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公开(公告)号：CN104611418A
公开(公告)日：2015-05-13
申请号：CN201410820919.5
申请日：2014-12-25
申请人： 淮海工学院
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： C12Q1/683 , C12Q1/686 , C12Q2531/113 , C12Q2565/125
摘要： 本发明是一种三疣梭子蟹线粒体基因组甲基化位点标记检测技术，其特征是首先提取三疣梭子蟹线粒体基因组DNA，然后利用重亚硫酸氢盐对该线粒体基因组DNA进行处理，在此基础上利用设计的甲基化引物对该处理后的基因组DNA进行PCR扩增，并对获得的扩增产物进行测序分析，从中获得了一个含有甲基化位点的序列，进而确立了扩增该甲基化位点序列的PCR引物，利用该引物可以确定不同亲本及其子代的遗传特征。本发明适用于三疣梭子蟹种质鉴定、增殖放流标记等研究。
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公开(公告)号：CN104498479A
公开(公告)日：2015-04-08
申请号：CN201510019776.2
申请日：2015-01-15
申请人： 淮海工学院 , 连云港市高公岛黄窝捕捞养殖公司 , 连云港赣榆佳信水产开发有限公司 , 连云港市海洋与水产科学研究所
IPC分类号： C12N15/10
摘要： 本发明是一种刺参免提DNA的 PCR快速扩增方法，其步骤是：将刺参处死后用微量注射器肌肉内抽取体液0.02-1μL入200μL PCR管中，置于冰浴备用；当不能立即PCR时将其置-20℃下保存，1周内有效；一步法PCR：以上述PCR管的体液为模板，进行25μL体系下的PCR扩增：反应条件为普通PCR条件，扩增程序为：94 ℃预变性4 min；94 ℃变性40 s，50-60 ℃退火40 s，72 ℃延伸40 s，共35个循环；72 ℃延伸6 min，4 ℃保存；再按照常规的琼脂糖凝胶电泳检测。本发明方法设计简便合理，可操作性强，无需经过DNA抽提过程，即可获得理想的扩增效果。
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公开(公告)号：CN104404166B
公开(公告)日：2016-09-28
申请号：CN201410826860.0
申请日：2014-12-25
申请人： 连云港市海洋与水产科学研究所 , 连云港市海珍品增养殖试验场 , 淮海工学院 , 连云港赣榆佳信水产开发有限公司 , 连云港海浪水产养殖有限公司 , 连云港帅森海水养殖专业合作社
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 本发明是一种仿刺参种质鉴定方法，所述的鉴定方法步骤如下：（1）样本提取：将疑似仿刺参样本，随机取样，加液氮在研砵中研成粉末，分装到2mL EP管中；提取DNA；（2）PCR鉴定；（3）鉴定标准：产物8%聚丙烯酰胺凝胶电泳2.5h，银染显色后扫描仪成像；引物Aja2‑111的结果为111bp的一条带；引物Aja13‑144的结果为144bp的一条带；引物Aja15‑185的结果为185bp和384bp的2条带；（4）结果判定：用引物扩增出如步骤（3）所述的条带时，判定样本是仿刺参。本发明方法设计合理，操作方便快捷，准确度高，有效地克服现有经验性鉴定和利用刺参分类专家才可鉴定的缺陷。
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公开(公告)号：CN104630207A
公开(公告)日：2015-05-20
申请号：CN201510072067.0
申请日：2015-02-11
申请人： 淮海工学院 , 连云港赣榆佳信水产开发有限公司 , 连云港市海洋与水产科学研究所 , 连云港帅森海水养殖专业合作社
摘要： 本发明是一种海洋动物标本保存与DNA提取一体化方法，其步骤如下：将海洋动物处死后的全体或者部分放入标本瓶，或者同时按每份动物组织0.05-1g分装到2mL EP管中；向标本瓶与/或2mL EP管中加入标本固定与DNA提取一体化试剂；将标本瓶中的组织样本取0.05-1g移入2mL EP管，并吸取原标本瓶中的固定液0.6mL，或者直接取分装并加入试剂的2mL EP管，在55℃下消化1-4h，然后按照常规的酚－氯仿法提取DNA。本发明方法设计合理，操作方便，可以实现海洋动物标本保存与DNA提取一体化操作。
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公开(公告)号：CN104611418B
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201410820919.5
申请日：2014-12-25
申请人： 淮海工学院
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 本发明是一种三疣梭子蟹线粒体基因组甲基化位点标记检测方法，其特征是首先提取三疣梭子蟹线粒体基因组DNA，然后利用重亚硫酸氢盐对该线粒体基因组DNA进行处理，在此基础上利用设计的甲基化引物对该处理后的基因组DNA进行PCR扩增，并对获得的扩增产物进行测序分析，从中获得了一个含有甲基化位点的序列，进而确立了扩增该甲基化位点序列的PCR引物，利用该引物可以确定不同亲本及其子代的遗传特征。本发明适用于三疣梭子蟹种质鉴定、增殖放流标记等研究。
