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公开(公告)号：CN117431228A
公开(公告)日：2024-01-23
申请号：CN202311406336.3
申请日：2023-10-27
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种高立体选择性转氨酶突变体、编码基因及其应用，属于生物工程技术领域。所述转氨酶突变体是氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的紫色色杆菌来源转氨酶通过氨基酸突变所得的突变体，其中，所述氨基酸突变的位点为第118位、第225位、第418位中的至少一个，且第118位的天冬酰胺突变为甘氨酸，第225位的甘氨酸突变为丙氨酸，第418的半胱氨酸突变为苏氨酸。本发明提供的转氨酶突变体相对野生型转氨酶具有更高的酶活力和立体选择性，可以以4‑羟基‑2‑丁酮为底物制备(R)‑3‑氨基丁醇，产物的收率高，光学纯度高，无副产物产生。
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公开(公告)号：CN117229934A
公开(公告)日：2023-12-15
申请号：CN202311145116.X
申请日：2023-09-06
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种合成类胡萝卜素的基因工程菌及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。所述基因工程菌以产类胡萝卜素的酵母工程菌株为出发菌，敲除了编码血红素依赖性低氧基因阻遏因子的基因ROX1，同时上调表达编码参与NADPH再生转录因子的基因STB5、编码液泡蛋白分选途径E类蛋白的基因DID2和编码在V‑ATP酶V0区组装中发挥作用的内质网蛋白的基因VOA1。本发明通过对类胡萝卜素合成途径外的基因表达进行组合调控，促进类胡萝卜素合成，显著提高类胡萝卜素的产量，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN115851845A
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202211205388.X
申请日：2022-09-29
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种制备生育三烯酚的方法，涉及生物技术领域。本发明将环糊精应用到生育三烯酚的合成过程中，实现了生育三烯酚的高效合成和分泌。本发明添加环糊精的方法，过程简单，操作方便，提高了生育三烯酚的产量，极大地改善了产生育三烯酚的基因工程菌的生育三烯酚的合成和分泌，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN112574897B
公开(公告)日：2022-10-28
申请号：CN202011294167.5
申请日：2020-11-18
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种用于生产香紫苏二醇的菌株组合、应用及生产香紫苏二醇的方法。一种用于生产香紫苏二醇的菌株组合，由酿酒酵母工程菌和保藏号为ATCC 20624的真菌组成，所述酿酒酵母工程菌中外源表达焦磷酸赖百当烯二醇酯合酶和香紫苏醇合酶。本发明与现有技术相比其显著优点是：1、酵母自身代谢途径可以提供合成香紫苏醇的前体GGPP，通过引入两个外源基因即可实现香紫苏醇的微生物合成法，为生产香紫苏二醇提供原料。2、在共培养体系中，真菌ATCC 20624以酵母产生的香紫苏醇为底物，将其转化为香紫苏二醇，因此可以实现香紫苏二醇的从头生物合成。3、真菌ATCC 20624对香紫苏醇的转化，能够进一步促进酵母生产香紫苏醇。
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公开(公告)号：CN113265344B
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202110545875.X
申请日：2021-05-19
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种选择性生产视黄醇的基因工程菌及其构建方法和应用，属于基因工程领域。所述基因工程菌为以产β‑胡萝卜素的工程菌株为出发菌，导入β‑胡萝卜素15，15’‑双加氧酶编码基因以及醛还原酶编码基因或/和视黄醇脱氢酶编码基因，实现以细胞工厂选择性地生产视黄醇。为进一步提高视黄醇的产量，所述基因工程菌还导入了香叶基香叶基焦磷酸合酶突变体编码基因、切除N端线粒体定位肽的NADH激酶的编码基因，同时其甲羟戊酸途径转录抑制因子基因被敲除，增加前体和辅酶的供应。本发明还提供了利用该基因工程菌生产视黄醇的方法，在发酵过程中添加亚铁离子和抗氧化剂，使视黄醇产量得到进一步提高。
