公开(公告)号：CN117305254A

公开(公告)日：2023-12-29

申请号：CN202311499401.1

申请日：2023-11-13

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 魏战勇 ,  祖少坡 ,  胡慧 ,  袁晋 ,  史晨曦 ,  张红垒 ,  张钰灿 ,  靳晓慧

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/50 ,  C12N15/81 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及猪δ冠状病毒，特别是指一种猪δ冠状病毒突变体病毒rPDCoV及其拯救方法和应用。本发明利用基因工程方法，对PDCoV野生毒株基因组进行改造，改造的氨基酸位点为病毒S蛋白S173→P和Y179→C，将改造后的病毒基因组克隆到pGF载体上，通过单酶切，体外转录以及电转染LLC‑PK1细胞，成功拯救出猪δ冠状病毒突变体病毒rPDCoV。本发明将PDCoV HNZK‑02株生物基因组分为6个片段，基于酵母转化相关同源重组的方法一步得到感染性克隆，避免了传统反向遗传学技术中需要将病毒基因组各片段逐一连接，也避免了传统的连接方法中酶切连接效率低下的问题，大大提高了连接效率。