公开(公告)号：CN118931810A

公开(公告)日：2024-11-12

申请号：CN202410461109.9

申请日：2024-04-17

申请人： 江南大学

发明人： 张洪涛 ,  赖霞 ,  李竹英 ,  李红俐 ,  李子卓 ,  刘登峰

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N15/61 ,  C12P19/26 ,  C12P39/00 ,  C12R1/19 ,  C12R1/865

摘要： 本发明公开了一种生产乳糖‑N‑四糖的大肠杆菌及基于其的双菌耦合发酵方法。本发明首先在大肠杆菌中构建了LNT生物合成途径；然后对双质粒系统进行组合优化，构建了四株工程菌，并筛选出EP3菌株(含有galT1‑SP ase和galE‑Cvβ3GalT表达框)与酵母耦合发酵产LNT能力最优，可产生25.2g/L LNT，其摩尔转化率(mol/mol LNT II)为71.22％。接着对生产体系进行优化，比较UTP和UMP作为辅因子对LNT合成的影响，在仅添加20mM UMP作为辅因子时，即可生成29.4g/L LNT，其摩尔转化率(mol/mo l LNT II)为83.09％。最后补料分批培养EP3菌株，经全细胞催化后产生39.6g LNT。本发明为高效廉价生产LNT提供了一种新的策略。

公开(公告)号：CN118421729A

公开(公告)日：2024-08-02

申请号：CN202410461736.2

申请日：2024-04-17

申请人： 江南大学

发明人： 张洪涛 ,  潘雯静 ,  李竹英 ,  李红俐 ,  李子卓 ,  刘登峰

IPC分类号： C12P19/26 ,  C12P19/12 ,  C12P39/00 ,  C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N15/61 ,  C12N15/52 ,  A23C9/16 ,  A23C9/20 ,  A23L33/21 ,  C12R1/19 ,  C12R1/865

摘要： 本发明涉及一种双菌共培养发酵合成乳糖‑N‑二糖的方法。本发明乳糖‑N‑二糖单元(LNB)是人乳寡糖的主要组成部分，也是双歧因子候选者之一，但是目前缺少经济的大规模合成技术。本发明利用双歧杆菌代谢HMOs系统原理在大肠杆菌内构建了LNB的生物合成途径。该途径只需要添加催化量的无机磷酸盐和单磷酸尿苷，在构建的工程菌E.coli JM109(DE3)(含有质粒pETDuet1‑BiGalHexNAcP‑galE和pRSFDuet1‑galT‑SPase)和酵母耦合催化下，利用蔗糖和N‑乙酰氨基葡萄糖为底物合成了乳糖‑N‑二糖单元。本发明为高效经济合成LNB提供了一种新的方法。