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公开(公告)号：CN110423732B
公开(公告)日：2022-01-07
申请号：CN201910749343.0
申请日：2019-08-14
申请人： 浙江大学
IPC分类号： C12N9/02 , C12N9/10 , C12N9/90 , C12N15/53 , C12N15/54 , C12N15/61 , C12N1/19 , C12P17/06 , C12R1/865
摘要： 本发明公开了一种在酿酒酵母中表达的关键酶及高产α‑和γ‑生育三烯酚的基因工程菌及其构建方法。本发明通过基因克隆和密码子优化，获得五个可以在酿酒酵母中成功表达的酶，分别为HPPD、HPT、MPBQMT、TC和γ‑TMT；并将这五个酶逐步整合到酿酒酵母基因组上，进一步通过切除叶绿体转运肽和过表达限速酶，构建得到高产α‑和γ‑‑生育三烯酚的基因工程酵母菌株，命名为：YS‑356c，保藏编号为：CCTCC NO：M2019572。其总生育三烯酚产量达到2.09mg/g细胞干重。本发明的工程菌株可经发酵培养，直接从菌体中获得α‑和γ‑生育三烯酚，具有良好的市场前景和开应用价值。
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公开(公告)号：CN107987138B
公开(公告)日：2020-09-04
申请号：CN201711403958.5
申请日：2017-12-22
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明提供Gal4温敏型突变体，及利用其该突变体在酿酒酵母中构建温度调控系统及其应用。利用Gal4温敏型突变体构建的温度调控操作简单，无需添加诱导剂/抑制剂，实现对代谢流的精细调控。有利于其它对细胞毒性大的物质的生产。
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公开(公告)号：CN116790531A
公开(公告)日：2023-09-22
申请号：CN202310684268.0
申请日：2023-06-09
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种P450酶突变体、编码基因及其在制备皮质醇中的应用，属于生物工程技术领域。所述P450酶突变体是氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的智人来源CYP11B1通过氨基酸突变所得，氨基酸突变的位点为S146V、H331D、L440F中的至少一个。本发明提供的P450酶突变体相对野生型CYP11B1在大肠杆菌中具有更高的可溶性表达水平，构建的重组表达菌株的催化水平更高，可以以11‑脱氧皮质醇为底物制备皮质醇，产物的产率高，无副产物产生，具有很好的工业化应用前景。
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公开(公告)号：CN115792006A
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202211504985.2
申请日：2022-11-28
申请人： 浙江大学杭州国际科创中心
摘要： 本发明公开了一种检测类胡萝卜素同分异构体的方法，所述同分异构体包括β‑胡萝卜素和α‑胡萝卜素，叶黄素和玉米黄素，所述方法包括：针对待测样品，采用高效液相色谱法进行检测，流动相A为乙腈，流动相B为甲醇和异丙醇的混合液，混合液中甲醇和异丙醇的体积比为1～2：1；洗脱流程如下：开始洗脱时，流动相A为100％，流动相B为0％；在第5～15分钟，流动相A为70％～100％，流动相B为0％～30％；在第25～35分钟，流动相A为0％～50％，流动相B为50％～100％；在第35～45分钟，流动相A为60％～100％，流动相B为0％～40％。
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公开(公告)号：CN114196560A
公开(公告)日：2022-03-18
申请号：CN202111571019.8
申请日：2021-12-21
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种分阶段多层次调控异源合成的基因工程菌及其构建方法，属于基因工程技术领域。所述基因工程菌中构建有参与目标产物异源合成的酶编码基因和温度敏感蛋白编码基因，其中参与中间产物合成过程的酶的编码基因上游具有葡萄糖响应启动子，参与中间产物转化成目标产物过程的酶的编码基因上游具有由温度敏感蛋白控制激活的启动子。本发明利用葡萄糖响应控制中间产物合成途径，并利用温度调控系统控制下游模块，通过碳源和温度双重信号将细胞生长、中间产物积累和中间产物转化分成三个阶段，该调控手段可同时解决细胞生长与产物积累之间的矛盾以及细胞内部途径竞争这两大关键问题，为微生物异源合成叶黄素及其他天然产物提供了新的思路。
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