公开(公告)号：CN106318918B

公开(公告)日：2020-02-21

申请号：CN201510406718.5

申请日：2015-07-10

Applicant: 无锡源清天木生物科技有限公司 ,  清华大学无锡应用技术研究院

Inventor： 邢新会 ,  王成华 ,  张翀 ,  苏楠

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12N15/63 ,  C12N1/15 ,  C12N1/19 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/26

Abstract: 本发明公开了一种碱性黄嘌呤脱氢酶及其在检测试剂盒中的应用。本发明公开蛋白，包括黄嘌呤脱氢酶大亚基和黄嘌呤脱氢酶小亚基。本发明提供的碱性黄嘌呤脱氢酶，为首次报道的经过实验证实的鲍氏不动杆菌属黄嘌呤脱氢酶类。本发明提供的碱性黄嘌呤脱氢酶可以适应碱性测定条件的样品，比已有报道具有更高的底物亲和力和最高的催化效率，可以更加灵敏地降解和检测次黄嘌呤/黄嘌呤和PNP酶和5`‑核苷酸酶，与PNP酶联用检测无机磷酸和腺苷脱氨酶，有利于提高酶催化效率、降低成本，更加有利于工业应用过程。本发明还提供将黄嘌呤脱氢酶用于检测包括血清和尿液在内的样品中黄嘌呤/次黄嘌呤含量的方法。本发明进一步提供检测样品中黄嘌呤/次黄嘌呤含量的检测试剂盒。本发明所提供检测方法和检测试剂盒不受样品中溶解氧影响，比现有技术检测范围更宽、灵敏度更高，便于推广应用。

公开(公告)号：CN106318918A

公开(公告)日：2017-01-11

申请号：CN201510406718.5

申请日：2015-07-10

Applicant: 无锡源清天木生物科技有限公司 ,  清华大学无锡应用技术研究院

Inventor： 邢新会 ,  王成华 ,  张翀 ,  苏楠

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12N15/63 ,  C12N1/15 ,  C12N1/19 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/26

Abstract: 本发明公开了一种碱性黄嘌呤脱氢酶及其在检测试剂盒中的应用。本发明公开蛋白，包括黄嘌呤脱氢酶大亚基和黄嘌呤脱氢酶小亚基。本发明提供的碱性黄嘌呤脱氢酶，为首次报道的经过实验证实的鲍氏不动杆菌属黄嘌呤脱氢酶类。本发明提供的碱性黄嘌呤脱氢酶可以适应碱性测定条件的样品，比已有报道具有更高的底物亲和力和最高的催化效率，可以更加灵敏地降解和检测次黄嘌呤/黄嘌呤和PNP酶和5`-核苷酸酶，与PNP酶联用检测无机磷酸和腺苷脱氨酶，有利于提高酶催化效率、降低成本，更加有利于工业应用过程。本发明还提供将黄嘌呤脱氢酶用于检测包括血清和尿液在内的样品中黄嘌呤/次黄嘌呤含量的方法。本发明进一步提供检测样品中黄嘌呤/次黄嘌呤含量的检测试剂盒。本发明所提供检测方法和检测试剂盒不受样品中溶解氧影响，比现有技术检测范围更宽、灵敏度更高，便于推广应用。

公开(公告)号：CN105753945A

公开(公告)日：2016-07-13

申请号：CN201410769966.1

申请日：2014-12-15

Applicant: 清华大学无锡应用技术研究院

Inventor： 邢新会 ,  苏楠 ,  张翀

IPC: C07K14/00 ,  C12N15/11 ,  C12N9/88

Abstract: 本发明公开了一种连接肽及其应用。本发明的连接肽主要应用于制备MBP融合多糖裂解酶，具体涉及MBP融合肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，MBP融合硫酸软骨素酶B、AC。MBP融合表达系统中，通过该连接肽应用来提高MBP助溶、助折叠，增加目标蛋白的活性以及热稳定性，最终获得在大肠杆菌中的发酵酶活初步达到工业应用水平、且具有优秀热稳定性的MBP融合肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，MBP融合硫酸软骨素酶B、AC。

公开(公告)号：CN105754979B

公开(公告)日：2020-03-17

申请号：CN201410778633.5

申请日：2014-12-15

Applicant: 清华大学无锡应用技术研究院

Inventor： 邢新会 ,  苏楠 ,  张翀

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/66 ,  C12N15/09

Abstract: 本发明公开了一种MBP融合肝素酶Ⅱ，该MBP融合肝素酶Ⅱ是如下a）或b）的蛋白：a）序列表中序列1的氨基酸序列组成的蛋白；b）序列表中序列1氨基酸序列经过对构成MBP融合肝素酶Ⅱ蛋白中肝素酶Ⅱ二聚体结合面的33个氨基酸位点中的一个或多个定点突变的蛋白。上述蛋白的编码基因及制备方法也属于本发明的保护范围。本发明通过基因工程手段对MBP融合肝素酶Ⅱ进行定点突变，最终获得催化活性及热稳定性都明显提高的MBP融合肝素酶Ⅱ。

公开(公告)号：CN105753945B

公开(公告)日：2019-04-09

申请号：CN201410769966.1

申请日：2014-12-15

Applicant: 清华大学无锡应用技术研究院

Inventor： 邢新会 ,  苏楠 ,  张翀

IPC: C07K14/00 ,  C12N15/11 ,  C12N9/88

Abstract: 本发明公开了一种连接肽及其应用。本发明的连接肽主要应用于制备MBP融合多糖裂解酶，具体涉及MBP融合肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，MBP融合硫酸软骨素酶B、AC。MBP融合表达系统中，通过该连接肽应用来提高MBP助溶、助折叠，增加目标蛋白的活性以及热稳定性，最终获得在大肠杆菌中的发酵酶活初步达到工业应用水平、且具有优秀热稳定性的MBP融合肝素酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，MBP融合硫酸软骨素酶B、AC。

公开(公告)号：CN105754979A

公开(公告)日：2016-07-13

申请号：CN201410778633.5

申请日：2014-12-15

Applicant: 清华大学无锡应用技术研究院

Inventor： 邢新会 ,  苏楠 ,  张翀

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/66 ,  C12N15/09

Abstract: 本发明公开了一种MBP融合肝素酶Ⅱ，该MBP融合肝素酶Ⅱ是如下a）或b）的蛋白：a）序列表中序列1的氨基酸序列组成的蛋白；b）序列表中序列1氨基酸序列经过对构成MBP融合肝素酶Ⅱ蛋白中肝素酶Ⅱ二聚体结合面的33个氨基酸位点中的一个或多个定点突变的蛋白。上述蛋白的编码基因及制备方法也属于本发明的保护范围。本发明通过基因工程手段对MBP融合肝素酶Ⅱ进行定点突变，最终获得催化活性及热稳定性都明显提高的MBP融合肝素酶Ⅱ。