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公开(公告)号：CN109371006B
公开(公告)日：2021-12-14
申请号：CN201811517830.6
申请日：2018-12-12
Applicant: 江南大学(如皋)食品生物技术研究所 , 江南大学
IPC: C12N11/089 , C12N9/10 , C12P19/18 , C12P19/12
Abstract: 本发明公开了一种蔗糖磷酸化酶的固定化方法，属于生物工程技术领域。本发明以重组枯草芽孢杆菌SPase/pBSMuL3作为生产菌株，LX‑1000EA固定化蔗糖磷酸化酶的酶活为7.75U/g，酶活回收率达到110.85％；LX‑1000EA固定化蔗糖磷酸化酶的酶活为9.54U/g，酶活回收率达到101.82％。在相同的转化时间内，以0.5M蔗糖和0.5M葡萄糖为底物连续操作11次，氨基化树脂LX‑1000EA固定化SPase保持39.15％的转化率，94％的残留酶活；氨基化树脂LX‑1000HA固定化SPase保持42.5％的转化率，91％的残留酶活。结果表明，该固定化方法操作简单，固定化酶酶活没有损失，且应用效果很好，具有很高的工业化应用潜力。
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公开(公告)号：CN105671070B
公开(公告)日：2019-03-19
申请号：CN201610122595.7
申请日：2016-03-03
Applicant: 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了一种用于枯草芽孢杆菌基因组编辑的CRISPRCas9系统及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明构建敲除质粒PHY300dsrf，该质粒包含特异性靶向目的基因的sgRNA、cas9基因、同源修复臂、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的复制原点及抗性筛选标记。本发明所设计的特异性靶向srfA‑C基因的sgRNA，可以指引cas9蛋白在srfA‑C基因的特异性位点切割双链，然后再同源修复臂的指导下对基因组进行精确地同源性重组，在断裂处引入XhoI酶切位点。在对srfA‑C基因敲除成功的枯草芽孢杆菌进行上罐发酵培养，泡沫显著减少，证明该CRISPR/Cas9基因编辑系统可以有效的对枯草芽孢杆菌基因组进行基因编辑。
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公开(公告)号：CN109371006A
公开(公告)日：2019-02-22
申请号：CN201811517830.6
申请日：2018-12-12
Applicant: 江南大学(如皋)食品生物技术研究所 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种蔗糖磷酸化酶的固定化方法，属于生物工程技术领域。本发明以重组枯草芽孢杆菌SPase/pBSMuL3作为生产菌株，LX-1000EA固定化蔗糖磷酸化酶的酶活为7.75U/g，酶活回收率达到110.85％；LX-1000EA固定化蔗糖磷酸化酶的酶活为9.54U/g，酶活回收率达到101.82％。在相同的转化时间内，以0.5M蔗糖和0.5M葡萄糖为底物连续操作11次，氨基化树脂LX-1000EA固定化SPase保持39.15％的转化率，94％的残留酶活；氨基化树脂LX-1000HA固定化SPase保持42.5％的转化率，91％的残留酶活。结果表明，该固定化方法操作简单，固定化酶酶活没有损失，且应用效果很好，具有很高的工业化应用潜力。
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公开(公告)号：CN109468298B
公开(公告)日：2022-03-15
申请号：CN201811547298.2
申请日：2018-12-18
Applicant: 江南大学(如皋)食品生物技术研究所 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高松二糖产量的淀粉蔗糖酶突变体，属于基因工程和酶工程领域。该淀粉蔗糖酶突变体D447V是通过将来源于Deinococcus Geothermalis的淀粉蔗糖酶第447位天冬氨酸突变为缬氨酸得到的。将淀粉蔗糖酶突变体D447V应用于松二糖的生产，在pH 7.0、35℃的反应条件下，松二糖的产量为57.01g/L，是野生酶产量的1.8倍。因此，本发明的淀粉蔗糖酶突变体能够应用于松二糖的制备中，提高松二糖的转化率。
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公开(公告)号：CN105821087B
公开(公告)日：2019-03-15
申请号：CN201610281015.9
申请日：2016-04-29
Applicant: 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所
Abstract: 本发明涉及一种应用角质酶合成短链芳香酯的方法，属于酶工程和发酵工程技术领域。本发明以毕赤酵母为宿主菌构建一种过量表达角质酶的基因工程菌，诱导该菌发酵产角质酶，发酵液上清中角质酶酶活达到420U/mL。本发明进一步利用该重组酶在有机相、黄酒催陈和白酒固态发酵中生产短链芳香酯。本方法有酶源制备方法简单、成本低，酶量大，短链芳香酯生产方法简单、转化率高、产量高、时间短等优点，利于工业化放大生产。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109468298A
公开(公告)日：2019-03-15
申请号：CN201811547298.2
申请日：2018-12-18
