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公开(公告)号：CN119391745A
公开(公告)日：2025-02-07
申请号：CN202411537563.4
申请日：2024-10-31
Applicant: 深圳大学
Abstract: 本发明公开了甲硫氨酸营养筛选标记酿酒酵母载体及其构建方法与应用，涉及基因工程和合成生物学领域，通过基因人工合成获得甲硫氨酸MET17启动子和编码区序列，通过使用同源重组替换pAG415‑GAL1‑ccdB载体中的亮氨酸启动子和编码区序列，构建获得pAG415‑GAL1‑MET‑ccdB表达载体，通过将绿色荧光蛋白报告基因GFP序列替换ccdB基因整合至pAG415‑GAL1‑MET‑ccdB载体中，构建获得pAG415‑GAL1‑GFP‑MET载体，本发明获得的表达载体可用于在甲硫氨酸缺陷型培养基筛选外源基因转化子，同时载体中携带的绿色荧光GFP标签蛋白，为在酿酒细胞中对目的基因开展亚细胞定位、免疫沉淀等下游遗传、分子生物学分析提供了更多应用空间。
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公开(公告)号：CN115820718A
公开(公告)日：2023-03-21
申请号：CN202211501386.5
申请日：2022-11-28
Applicant: 深圳大学
Abstract: 本发明提供了一种莱茵衣藻叶绿体中附加体质粒的构建方法及其应用。本发明构建了Rep基因表达质粒，以及携带外源基因的前体附加体质粒，其两端具有Rep蛋白识别序列；之后将两种质粒共转入莱茵衣藻中，通过表达的Rep蛋白识别所述Rep蛋白识别序列，并引导所述前体附加体质粒成环，得到所述附加体质粒。本发明在莱茵衣藻叶绿体基因组中构建附加体质粒来表达或转录外源基因的方法，不涉及将外源基因插入原基因组中，因此不需要同质化过程，节约了筛选时间，并且能在叶绿体中稳定遗传，避免了外源基因丢失现象；而且附加体质粒上的外源蛋白能够进行高效的转录和翻译；不仅如此，所述附加体质粒还可以用于转录功能RNA。
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公开(公告)号：CN119391744A
公开(公告)日：2025-02-07
申请号：CN202411529663.2
申请日：2024-10-30
Applicant: 深圳大学
Abstract: 本发明公开了酿酒酵母半乳糖诱导型弱启动子载体及其构建方法与应用，涉及基因工程和合成生物学领域，本发明通过对GAL1启动子进行定点突变获得启动子GAL1mu1和GAL1mu2；使用pAG416‑GAL1‑ccdB为模板，通过定点突变和同源重组将突变序列整合至载体中，获得pAG416‑GAL1mu1‑ccdB和pAG416‑GAL1mu2‑ccdB，载体的正确性通过EcoRV酶切和Sanger测序进行验证，可使目的基因在半乳糖诱导的条件下在酿酒酵母细胞中特异性低水平表达，为减少异源蛋白对酿酒酵母的细胞毒性，以及精确调控基因的表达和代谢途径提供有效分子工具。
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