公开(公告)号：CN114958914B

公开(公告)日：2023-09-26

申请号：CN202210627448.0

申请日：2022-06-06

申请人： 新乡医学院 ,  新乡医学院第一附属医院

发明人： 王小引 ,  王天云 ,  张伟莉 ,  张玺 ,  牛敬媛 ,  李树军 ,  张俊河 ,  贾岩龙 ,  李波

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/67 ,  C12N15/64 ,  C12N15/54

摘要： 本发明属于基因工程及基因治疗技术领域，具体涉及一种高效人类及哺乳动物细胞附着体表达载体，同时还涉及该附着体表达载体的构建方法和应用。本发明在启动子上游反向插入第一核基质结合区序列，启动子下游正向插入内含子序列，内含子序列下游正向插入第二核基质结合序列，并进一步优选启动子序列为EF‑1α序列、第一核基质结合区序列为MAR X‑29、内含子序列为hCMV内含子序列、第二核基质结合区序列为MAR特征性序列构建形成附着体表达载体。通过实验验证，使用本发明构建的表达载体，宿主细胞采用CHO细胞或人结肠癌细胞HCT116，能显著提高转基因表达水平与表达稳定性，表达的目的蛋白具有生物学功能。

公开(公告)号：CN114958914A

公开(公告)日：2022-08-30

申请号：CN202210627448.0

申请日：2022-06-06

申请人： 新乡医学院 ,  新乡医学院第一附属医院

发明人： 王小引 ,  王天云 ,  张伟莉 ,  张玺 ,  牛敬媛 ,  李树军 ,  张俊河 ,  贾岩龙 ,  李波

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/67 ,  C12N15/64 ,  C12N15/54

摘要： 本发明属于基因工程及基因治疗技术领域，具体涉及一种高效人类及哺乳动物细胞附着体表达载体，同时还涉及该附着体表达载体的构建方法和应用。本发明在启动子上游反向插入第一核基质结合区序列，启动子下游正向插入内含子序列，内含子序列下游正向插入第二核基质结合序列，并进一步优选启动子序列为EF‑1α序列、第一核基质结合区序列为MAR X‑29、内含子序列为hCMV内含子序列、第二核基质结合区序列为MAR特征性序列构建形成附着体表达载体。通过实验验证，使用本发明构建的表达载体，宿主细胞采用CHO细胞或人结肠癌细胞HCT116，能显著提高转基因表达水平与表达稳定性，表达的目的蛋白具有生物学功能。

公开(公告)号：CN118599907A

公开(公告)日：2024-09-06

申请号：CN202410884991.8

申请日：2024-07-03

申请人： 新乡医学院

发明人： 单琳琳 ,  崔振武 ,  王天云 ,  王小引 ,  张俊河 ,  王芳

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/54 ,  C12N5/10 ,  C12N5/071 ,  C12Q1/6888 ,  C12N15/11

摘要： 本发明涉及基因工程技术领域。本发明提供了人源hDGKθ基因的过表达载体、过表达人源hDGKθ基因的CHO细胞系及其构建方法，以及过表达人源hDGKθ基因的CHO细胞系在外源重组蛋白表达中的应用。本发明以含Tol2转座子元件的载体为骨架，构建hDGKθ过表达质粒，通过转座酶的催化将hDGKθ整合到CHO细胞基因座中，可以实现CHO细胞中hDGKθ的稳定过表达，应用于构建重组蛋白表达系统时也能够提高重组蛋白表达量。这有效克服了目前CHO细胞表达系统存在的表达水平较低的问题，为重组蛋白的生产提供了方向。

公开(公告)号：CN117165590A

公开(公告)日：2023-12-05

申请号：CN202311086417.X

申请日：2023-08-28

申请人： 新乡医学院 ,  常州南京大学高新技术研究院 ,  河南普诺易生物制品研究院有限公司

发明人： 王天云 ,  刘惠宁 ,  董卫华 ,  王冲 ,  华子春 ,  王小引 ,  赵春澎 ,  贾岩龙 ,  张俊河

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/67 ,  C12N5/10

摘要： 本发明公开了一种CMV合成启动子及其应用，属于基因工程技术领域。该启动子的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。本发明的启动子能用于哺乳动物细胞表达载体构建，以驱动外源基因进行高效、持续、稳定的表达；将该表达载体应用于哺乳动物细胞目的蛋白的表达系统中，用于提高哺乳动物细胞目的蛋白的表达水平，降低生产成本。

公开(公告)号：CN116064560A

公开(公告)日：2023-05-05

申请号：CN202211271340.9

申请日：2022-10-18

申请人： 新乡医学院 ,  河南普诺易生物制品研究院有限公司

发明人： 王小引 ,  王天云 ,  张玺 ,  王耀坤 ,  李树军 ,  王浩民 ,  朱嘉懿 ,  姬梦莹 ,  杨献军

IPC分类号： C12N15/12 ,  C12N15/85 ,  C12N15/67 ,  C12N15/64

摘要： 本发明属于基因工程技术领域，本发明提供了一种提高哺乳动物细胞附着体载体转基因表达水平的方法。本发明方法利用优化后的SAF‑A基因构建辅助基因重组表达载体，先转染宿主细胞，经筛选得到稳定细胞株后，再转染外源基因表达载体，经稳定筛选，宿主细胞可稳定表达目的蛋白。通过实验验证，使用本发明的方法，宿主细胞采用CHO细胞或人结肠癌细胞HCT116，能显著提高转基因表达水平与表达稳定性，表达的目的蛋白具有生物学功能。

