公开(公告)号：CN103320438A

公开(公告)日：2013-09-25

申请号：CN201310196281.8

申请日：2013-05-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  张博慧 ,  徐美娟 ,  许正宏

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/63 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/48 ,  C12R1/19 ,  C12R1/15

Abstract: 一种钝齿棒杆菌溶氧诱导型启动子的筛选方法，属于蛋白质组学和基因工程领域。本发明首先通过2-DE技术结合质谱鉴定技术筛选钝齿棒杆菌不同溶氧条件下差异表达蛋白点，结合棒杆菌基因组信息将差异蛋白单位拷贝数高的2种蛋白作为研究对象。根据其编码基因克隆启动子序列命名为P-tkt和P-fum。分别替换穿梭载体pDXW-8上的tac启动子，并在其下游插入报告基因cat，分别转化大肠杆菌JM109和钝齿棒杆菌SYPA5-5，通过测定各重组菌在不同溶氧条件下CAT的活性，证明筛选到受高溶氧诱导的启动子P-tkt，首次获得来自钝齿棒杆菌高溶氧诱导型启动子，为钝齿棒杆菌在不同溶氧条件下表达外源基因提供了有效的工具。

公开(公告)号：CN103074343A

公开(公告)日：2013-05-01

申请号：CN201310043507.0

申请日：2013-02-04

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  许正宏 ,  张博慧 ,  徐美娟

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/10 ,  C12N15/77 ,  C12N1/21 ,  C12R1/15

Abstract: 一种利用2-DE技术筛选钝齿棒杆菌内源高表达启动子的方法，属于蛋白质组学和基因工程领域。本发明首先通过2-DE技术结合质谱技术鉴定出钝齿棒杆菌胞内高表达蛋白点。克隆其编码基因启动子，分别命名为P-argC、P-argG、P-argF、P-ilvC和P-serA，替换穿梭载体pDXW-8上的tac启动子，并在其下游插入cat基因，分别转化大肠杆菌JM109和钝齿棒杆菌SYPA5-5，通过测定CAT的活性，各启动子在重组菌中的活性：P-argG＞P-argF＞P-ilvC＞P-serA＞P-argC。这是首次获得来自钝齿棒杆菌组成型高表达启动子，为钝齿棒杆菌高表达外源基因提供了有效的工具。

公开(公告)号：CN102747025A

公开(公告)日：2012-10-24

申请号：CN201210210386.X

申请日：2012-06-20

Applicant: 江南大学

Inventor： 许正宏 ,  饶志明 ,  徐美娟 ,  张博慧 ,  杨娟 ,  刘巧利 ,  窦文芳

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/77 ,  C12P13/10 ,  C12R1/15

Abstract: L-精氨酸从胞内分泌到胞外依靠的是转运蛋白LysE。本发明以首次以钝齿棒杆菌为研究菌株，构建了携带自身lysE基因的穿梭表达质粒pJC-tac-lysE并电转入钝齿棒杆菌中，获得加强lysE基因表达的重组钝齿棒杆菌。并对原始菌及重组菌进行平板显色定性检测和基本培养基培养实验考查L-精氨酸转运情况，验证了L-精氨酸转运蛋白LysE在钝齿棒杆菌中的过量表达，说明增强LysE的表达能够一定程度上降低胞内L-精氨酸的浓度提高L-精氨酸的产量。并对原始菌和重组进行250mL摇瓶发酵实验，结果表明，重组菌L-精氨酸产量提高了约12％，产率最大时提高了11.1％，且发酵周期有所缩短。

公开(公告)号：CN103320438B

公开(公告)日：2015-06-24

申请号：CN201310196281.8

申请日：2013-05-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  张博慧 ,  徐美娟 ,  许正宏

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/63 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/48 ,  C12R1/19 ,  C12R1/15

Abstract: 一种钝齿棒杆菌溶氧诱导型启动子的筛选方法，属于蛋白质组学和基因工程领域。本发明首先通过2-DE技术结合质谱鉴定技术筛选钝齿棒杆菌不同溶氧条件下差异表达蛋白点，结合棒杆菌基因组信息将差异蛋白单位拷贝数高的2种蛋白作为研究对象。根据其编码基因克隆启动子序列命名为P-tkt和P-fum。分别替换穿梭载体pDXW-8上的tac启动子，并在其下游插入报告基因cat，分别转化大肠杆菌JM109和钝齿棒杆菌SYPA5-5，通过测定各重组菌在不同溶氧条件下CAT的活性，证明筛选到受高溶氧诱导的启动子P-tkt，首次获得来自钝齿棒杆菌高溶氧诱导型启动子，为钝齿棒杆菌在不同溶氧条件下表达外源基因提供了有效的工具。

公开(公告)号：CN103074343B

公开(公告)日：2015-10-14

申请号：CN201310043507.0

申请日：2013-02-04

Applicant: 江南大学

Inventor： 饶志明 ,  许正宏 ,  张博慧 ,  徐美娟

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/10 ,  C12N15/77 ,  C12N1/21 ,  C12R1/15

Abstract: 一种利用2-DE技术筛选钝齿棒杆菌内源高表达启动子的方法，属于蛋白质组学和基因工程领域。本发明首先通过2-DE技术结合质谱技术鉴定出钝齿棒杆菌胞内高表达蛋白点。克隆其编码基因启动子，分别命名为P-argC、P-argG、P-argF、P-ilvC和P-serA，替换穿梭载体pDXW-8上的tac启动子，并在其下游插入cat基因，分别转化大肠杆菌JM109和钝齿棒杆菌SYPA5-5，通过测定CAT的活性，各启动子在重组菌中的活性：P-argG＞P-argF＞P-ilvC＞P-serA＞P-argC。这是首次获得来自钝齿棒杆菌组成型高表达启动子，为钝齿棒杆菌高表达外源基因提供了有效的工具。