高产纳豆激酶基因工程菌株的构建方法

    公开(公告)号:CN109295086A

    公开(公告)日:2019-02-01

    申请号:CN201811258055.7

    申请日:2018-10-26

    IPC分类号: C12N15/75 C12N9/56 C12R1/125

    摘要: 本发明公开了一种高产纳豆激酶基因工程菌株的构建方法。以纳豆芽孢杆菌基因组为PCR扩增模板,利用PCR技术获得纳豆激酶基因片段;用BamH I和Sma I双酶切纳豆激酶的基因片段和质粒pHT43;纳豆激酶DNA片段与经过双酶切的质粒载体进行酶连接,得到重组载体pHT-NK;将重组载体pHT-NK转化枯草芽孢杆菌,筛选阳性重组子,即获得纳豆激酶转基因工程菌株。采用枯草芽孢杆菌缺陷型菌株为宿主细胞,构建纳豆激酶基因工程菌株,采用这样的菌株发酵不仅纳豆激酶产量高,而且发酵产物杂蛋白少,简化后期分离纯化工艺流程,节约生产成本。

    使用短短芽孢杆菌分泌表达超敏蛋白的方法

    公开(公告)号:CN109134626A

    公开(公告)日:2019-01-04

    申请号:CN201811031684.6

    申请日:2018-09-05

    申请人: 刘胜

    发明人: 刘胜

    IPC分类号: C07K14/195 C12N15/75

    CPC分类号: C07K14/195 C12N15/75

    摘要: 本发明涉及一种使用短短芽孢杆菌分泌表达超敏蛋白的方法,所述的方法包括如下步骤,(1)将超敏蛋白的编码基因插入到以短短芽孢杆菌为宿主的质粒中,(2)将插入了所述超敏蛋白的质粒转入短短芽孢杆菌宿主中,(3)发酵培养所述短短芽孢杆菌,(4)分离提取所述超敏蛋白。

    一种表达外源基因的启动子及其应用

    公开(公告)号:CN107142259A

    公开(公告)日:2017-09-08

    申请号:CN201710380113.2

    申请日:2017-05-25

    IPC分类号: C12N15/11 C12N15/75

    CPC分类号: C12N15/75 C07K14/32

    摘要: 本发明公开了一种表达外源基因的启动子及其应用。所述启动子的核苷酸序列选自以下其中一种:(1)如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或与其反向互补的核苷酸序列;(2)对SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列进行一个或多个碱基的取代、缺失或添加修饰且具有相同启动子功能的核苷酸序列;(3)与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列具有90%以上同源性且具有相同启动子功能的核苷酸序列。本发明中公开的启动子序列属于高效表达分子元件,可以高效地启动外源蛋白,特别是工业酶制剂的发酵生产,在重组蛋白表达应用中,该启动子经自发启动,无需添加额外诱导物,主要用于芽孢杆菌,如枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、解链淀粉芽孢杆菌等工业生产菌株的构建。

    表达金属硫蛋白的枯草芽孢杆菌和生产金属硫蛋白的方法

    公开(公告)号:CN106834201A

    公开(公告)日:2017-06-13

    申请号:CN201710131602.4

    申请日:2017-03-07

    IPC分类号: C12N1/21 C12N15/75 C12R1/125

    摘要: 本发明提供了一种表达金属硫蛋白的枯草芽孢杆菌,其含有金属硫蛋白的融合表达载体,该融合表达载体携带金属硫蛋白的编码核酸分子,能够可诱导地表达该金属硫蛋白。本发明还提供了一种生产金属硫蛋白的方法,包括:构建金属硫蛋白的融合表达载体;用所述融合表达载体转化枯草芽孢杆菌;以及培养该枯草芽孢杆菌,并加入诱导剂,以获得包含表达的金属硫蛋白的培养物。可任选地对该进行纯化,以获得纯化的金属硫蛋白。本发明的方法降低了生产成本,提高了蛋白产量,克服了传统金属硫蛋白制备方法的不足,使海洋源金属硫蛋白在开发天然、高效海洋源重金属生物解毒剂的工业化生产方面具有极大的实际生产潜能。