公开(公告)号：CN112142851B

公开(公告)日：2023-05-05

申请号：CN201910577765.4

申请日：2019-06-28

申请人： 浙江海隆生物科技有限公司

发明人： 钱泓 ,  吴有强 ,  卞广林 ,  张强 ,  徐玉兰 ,  吴素芳 ,  车影 ,  蔡灵芝 ,  贾宝琴 ,  屠莉洁

IPC分类号： C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  C12N15/85 ,  A61K39/205 ,  A61P31/14

摘要： 本发明提供了一种狂犬病毒表面的亚单位融合蛋白tG及其制备方法和应用，所述制备方法包括：1)将如SEQ ID NO.4所示的基因序列克隆到真核表达载体中，得到含有融合蛋白tG编码基因的重组质粒；2)再将含有融合蛋白tG编码基因的重组质粒转染至表达细胞中；3)通过培养、筛选、驯化步骤2)中所述表达细胞，得到高度表达的细胞株；4)发酵培养步骤3)中所述细胞株，纯化后，得到亚单位融合蛋白tG。本发明能够在大量可溶性表达tG，蛋白稳定，克服了现有技术中狂犬病毒表面G蛋白不能大规模表达等诸多问题，且制备方法简单、成本低。

公开(公告)号：CN107228894B

公开(公告)日：2019-03-19

申请号：CN201710054090.6

申请日：2017-01-24

申请人： 浙江海隆生物科技有限公司

发明人： 钱泓 ,  吴有强 ,  贾宝琴 ,  屠莉洁 ,  查银河

IPC分类号： G01N27/447

摘要： 本发明提供了一种油乳剂蛋白亚单位疫苗中蛋白含量和纯度的检测方法及其应用，该方法包括：1)使用冷丙酮沉淀疫苗中的蛋白；2)SDS‑PAGE电泳；3)使用灰度扫描仪对各条带进行灰度扫描；4)结合灰度扫描的结果计算疫苗中蛋白含量和纯度。该方法既解决了油乳剂疫苗中抗原蛋白解离效率低且易变性降解的问题，也解决了成品兽用油乳剂蛋白亚单位疫苗的质检中使用靶动物进行实验的难题，在抗原蛋白含量的定量及纯度的检测中准确率达到90％以上；且不会导致抗原蛋白的变性降解且易重复；同时通过对得到的抗原蛋白进行一次SDS‑PAGE检测就能够获得油乳剂蛋白亚单位疫苗中抗原蛋白的含量和纯度的结果，节约了成本、劳动力和时间。

公开(公告)号：CN112430273A

公开(公告)日：2021-03-02

申请号：CN201910792908.3

申请日：2019-08-26

申请人： 浙江海隆生物科技有限公司

发明人： 钱泓 ,  吴有强 ,  卞广林 ,  张强 ,  徐玉兰 ,  吴素芳 ,  车影 ,  蔡灵芝 ,  贾宝琴 ,  屠莉洁

IPC分类号： C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  C12N15/85 ,  G01N33/68 ,  G01N33/569 ,  A61K39/205 ,  A61P31/14

摘要： 本发明提供了一种狂犬病毒表面的亚单位融合蛋白mG及其制备方法和应用，所述制备方法包括：1)将如SEQ ID NO.4所示的基因序列克隆到真核表达载体中，得到含有融合蛋白MBP‑G编码基因的重组质粒；2)再将含有融合蛋白MBP‑G编码基因的重组质粒转染至表达细胞中；3)通过培养、筛选、驯化步骤2)中所述表达细胞，得到高度表达的细胞株；4)发酵培养步骤3)中所述细胞株，纯化后，得到亚单位融合蛋白mG。本发明能够在大量可溶性表达mG，蛋白稳定，克服了现有技术中狂犬病毒表面G蛋白不能大规模表达等诸多问题，且制备方法简单、成本低。

公开(公告)号：CN110041411A

公开(公告)日：2019-07-23

申请号：CN201810036856.2

申请日：2018-01-15

申请人： 浙江海隆生物科技有限公司

发明人： 钱泓 ,  吴有强 ,  卞广林 ,  张强 ,  徐玉兰 ,  吴素芳 ,  车影 ,  闻雪 ,  贾宝琴 ,  屠莉洁 ,  李泽峰 ,  查银河