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公开(公告)号：CN102887961A
公开(公告)日：2013-01-23
申请号：CN201210333998.8
申请日：2012-09-12
申请人： 淮海工学院
摘要： 一种青蛤多糖提取物的提取方法，取青蛤软体部位为原材料，洗净、绞碎后，加水煎煮1-3次，每次煎煮2-4小时，煎煮时水与青蛤软体原材料的质量比为5-20:1；滤过，合并煎煮液，然后将煎煮液在3000-8000转/分下离心，收集上清液，浓缩后，向浓缩液中加入蛋白酶，在4℃下静置12-24小时进行脱蛋白处理，收集脱蛋白后的水溶液；向脱蛋白后的水溶液中加入无水乙醇以沉淀多糖，无水乙醇在搅拌状态下加入，所加无水乙醇在沉淀体系中的体积百分含量为60-80%；滤过，得沉淀物，干燥得青蛤多糖提取物。本发明方法原料易得，操作简单方便，可操作性强，该方法可以有效地提取得到具有较强抗氧化能力的青蛤多糖成份。
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公开(公告)号：CN102140504A
公开(公告)日：2011-08-03
申请号：CN201010569644.4
申请日：2010-11-29
申请人： 淮海工学院
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 本发明是一种三疣梭子蟹微卫星SSR-18检测技术，其特征是首先提取三疣梭子蟹基因组DNA，然后建立三疣梭子蟹富含微卫星的基因组文库，再对文库进行测序获得富含微卫星的序列；挑选出基因组文库中的SSR-18序列，并在其序列两端设计适合PCR扩增的特异性引物，并对三疣梭子蟹基因组DNA进行PCR扩增，将获得的PCR产物在变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳分离，利用产物出现的条带进行分析，确定每个个体的基因型。本发明适用于三疣梭子蟹系谱认证、遗传图谱构建和遗传结构分析等研究。
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公开(公告)号：CN101393006B
公开(公告)日：2010-08-11
申请号：CN200810195260.3
申请日：2008-11-10
申请人： 淮海工学院 , 慈溪市水产技术推广中心
IPC分类号： G01B5/02
摘要： 本发明是一种彩虹明樱蛤的种质鉴定方法，其特征在于，其步骤如下，取至少30个待测样品彩虹明樱蛤进行7个形态学参数的测定，分别测定其壳长CD、壳顶到前闭壳肌痕最大距离AF、外套痕前后缘长IJ、壳顶到外套痕后缘长AE、壳高AB、壳宽SW和前后闭壳肌痕间距离GH这7个参数；然后以壳长CD参数值作分母、其余6个参数值作分子，获得6个比例参数值XAF：AF/CD；XIJ：IJ/CD；XAE：AE/CL；XAB：AB/CL；XSW：SW/CD；XGH：GH/CD；并将这6个比例参数值分别代入判别方程中进行结果判定，根据所得Y值的最大值出现频率最多的群体即为待测样品彩虹明樱蛤所处的来源。本发明方法可以快速、经济、相对准确和操作简便地鉴定中国主要产地彩虹明樱蛤的种质。
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公开(公告)号：CN101301225B
公开(公告)日：2010-07-14
申请号：CN200810123113.5
申请日：2008-06-05
申请人： 淮海工学院
IPC分类号： A61B19/00
CPC分类号： Y02A40/81
摘要： 本发明是一种三疣梭子蟹的种质鉴定方法，其特征在于，其步骤如下，取至少30个待测样品梭子蟹进行7个形态学参数的测定，分别测定其背甲长CL、背甲宽CW、内背甲宽ICW、腹部宽AW、螯肢长节长ML、第5步足趾节宽5PW和螯肢腕骨上外面的棘长OCS这7个参数；然后以背甲长CL参数值作分母、其余6个参数值作分子，获得X1、X2、X9、X14、X17、X196个比例参数值并将这6个比例参数值分别代入判别方程中进行结果判定，根据所得Y值的最大值出现频率最多的群体即为待测样品梭子蟹所处的来源。本发明方法可以快速、经济、相对准确和操作简便地鉴定三疣梭子蟹的种质。
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公开(公告)号：CN101301225A
公开(公告)日：2008-11-12
申请号：CN200810123113.5
申请日：2008-06-05
申请人： 淮海工学院
IPC分类号： A61B19/00
CPC分类号： Y02A40/81
摘要： 本发明是一种三疣梭子蟹的种质鉴定方法，其特征在于，其步骤如下，取至少30个待测样品梭子蟹进行7个形态学参数的测定，分别测定其背甲长CL、背甲宽CW、内背甲宽ICW、腹部宽AW、螯肢长节长ML、第5步足趾节宽5PW和螯肢腕骨上外面的棘长OCS这7个参数；然后以背甲长CL参数值作分母、其余6个参数值作分子，获得X1、X2、X9、X14、X17、X196个比例参数值并将这6个比例参数值分别代入判别方程中进行结果判定，根据所得Y值的最大值出现频率最多的群体即为待测样品梭子蟹所处的来源。本发明方法可以快速、经济、相对准确和操作简便地鉴定三疣梭子蟹的种质。
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