CRISPR/Cas9技术介导miR167前体序列编辑体系的建立方法

    公开(公告)号:CN107815463A

    公开(公告)日:2018-03-20

    申请号:CN201710698186.6

    申请日:2017-08-15

    申请人: 西南大学

    发明人: 王小柯 江东

    摘要: 本发明提供了一种CRISPR/Cas9技术介导miR167前体序列编辑体系的建立方法,步骤包括:A、gRNA设计和体外验证:利用在线软件设计后选择评分较高的多个靶标位点,序列合成后使用体外酶切检测的方法来筛选合适的gRNA,通过聚合酶将软件设计出的靶标位点序列在体外转录生成gRNA,再利用Cas9核酸酶体外切割的方法来验证gRNA-Cas9的体外切割效率,从而筛选出目的gRNA;B、载体构建:构建CRISPR/Cas9表达系统的两个载体pP1C.5和pP1C.1;本发明的主要目的是在CRISPR/Cas9基因编辑技术的应用过程中,更方便和高效地获得目标靶基因的合适gRNA,并且在转基因植株的检测过程中,更加直观地检测到CRISPR/Cas9载体的转入,降低转基因植株筛选的工作量,节约时间,提高效率。