公开(公告)号：CN114058576A

公开(公告)日：2022-02-18

申请号：CN202111386357.4

申请日：2021-11-22

申请人： 新乡医学院 ,  河南普诺易生物制品研究院有限公司

发明人： 李琴 ,  王天云 ,  杨永晓 ,  樊振林 ,  林艳 ,  王小引 ,  罗青 ,  郑辉

IPC分类号： C12N5/0775

摘要： 本发明提供了一种血小板裂解液及其制备方法和应用，属于细胞生物学技术领域，所述血小板裂解液的制备方法，包括以下步骤：1)将多份来源不同的健康人的抗凝全血混合、去除红细胞后，收集富血小板血浆；2)将步骤1)中获得的富血小板血浆超声处理后，离心，收集第一上清液；3)将所述第一上清液与氯化钙混合、静置后，收集第二上清液即为血小板裂解液。本发明所述制备方法能够明显提高血小板裂解液中细胞因子的含量，制备获得的血小板裂解液可完全替代胎牛血清培养细胞。

公开(公告)号：CN112779289A

公开(公告)日：2021-05-11

申请号：CN202110113130.6

申请日：2021-01-27

申请人： 新乡医学院

发明人： 张俊河 ,  王天云 ,  张继红 ,  樊振林 ,  杨雯雯 ,  王小引 ,  肖云喜

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N5/10 ,  C12P21/00

摘要： 本发明涉及一种人类及哺乳动物细胞表达载体、表达系统及其构建方法和应用。本发明通过在启动子的上游和PolyA的下游插入MAR 1‑68序列，同时，在MAR序列与启动子之间插入一段长度为500bp的间隔子DNA序列，构建获得MAR1‑68‑Spacer‑CMV‑目的基因‑PolyA‑MAR1‑68载体。该载体中Spacer片段为中性DNA序列，不能提高转基因表达水平，从而能够真正地探讨距离效应对转基因表达的影响。试验证明，包含上述表达载体的人类及哺乳动物细胞表达系统能够显著提高所携带的目的基因表达水平。因此，本发明提供的哺乳动物表达载体和表达系统能够克服转基因沉默，促进外源基因在宿主细胞中高水平稳定表达，可用于重组蛋白的生产。

公开(公告)号：CN110343699A

公开(公告)日：2019-10-18

申请号：CN201810316670.2

申请日：2018-04-08

申请人： 新乡医学院

发明人： 王天云 ,  贾岩龙 ,  王稳 ,  王小引 ,  郭潇 ,  王燕芳 ,  井长勤 ,  王芳 ,  林艳

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/67

摘要： 本发明涉及用于提高哺乳动物细胞转基因表达的调控序列、表达载体、表达系统及其应用，属于基因工程技术领域。本发明根据CMV启动子、增强子的序列特征，结合生物学信息及实验，发明了3种用于组合启动子的调控序列，分别为人CMV启动子核心序列(hCPE)、合成的调控元件(SEE)、人巨细胞病毒即早期增强子(hCMVE)，将这三种调控序列插入表达载体的启动子上游，可以驱动外源基因高效、持续、稳定表达。同等条件下，与不含上述调控序列的表达载体相比，本发明中表达载体能显著提高外源基因的表达水平，可用于重组蛋白的生产等。

公开(公告)号：CN103642838B

公开(公告)日：2015-08-26

申请号：CN201310642325.5

申请日：2013-11-29

申请人： 新乡医学院

发明人： 张俊河 ,  王天云 ,  董卫华 ,  王芳 ,  赵春澎 ,  柴树洁 ,  王小引 ,  王俐 ,  杨瑞 ,  李琴

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/66

摘要： 本发明提供了一种人类及哺乳动物细胞表达载体及其应用，所述表达载体的核苷酸序列如Seq ID No.1或Seq ID No.2所示，其是以pCAT3-control作为出发载体构建的一种表达载体，本发明的表达载体能够显著提高所携带目的基因的表达水平，同等条件下，比含MAR且不含EGFP的表达载体可显著提高目的基因的表达。

公开(公告)号：CN103484496A

公开(公告)日：2014-01-01

申请号：CN201310327687.5

申请日：2013-07-31

申请人： 新乡医学院

发明人： 赵营 ,  翟德胜 ,  武俊芳 ,  宋向凤 ,  许重洁 ,  赵德安 ,  李嵩箕 ,  谷争 ,  袁会峰 ,  赵繁荣 ,  王小引

IPC分类号： C12N15/85

摘要： 本发明提供了一种建立报告基因重组在染色体目的基因上的方法，重组位点是目的基因的最后一个外显子的终止密码子后，把IRES-报告基因重组在目的基因的最后一个外显子的终止密码子后。重组后，目的基因和报告基因一起转录成融合的mRNA，目的基因mRNA各外显子剪接正确，并分别翻译成报告基因蛋白和目的基因蛋白，报告基因蛋白可以定时检测，通过报告基因的表达变化反映目的基因表达调控。该重组方法为目的基因的表达调控研究提供完全天然染色体环境。