量化换水和清理卫生操作,显著提高工作效率,大大节约劳动力成本和时间,提高了养殖效率,为平胸龟的规模化高效健康育苗提供了坚实的技术支持。该方法省时省力,节约人力,操作方便,降低养殖成本,适于规模化养殖,有利于推广利用。

    一种红耳龟胚胎成纤维细胞系及其构建方法

    公开(公告)号:CN107858323B

    公开(公告)日:2020-10-09

    申请号:CN201711092592.4

    申请日:2017-11-08

    IPC分类号: C12N5/073 C12N15/85 C12N15/65

    摘要: 本发明公开了一种红耳龟胚胎成纤维细胞系及其构建方法。它是取孵化至第12~18d的红耳龟卵,挑选活胚后对红耳龟卵进行消毒,去壳取红耳龟胚,弃头、四肢及内脏,余下的胚胎组织用含双抗的PBS冲洗至无明显血迹;将冲洗至无明显血迹的胚胎组织用胰蛋白酶消化,收集消化下来的单细胞,将单细胞接种于完全培养基中静置培养,当细胞部分贴壁且稍加振荡也不浮起时,吸去完全培养基和尚未贴壁的细胞,剩下的贴壁细胞加入新的完全培养基后继续培养;当原代培养的细胞汇合度达到90%以上时,用胰蛋白酶消化,收集单细胞,再接种于完全培养基中进行传代培养。本发明为进一步利用RSTEFs进行基础理论和实验研究奠定了材料和技术基础。

    一种收集眼斑水龟卵的方法

    公开(公告)号:CN105660526B

    公开(公告)日:2018-03-09

    申请号:CN201610012800.4

    申请日:2016-01-05

    IPC分类号: A01K67/02 A01K63/00

    摘要: 本发明公开了一种收集眼斑水龟卵的方法。本发明基于多年的养殖实验研究,提供了一种收集眼斑水龟卵的方法,与现有技术相比,该方法充分考虑眼斑水龟的产卵时期、产卵行为、产卵环境需求等生态生物学特点;运用该方法,可以有效解决眼斑水龟人工养殖过程中的龟卵收集问题,在充分减少对雌龟干扰的条件下,显著提高了龟卵收集的效率,保证80%以上的龟卵能够安全收集,显著减少了龟卵的损失,提高了繁殖效率;该方法效果明显,容易操作,节约空间资源,节省人力成本,有利于推广应用。

    一种诱捕红耳龟的诱捕装置及其诱捕方法

    公开(公告)号:CN109792981A

    公开(公告)日:2019-05-24

    申请号:CN201811386448.6

    申请日:2018-11-20

    发明人: 龚世平 葛研

    IPC分类号: A01M23/00

    摘要: 本发明公开了一种诱捕红耳龟的诱捕装置及其诱捕方法。诱捕装置括透明的箱体,在箱体左、右两端各设有一个由外向内呈漏斗状的,由透明弹性材料制成的引诱入口,在箱体前、后侧壁的中部设有漂浮装置,在箱体内还设有装有诱饵的透明诱饵盒,透明诱饵盒为密封不进水,所述的诱饵包括塑料诱饵和发光诱饵,所述的塑料诱饵为塑料鱼、塑料虾或塑料蛙;所述的发光诱饵为发光LED灯具,在所述的箱体的侧壁上还固定有固定绳索。本方法所采用的塑料诱饵不存在失效问题,能连续性、长时间发挥诱捕作用,配合发光诱饵可以提高在夜间的诱捕效果,且诱捕到的龟不会发生溺死现象,该方法省时省力,不需要更换诱饵,操作方便,环保安全,成本低,有利于推广利用。

    一种低温诱导乌龟卵滞育的方法

    公开(公告)号:CN109548745A

    公开(公告)日:2019-04-02

    申请号:CN201811492329.9

    申请日:2018-12-07

    IPC分类号: A01K67/02

    CPC分类号: A01K67/02

    摘要: 本发明公开了一种低温诱导乌龟卵滞育的方法。该方法包括以下步骤:1)乌龟卵的采集:收集龟卵,挑选卵壳光滑、无凹陷、无破损、无畸形的龟卵,将龟卵放置于盛放有蛭石的卵盘中;2)龟卵降温处理:将盛放龟卵的卵盘放入培养箱中,培养箱内的起始温度与卵的温度相同,将卵盘放入培养箱后,逐渐降温至14.5~15.5℃,保持温度;3)龟卵护理:每3~5天对龟卵检查一次,调节蛭石的湿度,使湿度维持稳定,及时清除发霉或变质的卵,保持卵盘的清洁卫生。采用本发明方法可以使乌龟卵滞育时间长达10天,孵化率可以达到50%以上,并且成本低廉,操作方便,环保安全,为以乌龟卵为试验材料的科学实验提供了有力的支持。

