公开(公告)号：CN111411067A

公开(公告)日：2020-07-14

申请号：CN202010279913.7

申请日：2020-04-10

Applicant: 江南大学

Inventor： 徐建中 ,  于海波 ,  张伟国

IPC: C12N1/21 ,  C12N9/02 ,  C12N9/04 ,  C12N9/06 ,  C12N9/10 ,  C12P17/12 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高产2,5-二甲基吡嗪的大肠杆菌重组菌及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明应用基因工程方法，在一种高产L-苏氨酸的大肠杆菌K-12中过表达L-苏氨酸脱氢酶TDH并异源表达来源于乳球菌属微生物的NADH氧化酶NoxE和来源于链球菌属微生物的氨基丙酮氧化酶AAOSO，同时敲除2-氨基-3-酮丁酸CoA连接酶KBL和伯胺氧化酶TynA。从而构建出新的、高效的2,5-二甲基吡嗪合成途径，并解决重组菌中辅因子不平衡问题。以大肠杆菌E.coli THR为例，重组菌经36h摇瓶发酵实验，2,5-二甲基吡嗪积累量达1.2±0.2g/L。此发明以L-苏氨酸高产菌为出发菌，成功重建了大肠杆菌中2,5-二甲基吡嗪合成途径，改善了胞内辅因子不平衡的缺点，为选育2,5-二甲基吡嗪提供了新的思路。

公开(公告)号：CN116286419B

公开(公告)日：2024-02-27

申请号：CN202310079749.9

申请日：2023-02-08

Applicant: 江南大学

Inventor： 赵鑫锐 ,  于海波 ,  梁庆锋 ,  周景文 ,  堵国成 ,  陈坚 ,  李江华

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/53 ,  C12N9/08 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了一种分泌辣根过氧化物酶的酿酒酵母及其发酵方法，属于基因工程和发酵工程技术领域。本发明采用pGal1启动子调控HRP的表达，并配合二段式发酵使发酵120h的HRP产量达到1284U/L。进一步通过优化启动子核心区域，敲除GAL80提高pGal1及其衍生的杂合启动子(特征是具有CRMGal1区域)的表达活性，并结合对原始CYC1T终止子的替换，改善HRP表达与菌株生长的矛盾从而提高HRP产量，并通过对信号肽的pre‑α前肽区域进行替换并对pro‑α前肽区域

公开(公告)号：CN116286419A

公开(公告)日：2023-06-23

申请号：CN202310079749.9

申请日：2023-02-08

Applicant: 江南大学

Inventor： 赵鑫锐 ,  于海波 ,  梁庆锋 ,  周景文 ,  堵国成 ,  陈坚 ,  李江华

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/53 ,  C12N9/08 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了一种分泌辣根过氧化物酶的酿酒酵母及其发酵方法，属于基因工程和发酵工程技术领域。本发明采用pGal1启动子调控HRP的表达，并配合二段式发酵使发酵120h的HRP产量达到1284U/L。进一步通过优化启动子核心区域，敲除GAL80提高pGal1及其衍生的杂合启动子(特征是具有CRMGal1区域)的表达活性，并结合对原始CYC1T终止子的替换，改善HRP表达与菌株生长的矛盾从而提高HRP产量，并通过对信号肽的pre‑α前肽区域进行替换并对pro‑α前肽区域或延长以提高HRP分泌途径的通畅程度，使构建的菌株在5‑L发酵罐上实现了13506U/L的HRP产量。

公开(公告)号：CN111500614A

公开(公告)日：2020-08-07

申请号：CN202010426816.6

申请日：2020-05-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 徐建中 ,  于海波 ,  张伟国

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/62 ,  C12N1/21 ,  C12N9/04 ,  C12N9/02 ,  C12P17/12 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高效催化L-苏氨酸合成2,5-DMP的质粒及其构建与应用，属于基因工程技术领域。本发明构建了包含不同微生物来源L-苏氨酸脱氢酶(TDH)的重组pRSFDuet-tdhX质粒，以筛选出最高活性的TDH。然后，引入来源于Lactococcus cremoris的NADH氧化酶(NoxE)，并筛选出TDH和NoxE在pRSF-Duet1质粒中的最佳构建方式。最终得到高效催化L-苏氨酸合成2,5-二甲基吡嗪的质粒pRSFDuet-tdhEcnoxELc。将该质粒转入大肠杆菌BL21中进行全细胞转化实验，在含有5g/L L-苏氨酸的转化体系中于37℃、200r/min孵化24h，可积累605.1±56.4mg/L的2,5-DMP。此发明通过筛选不同来源的TDH酶和优化不同基因共表达方式，从而获得了一种能高效催化L-苏氨酸合成2,5-二甲基吡嗪的质粒，为构建2,5-二甲基吡嗪高效催化质粒提供了新的思路。

公开(公告)号：CN109182239A

公开(公告)日：2019-01-11

申请号：CN201811074264.6

申请日：2018-09-14

Applicant: 江南大学

Inventor： 徐建中 ,  杨汉昆 ,  张伟国 ,  于海波

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/77 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌重组菌及其构建方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明应用基因工程方法，敲除基因zwf、malE，替换谷氨酸棒杆菌基因icdCg为变形链球菌Streptococcus mutans JH 1005中基因icdSm，达到重组菌胞内NADPH水平精确调控的目的。重组菌经LBG液体培养基摇瓶实验，重组菌胞内NADH含量由出发菌的1.97μmol(g DCW)-1增加到2.73μmol(g DCW)-1，胞内NADPH含量降低至0.15μmol(g DCW)-1，明显低于出发菌胞内NADPH含量1.43μmol(g DCW)-1。此发明成功阻断了谷氨酸棒杆菌中NADPH合成的相关途径，为构建可精确调控胞内NADPH水平的菌株提供崭新的思路。