Applicant: 江南大学(如皋)食品生物技术研究所 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高松二糖产量的淀粉蔗糖酶突变体，属于基因工程和酶工程领域。该淀粉蔗糖酶突变体D447V是通过将来源于Deinococcus Geothermalis的淀粉蔗糖酶第447位天冬氨酸突变为缬氨酸得到的。将淀粉蔗糖酶突变体D447V应用于松二糖的生产，在pH 7.0、35℃的反应条件下，松二糖的产量为57.01g/L，是野生酶产量的1.8倍。因此，本发明的淀粉蔗糖酶突变体能够应用于松二糖的制备中，提高松二糖的转化率。
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公开(公告)号：CN105802897B
公开(公告)日：2019-02-12
申请号：CN201610363798.5
申请日：2016-05-26
Applicant: 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了一种D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶生产菌株及其应用，属于生物工程和酶工程技术领域。本发明的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶生产菌为一株Clostridium sp，是从森林附近土壤中经菌株富集、平板菌落特征初筛，采用摇瓶复筛，测定酶活力，经酶活测定，比较D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶活性大小而得到。该菌生产的D‑阿洛酮糖‑3‑差向异构酶可以D‑果糖为底物催化生产D‑阿洛酮糖，温度范围广、没有副产物生成、反应方法简便、低能耗、物料成本低等优点，加入Co2+后60℃半衰期长达9h，有较强的耐热优势，而且在高温60℃条件下以果葡糖浆为底物进行反应转化率最高可达33.8％。该菌可用于化妆品、食品、药品等领域。
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公开(公告)号：CN105671070A
公开(公告)日：2016-06-15
申请号：CN201610122595.7
申请日：2016-03-03
Applicant: 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所
CPC classification number: C12N15/75 , C07K14/32 , C12N2800/80 , C12N2999/007
Abstract: 本发明公开了一种用于枯草芽孢杆菌基因组编辑的CRISPRCas9系统及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明构建敲除质粒PHY300dsrf，该质粒包含特异性靶向目的基因的sgRNA、cas9基因、同源修复臂、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的复制原点及抗性筛选标记。本发明所设计的特异性靶向srfA-C基因的sgRNA，可以指引cas9蛋白在srfA-C基因的特异性位点切割双链，然后再同源修复臂的指导下对基因组进行精确地同源性重组，在断裂处引入XhoI酶切位点。在对srfA-C基因敲除成功的枯草芽孢杆菌进行上罐发酵培养，泡沫显著减少，证明该CRISPR/Cas9基因编辑系统可以有效的对枯草芽孢杆菌基因组进行基因编辑。
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公开(公告)号：CN109536477A
公开(公告)日：2019-03-29
申请号：CN201811524681.6
申请日：2018-12-13
Applicant: 江南大学(如皋)食品生物技术研究所 , 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种固定化β-葡萄糖苷酶生产龙胆低聚糖方法，属于生物工程技术领域。本发明发酵制备得到β-葡萄糖苷酶，同时以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂，采用吸附交联法对β-葡萄糖苷酶进行固定化。结果表明，当壳聚糖浓度为3.0％，戊二醛浓度为0.8％，游离酶加量为400U/g微球载体，固定化吸附时间为20h时，固定化酶酶活回收率最高达到65.4％。在最佳的转化条件下连续转化6次，龙胆低聚糖产率仍具有15.2％。显示出该固定化酶具有较好的持续利用性及较高的龙胆低聚糖的生产能力。
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公开(公告)号：CN105821087A
公开(公告)日：2016-08-03
申请号：CN201610281015.9
申请日：2016-04-29
Applicant: 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所
CPC classification number: C12P7/6436 , C12G3/02 , C12H1/003 , C12N9/18 , C12P7/62 , C12Y301/01074
Abstract: 本发明涉及一种应用角质酶合成短链芳香酯的方法，属于酶工程和发酵工程技术领域。本发明以毕赤酵母为宿主菌构建一种过量表达角质酶的基因工程菌，诱导该菌发酵产角质酶，发酵液上清中角质酶酶活达到420U/mL。本发明进一步利用该重组酶在有机相、黄酒催陈和白酒固态发酵中生产短链芳香酯。本方法有酶源制备方法简单、成本低，酶量大，短链芳香酯生产方法简单、转化率高、产量高、时间短等优点，利于工业化放大生产。
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