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公开(公告)号：CN105886450B
公开(公告)日：2020-01-03
申请号：CN201610287965.2
申请日：2016-05-04
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江野风药业股份有限公司 , 浙江绿创生物科技有限公司
Abstract: 本发明涉及一种酪氨酸酚裂解酶工程菌及其构建方法与应用，将酪氨酸酚裂解酶基因构建表达质粒，同时导入伴侣蛋白表达质粒所得到，鉴定为大肠埃希氏菌，命名为大肠埃希氏菌FPLF8（Escherichia coli HPLF8），保存于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2016年2月19日，保藏编号为CCTCCNO：M 2016065。利用该工程菌，可以通过发酵、转化合成左旋多巴，表达高效，表达产物稳定、活性高，可以在提供相关底物下，转化合成左旋多巴，工艺简单，成本低廉，产率高，同时三废排放少，具有工业化生产的应用价值。
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公开(公告)号：CN105821091A
公开(公告)日：2016-08-03
申请号：CN201610287966.7
申请日：2016-05-04
Applicant: 浙江绿创生物科技有限公司 , 浙江野风药业股份有限公司
CPC classification number: C12P13/222
Abstract: 本发明属于微生物酶法合成领域，涉及一种制备左旋多巴的方法，采用重组菌大肠埃希氏菌FDop（Escherichia coli FDop）发酵产生，FDop已保存于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2016年2月19日，保藏编号为CCTCC NO：M 2016064。具体包括如下步骤：（1）菌种活化，得到一级种子；（2）扩大培养，得到二级种子；（3）发酵培养：将所述二级种子接种到发酵培养基中，同时加入葡萄糖，转速350?450rpm，风量3?5L/min，控制pH6.0?6.5进行发酵，溶氧控制在15?30%，得到发酵液；（4）诱导：所述发酵液的OD600达到8?10，加入IPTG至终浓度为0.03?0.06mM，同时开始流加左旋酪氨酸溶液，诱导48?72小时，纯化得到左旋多巴。本发明制备左旋多巴的工艺易于控制，稳定性好，副产物少，左旋多巴的产率高。
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公开(公告)号：CN105886450A
公开(公告)日：2016-08-24
申请号：CN201610287965.2
申请日：2016-05-04
Applicant: 浙江绿创生物科技有限公司 , 浙江野风药业股份有限公司
Abstract: 本发明涉及一种酪氨酸酚裂解酶工程菌及其构建方法与应用，将酪氨酸酚裂解酶基因构建表达质粒，同时导入伴侣蛋白表达质粒所得到，鉴定为大肠埃希氏菌，命名为大肠埃希氏菌 FPLF8（Escherichia coli HPLF8），保存于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2016年2月19日，保藏编号为CCTCCNO：M 2016065。利用该工程菌，可以通过发酵、转化合成左旋多巴，表达高效，表达产物稳定、活性高，可以在提供相关底物下，转化合成左旋多巴，工艺简单，成本低廉，产率高，同时三废排放少，具有工业化生产的应用价值。
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公开(公告)号：CN110372769B
公开(公告)日：2020-10-02
申请号：CN201811653139.0
申请日：2018-12-29
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司 , 湖南新合新生物医药有限公司
Abstract: 本发明涉及一种甾体发酵后提取新方法，其包括以下工艺步骤：发酵液升温灭活；初始膜水通量的测定，发酵液进行膜过滤收集截留液，再进行膜的清洗，洗至初始膜水通量；所得截留液继续用甲醇萃取，分层得到甾体产品甲醇萃取液，再继续浓缩至粘稠状加水分散过滤得粗品；粗品再用第一种溶剂升温打浆，降温过滤得一精，一精再用第二种溶剂溶解、脱色、重结晶即得成品。本发明设计合理，工艺简单，可操作性强，工作环境毒害性小，不仅避免了传统工艺全萃法的的乳化难分离现象，而且提供了一种新型的分离方法，避免了有毒萃取有机溶剂的使用，解决了废水处理问题。该法成本低，收率高，最终产品符合市场品质要求。
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公开(公告)号：CN110055290A
公开(公告)日：2019-07-26
申请号：CN201810907482.7
申请日：2018-08-10
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司
Abstract: 本发明涉及一种固定化酶催化生产左旋多巴的方法，其特征在于：(1)挑单菌落接种到含LB培养基的试管中，加氨苄青霉素(100mg/L)30-37℃，220rpm，培养12-16h，得到一级种子；(2)将所述一级种子接种到含发酵培养基的摇瓶中培养10-12h；(3)离心收菌，得到菌体，压榨破胞，加壳聚糖溶液絮凝，高速离心，获得上清酶液，加入固定化载体EP200，25℃搅拌混合12-24h，三足式离心收集固定化酶，用50mM的磷酸钾缓冲液(pH8.0)，多次洗涤，过滤，获得固定化酶；(4)固定化酶20g，加入底物溶液，搅匀，25℃，密封震荡反应；所述底物溶液包括14-16g/L的丙酮酸钠、10-12g/L的邻苯二酚、40-45g/L的氯化铵、2-5g/L的亚硫酸钠、1-3g/L的EDTA，调pH7.5-8.5。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108218077A