IPC分类号： C07K14/18 ,  C12N15/85 ,  G01N33/68 ,  G01N33/569 ,  A61K39/187 ,  A61P31/14

摘要： 本发明公开了一种稳定的非典型猪瘟病毒亚单位蛋白及其疫苗和制备方法和应用，其为非典型猪瘟病毒亚单位蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，该亚单位蛋白具有良好的免疫原性。制备该亚单位蛋白的步骤为：1)将SEQ ID NO.1所示的基因序列克隆到真核表达载体中得到含有非典型猪瘟病毒亚单位蛋白编码基因的重组质粒；2)再将含有非典型猪瘟病毒亚单位蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中；3)通过培养、筛选、驯化2)中所述的CHO细胞株得到高度表达的细胞株；4)发酵培养3)中所述的细胞株，纯化后得到非典型猪瘟病毒亚单位蛋白。本发明制备该亚单位蛋白的方法简单、成本低、易于放大。将适量亚单位蛋白与佐剂混合后得到亚单位疫苗，该疫苗具有良好的免疫原性。

公开(公告)号：CN110041411B

公开(公告)日：2023-10-03

申请号：CN201810036856.2

申请日：2018-01-15

申请人： 浙江海隆生物科技有限公司

发明人： 钱泓 ,  吴有强 ,  卞广林 ,  张强 ,  徐玉兰 ,  吴素芳 ,  车影 ,  闻雪 ,  贾宝琴 ,  屠莉洁 ,  李泽峰 ,  查银河

IPC分类号： C07K14/18 ,  C12N15/85 ,  G01N33/68 ,  G01N33/569 ,  A61K39/187 ,  A61P31/14

摘要： 本发明公开了一种稳定的非典型猪瘟病毒亚单位蛋白及其疫苗和制备方法和应用，其为非典型猪瘟病毒亚单位蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，该亚单位蛋白具有良好的免疫原性。制备该亚单位蛋白的步骤为：1)将SEQ ID NO.1所示的基因序列克隆到真核表达载体中得到含有非典型猪瘟病毒亚单位蛋白编码基因的重组质粒；2)再将含有非典型猪瘟病毒亚单位蛋白编码基因的重组质粒转染至CHO细胞中；3)通过培养、筛选、驯化2)中所述的CHO细胞株得到高度表达的细胞株；4)发酵培养3)中所述的细胞株，纯化后得到非典型猪瘟病毒亚单位蛋白。本发明制备该亚单位蛋白的方法简单、成本低、易于放大。将适量亚单位蛋白与佐剂混合后得到亚单位疫苗，该疫苗具有良好的免疫原性。

公开(公告)号：CN112142851A

公开(公告)日：2020-12-29

申请号：CN201910577765.4

申请日：2019-06-28

申请人： 浙江海隆生物科技有限公司

发明人： 钱泓 ,  吴有强 ,  卞广林 ,  张强 ,  徐玉兰 ,  吴素芳 ,  车影 ,  蔡灵芝 ,  贾宝琴 ,  屠莉洁

IPC分类号： C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  C12N15/85 ,  A61K39/205 ,  A61P31/14

摘要： 本发明提供了一种狂犬病毒表面的亚单位融合蛋白tG及其制备方法和应用，所述制备方法包括：1)将如SEQ ID NO.4所示的基因序列克隆到真核表达载体中，得到含有融合蛋白tG编码基因的重组质粒；2)再将含有融合蛋白tG编码基因的重组质粒转染至表达细胞中；3)通过培养、筛选、驯化步骤2)中所述表达细胞，得到高度表达的细胞株；4)发酵培养步骤3)中所述细胞株，纯化后，得到亚单位融合蛋白tG。本发明能够在大量可溶性表达tG，蛋白稳定，克服了现有技术中狂犬病毒表面G蛋白不能大规模表达等诸多问题，且制备方法简单、成本低。

公开(公告)号：CN107228894A

公开(公告)日：2017-10-03

申请号：CN201710054090.6

申请日：2017-01-24

申请人： 浙江海隆生物科技有限公司

发明人： 钱泓 ,  吴有强 ,  贾宝琴 ,  屠莉洁 ,  查银河

IPC分类号： G01N27/447

CPC分类号： G01N27/447 ,  G01N27/44726

摘要： 本发明提供了一种油乳剂蛋白亚单位疫苗中蛋白含量和纯度的检测方法及其应用，该方法包括：1)使用冷丙酮沉淀疫苗中的蛋白；2)SDS‑PAGE电泳；3)使用灰度扫描仪对各条带进行灰度扫描；4)结合灰度扫描的结果计算疫苗中蛋白含量和纯度。该方法既解决了油乳剂疫苗中抗原蛋白解离效率低且易变性降解的问题，也解决了成品兽用油乳剂蛋白亚单位疫苗的质检中使用靶动物进行实验的难题，在抗原蛋白含量的定量及纯度的检测中准确率达到90％以上；且不会导致抗原蛋白的变性降解且易重复；同时通过对得到的抗原蛋白进行一次SDS‑PAGE检测就能够获得油乳剂蛋白亚单位疫苗中抗原蛋白的含量和纯度的结果，节约了成本、劳动力和时间。