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公开(公告)号：CN106467917B
公开(公告)日：2019-10-22
申请号：CN201610748706.5
申请日：2016-08-30
申请人： 沈阳农业大学
摘要： 本发明提供一种草莓ARF4启动子融合GUS基因的载体构建方法其主要特征是，草莓ARF4基因启动子能够启动ARF4基因的转录，将ARF4启动子与GUS报告基因融合，通过GUS组织染色能够分析ARF4基因启动子的转录活性。从‘艳丽’草莓叶片中提取DNA，设计特异引物并利用PCR技术克隆获得草莓ARF4基因启动子序列，利用生物信息学软件分析该序列中的核心作用元件，之后将克隆到的ARF4基因启动子替换pRI201‑AN‑GUS载体中的35S启动子，成功构建由草莓ARF4启动子驱动GUS报告基因的植物表达载体。其优点是，介绍了草莓ARF4基因启动子的克隆方法，首次报道了‘艳丽’草莓ARF4基因启动子序列，所构建的草莓ARF4基因启动子融合GUS报告基因的植物表达载体将为深入分析该启动子的转录活性奠定重要基础，也为丰富植物ARF4基因的相关研究提供参考。
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公开(公告)号：CN106467917A
公开(公告)日：2017-03-01
申请号：CN201610748706.5
申请日：2016-08-30
申请人： 沈阳农业大学
摘要： 本发明提供一种草莓ARF4启动子融合GUS基因的载体构建方法，其主要特征是，草莓ARF4基因启动子能够启动ARF4基因的转录，将ARF4启动子与GUS报告基因融合，通过GUS组织染色能够分析ARF4基因启动子的转录活性。从‘艳丽’草莓叶片中提取DNA，设计特异引物并利用PCR技术克隆获得草莓ARF4基因启动子序列，利用生物信息学软件分析该序列中的核心作用元件，之后将克隆到的ARF4基因启动子替换pRI201-AN-GUS载体中的35S启动子，成功构建由草莓ARF4启动子驱动GUS报告基因的植物表达载体。其优点是，介绍了草莓ARF4基因启动子的克隆方法，首次报道了草莓ARF4基因启动子序列，所构建的草莓ARF4基因启动子融合GUS报告基因的植物表达载体将为深入分析该启动子的转录活性奠定重要基础，也为丰富植物 ARF4 基因的相关研究提供参考。
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公开(公告)号：CN106065403A
公开(公告)日：2016-11-02
申请号：CN201610395979.6
申请日：2016-06-07
申请人： 沈阳农业大学
摘要： 本发明提供一种含草莓ARF4点突变基因的过表达载体的构建方法其主要特征是，草莓ARF4基因上有miR390靶标ta‑siRNA3的作用位点，能被ta‑siRNA3切割而失去功能，利用快速定点突变技术对ARF4基因进行改造，获得ta‑siRNA3靶标消除但所翻译氨基酸序列不变的ARF4基因过表达载体，再结合转基因技术对ARF4进行功能分析。从‘艳丽’草莓叶片提取RNA，反转录为cDNA，设计引物并利用PCR技术获得ARF4基因的ORF全长，将其进行定点突变，获得突变序列，之后插入pRI101‑AN载体，最终获得草莓ARF4点突变基因的植物过表达载体。其优点是，介绍了草莓ARF4基因克隆及定点突变方法，首次报道了草莓ARF4基因的ORF全长，所构建的草莓ARF4基因过表达载体将为深入分析其功能和作用机制，丰富植物ARF4基因的相关研究奠定重要基础。
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