公开(公告)日：2018-06-29
申请号：CN201711497937.4
申请日：2017-12-29
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司
IPC: C02F9/10 , C02F101/10 , C02F103/36
Abstract: 本发明提供了一种硫化氢去除和吡啶回收的方法。包括以下工艺步骤：在废水中加入双氧水，双氧水的用量为硫离子mol数的2～8倍，进行反应，加固体氢氧化钠调pH至7～10，再进行充分蒸馏，残留物为无机盐和硫磺；馏分加1～4倍的30～60％氢氧化钠溶液脱水分层，下层碱液打入蒸馏釜蒸馏后得到浓碱(30～60％氢氧化钠)，继续下一批套用，上层直接打入精馏塔进行精馏，收集115℃前的馏分与脱硫后的馏分一起再次脱水，收集115℃后的馏分，即得工业吡啶产品。本发明设计合理，工艺简单，可操作性强，工作环境毒害性小，不仅解决了6‑硫鸟嘌呤生产废水的排放问题，还提供了一种吡啶回收率高的方法，该法成本低，回收吡啶含量99％以上，水分不超过0.2％，达到了工业应用标准。
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公开(公告)号：CN110031583B
公开(公告)日：2022-01-18
申请号：CN201811629727.0
申请日：2018-12-29
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司
IPC: G01N30/88
Abstract: 本发明涉及一种分离测定N‑琥珀酰色氨酸对映异构体的液相色谱方法，现有的检测方法效率较低，准确度较差。本发明是采用蛋白键合型手性色谱柱，其主要包括以乙酸铵‑乙腈为流动相，对N‑琥珀酰‑色氨酸对映异构体进行分离测定。本发明N‑琥珀酰色氨酸对映异构体的高效液相分离检测方法，能够有效分离和测定N‑琥珀酰色氨酸对映异构体，专属性强，准确度高，可用于N‑琥珀酰色氨酸对映异构体的定性和定量。
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公开(公告)号：CN110055292A
公开(公告)日：2019-07-26
申请号：CN201810907765.1
申请日：2018-08-10
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司
Abstract: 本发明涉及一种丙酮酸和左旋多巴联产工艺与应用。采取如下的技术方案：(1)利用光滑球拟酵母发酵获得丙酮酸料液，料液经过陶瓷膜除菌，超滤膜除蛋白、核酸、色素等大分子；(2)根据丙酮酸的摩尔量向丙酮酸浓缩液加入一定量的邻苯二酚、醋酸铵、EDTA、亚硫酸钠等化合物，调pH7.0-9.0，配制成酶催化底物溶液；(3)利用酪氨酸酚裂解酶基因工程菌发酵获得酪氨酸酚裂解酶菌液，离心收菌体，高压均质机破胞，离心，收集酶液；(4)酶液加入一定量的底物溶液，搅匀，25℃，密封震荡反应；所述底物溶液为丙酮酸浓缩液配制,通过流加底物溶液控制邻苯二酚的浓度0-10g/L，产物达到120g/L以上，停止流加底物溶液，当反应液中邻苯二酚含量低于0.2g/L，停止反应。
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公开(公告)号：CN110031583A
公开(公告)日：2019-07-19
申请号：CN201811629727.0
申请日：2018-12-29
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司
IPC: G01N30/88
Abstract: 本发明涉及一种分离测定N-琥珀酰色氨酸对映异构体的液相色谱方法，现有的检测方法效率较低，准确度较差。本发明是采用蛋白键合型手性色谱柱，其主要包括以乙酸铵-乙腈为流动相，对N-琥珀酰-色氨酸对映异构体进行分离测定。本发明N-琥珀酰色氨酸对映异构体的高效液相分离检测方法，能够有效分离和测定N-琥珀酰色氨酸对映异构体，专属性强，准确度高，可用于N-琥珀酰色氨酸对映异构体的定性和定量。
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公开(公告)号：CN108218077B
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN201711497937.4
申请日：2017-12-29
Applicant: 浙江工业大学 , 浙江绿创生物科技有限公司
IPC: C02F9/10 , C02F101/10 , C02F103/36
Abstract: 本发明属于工业废水的处理技术领域，具体涉及一种从6‑硫鸟嘌呤生产废水中去除硫离子并回收吡啶的方法：(1)对废水中吡啶和硫离子含量进行测定，在废水中加入双氧水氧化脱硫，双氧水的用量为硫离子摩尔数的2～8倍，进行反应，反应温度为10～60℃，反应结束后，再加固体氢氧化钠调pH至7～10，再进行蒸馏获得脱硫后的馏分；(2)根据脱硫后馏分的量，加入1～4倍体积的氢氧化钠溶液搅拌1‑1.5h，静置分层，上层料液再次精馏，收集115℃后的馏分，获得吡啶产品，本发明设计合理，工艺简单，工作环境毒害性小，硫化氢去除率高，吡啶回收率高，回收吡啶含量99％以上，水分不超过0.2％，达到了6‑硫鸟嘌呤生产原料吡啶的品质要求，也达到了工业标准。
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