    一种红耳龟特异性引物及其应用

    公开(公告)号:CN108315434A

    公开(公告)日:2018-07-24

    申请号:CN201810190950.3

    申请日:2018-03-08

    IPC分类号: C12Q1/6888 C12N15/11

    CPC分类号: C12Q1/6888

    摘要: 本发明公开了一种红耳龟特异性引物及其应用。本发明红耳龟特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1~2所示。本发明红耳龟特异性引物可用于PCR反应并进行电泳检测,通过所得目的条带的有无,快速区分红耳龟与其它11种在中国野外有发现的龟类。本发明通过提供红耳龟特异性引物,并建立区分红耳龟与其它11种龟类的有效分子检测方法,为外来入侵物种红耳龟的快速识别提供了有效手段,该方法对实验仪器和耗材的要求不高,对利用环境DNA调查红耳龟野外分布提供了很好的技术支持。

    一种红耳龟胚胎成纤维细胞系及其构建方法

    公开(公告)号:CN107858323A

    公开(公告)日:2018-03-30

    申请号:CN201711092592.4

    申请日:2017-11-08

    IPC分类号: C12N5/073 C12N15/85 C12N15/65

    摘要: 本发明公开了一种红耳龟胚胎成纤维细胞系及其构建方法。它是取孵化至第12~18d的红耳龟卵,挑选活胚后对红耳龟卵进行消毒,去壳取红耳龟胚,弃头、四肢及内脏,余下的胚胎组织用含双抗的PBS冲洗至无明显血迹;将冲洗至无明显血迹的胚胎组织用胰蛋白酶消化,收集消化下来的单细胞,将单细胞接种于完全培养基中静置培养,当细胞部分贴壁且稍加振荡也不浮起时,吸去完全培养基和尚未贴壁的细胞,剩下的贴壁细胞加入新的完全培养基后继续培养;当原代培养的细胞汇合度达到90%以上时,用胰蛋白酶消化,收集单细胞,再接种于完全培养基中进行传代培养。本发明为进一步利用RSTEFs进行基础理论和实验研究奠定了材料和技术基础。

    一种平胸龟幼苗的饲养装置

    公开(公告)号:CN106417162B

    公开(公告)日:2019-05-31

    申请号:CN201610811267.8

    申请日:2016-09-08

    发明人: 龚世平 葛研

    IPC分类号: A01K67/02

    CPC分类号: A01K67/02

    摘要: 本发明公开了一种平胸龟幼苗的饲养装置。本发明基于长期的养殖实验研究,提供了一种平胸龟幼苗的饲养装置,与现有技术相比,该方法充分考虑了平胸龟幼苗凶猛好斗的行为学特点和干扰条件下容易产生应激的生物学特点。运用该方法,可以有效解决平胸龟幼苗在饲养过程中相互伤残问题,避免饲养操作过程中对龟苗的干扰,减少龟苗的应激反应;并且可以进行批量化换水和清理卫生操作,显著提高工作效率,大大节约劳动力成本和时间,提高了养殖效率,为平胸龟的规模化高效健康育苗提供了坚实的技术支持。该方法省时省力,节约人力,操作方便,降低养殖成本,适于规模化养殖,有利于推广利用。

    一种低温诱导红耳龟卵滞育的方法

    公开(公告)号:CN109566530A

    公开(公告)日:2019-04-05

    申请号:CN201811500258.2

    申请日:2018-12-07

    IPC分类号: A01K67/02

    CPC分类号: A01K67/02

    摘要: 本发明公开了一种低温诱导红耳龟卵滞育的方法。该方法包括以下步骤:1)红耳龟卵的采集:收集龟卵,挑选卵壳光滑、无凹陷、无破损、无畸形的龟卵,将龟卵放置于盛放有蛭石的卵盘中;2)龟卵降温处理:将盛放龟卵的卵盘放入培养箱中,培养箱内的起始温度与卵的温度相同,将卵盘放入培养箱后,逐渐降温至16.5~17.5℃,保持温度;3)龟卵护理:每3~5天对龟卵检查一次,调节蛭石的湿度,使湿度维持稳定,及时清除发霉或变质的卵,保持卵盘的清洁卫生。采用本发明方法可以使红耳龟卵滞育时间长达15天,孵化率可以达到50%以上,并且成本低廉,操作方便,环保安全,为以红耳龟卵为试验材料的科学实验提供了有力的支持。