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公开(公告)号：CN115960866A
公开(公告)日：2023-04-14
申请号：CN202310014122.5
申请日：2023-01-05
申请人： 河南农业大学
IPC分类号： C12N9/22 , C12N15/55 , C12N15/70 , C12Q1/6895 , C12Q1/6816 , C12R1/19
摘要： 本发明属于基因编辑领域，涉及Cas12a蛋白，特别是指一种Mb2Cas12a‑RRVRR突变体蛋白及其制备方法和应用。本研究首次对16种Cas12a蛋白进行了评价，特别是它们在较低温度下的切割活性进行了评估。发现来自Moraxella bovoculi 57922菌株的Mb2Cas12a蛋白活性比其他蛋白更强。此外，本申请在Mb2Cas12a蛋白中引入了5个突变，从而创制Mb2Cas12a‑RRVRR变体蛋白，它具有更广泛的PAMs范围和更强的活性。综上所述，基于CRISPR/Mb2Cas12a‑RRVRR变体的新型检测工具增强了CRISPR技术的诊断能力，有潜力取代现有的Cas12a蛋白。
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公开(公告)号：CN118127060A
公开(公告)日：2024-06-04
申请号：CN202311843393.8
申请日：2023-12-29
申请人： 河南农业大学
IPC分类号： C12N15/82 , C07K14/415 , C12N15/29 , A01H5/00 , A01H6/74
摘要： 本发明属于基因工程领域，涉及苹果防御素基因，特别是指一种苹果防御素基因、蛋白质和表达载体在防治腐皮镰刀菌中的应用。本申请通过对接种了腐皮镰刀菌的苹果幼树的生理指标进行检测，鉴定了25个苹果防御素基因在整个苹果基因组中的结构和蛋白质保护模式，并结合启动子元件、基因表达和q‑PCR分析，进行了叶片转化，并通过稳定遗传验证了防御素的抗性。寻找对F.solani具有抗性的防御素基因，以提高苹果幼树对再植病害的抗性。
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公开(公告)号：CN114107526B
公开(公告)日：2024-04-16
申请号：CN202111440174.6
申请日：2021-11-30
申请人： 河南农业大学
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/113 , C12N15/11 , C12R1/01
摘要： 本发明属于病原微生物的快速检测领域，特别是指一种检测西瓜嗜酸菌（Acidovorax citrulli）的RPA引物对和crRNA及其试剂盒和使用方法。所述RPA引物对序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示，crRNA靶标序列如SEQ ID No.3所示。本发明将采用Crispr/LbCas12a核酸检测平台，针对西瓜嗜酸菌（Acidovorax citrulli）的基因组设计特异性检测位点，并结合荧光可视化技术，开发出适合检测此类病原菌的简易性诊断方法。同时结合RPA等温扩增技术，进一步提高灵敏度。
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公开(公告)号：CN114214348A
公开(公告)日：2022-03-22
申请号：CN202111354374.X
申请日：2021-11-16
申请人： 河南农业大学
IPC分类号： C12N15/70 , C12N15/55 , C12N15/10 , C12N9/22 , C12Q1/6816
摘要： 本发明属于蛋白功能领域，涉及CRISPR‑Cas系统，特别是指一种用于核酸检测的LbCas12a‑5M突变体蛋白及其制备方法和应用。研究构建了LbCas12a的D156R/G532R/K538V/Y542R/K595R变体，评估蛋白的乱切活性在核酸检测中PAM序列的偏好性以及检测效率方面是否优于野生型蛋白。同时，结合荧光可视化方法，开发出一套可以识别非常规PAM序列的核酸检测系统，进一步优化并扩大了Crispr/LbCas12a核酸诊断系统的应用。
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公开(公告)号：CN114107526A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111440174.6
申请日：2021-11-30
申请人： 河南农业大学
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/113 , C12N15/11 , C12R1/01
摘要： 本发明属于病原微生物的快速检测领域，特别是指一种检测西瓜嗜酸菌（Acidovorax citrulli）的RPA引物对和crRNA及其试剂盒和使用方法。所述RPA引物对序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示，crRNA靶标序列如SEQ ID No.3所示。本发明将采用Crispr/LbCas12a核酸检测平台，针对西瓜嗜酸菌（Acidovorax citrulli）的基因组设计特异性检测位点，并结合荧光可视化技术，开发出适合检测此类病原菌的简易性诊断方法。同时结合RPA等温扩增技术，进一步提高灵敏度。
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公开(公告)号：CN219117434U
公开(公告)日：2023-06-02
申请号：CN202223042163.5
申请日：2022-11-16
申请人： 河南农业大学
摘要： 本实用新型属于生物实验仪器技术领域，尤其涉及一种封闭式Crispr/Cas12a核酸检测反应管，包括管体、与管体配合密封的管盖及隔离件，所述管盖为能盛放反应液的半球形结构，所述隔离件设于管体内，隔离件与管体连为一体并将管体分为左右两个半封闭腔室，左右两个半封闭腔室分别为第一腔室和第二腔室，在管盖与管体扣紧密封后，第一腔室与第二腔室的顶部能相互连通。该反应管内可连续进行RPA反应及Cas12a反应，整个过程全封闭进行，无需中途开盖转移反应液，翻转倒置反应管将反应液流入管盖即可实现两种反应体系的混合，操作简便，易于控制，避免了开盖移液导致交叉污染，结构简单，成本低廉，具有较好的应用和推广价值。
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