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公开(公告)号：CN101885787B
公开(公告)日：2014-07-09
申请号：CN200910039359.9
申请日：2009-05-11
申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司
IPC分类号： C08B37/10
摘要： 本发明公开了一种从肝素副产物纯化硫酸乙酰肝素的方法，以肝素副产物为原料，溶解后加入醋酸钾，通过醋酸调节溶液的pH值，去沉淀后得到硫酸多糖溶液，向硫酸多糖溶液加入斑氏试剂和饱和氢氧化钠溶液、离心、收集清液，沉淀中再加入斑氏试剂和饱和氢氧化钠溶液、离心、收集清液，清液合并，上一根阴离子交换性质的层析柱，以氯化钠溶液洗去铜离子，再以氯化钠溶液线性梯度洗脱，收集洗脱液，将洗脱液蒸发浓缩以乙醇沉淀得到高纯度的硫酸乙酰肝素。本发明的纯化工艺简单、纯化收率高、成本低、容易放大、适于工业化生产。
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公开(公告)号：CN101886067A
公开(公告)日：2010-11-17
申请号：CN200910039360.1
申请日：2009-05-11
申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司
摘要： 本发明提供了一种肝素酶I的制备方法，以肝素黄杆菌为原料，将肝素黄杆菌接到种子培养基中培养、再接到发酵培养基、离心收集沉淀、沉淀超声破碎、再离心而得到肝素黄杆菌肝素酶I的粗酶液，通过对粗酶液进行三次SP-Sepharose FF层析纯化得到高纯度的肝素黄杆菌肝素酶I。其中三次SP-Sepharose FF层析纯化都由氯化钙全程保护，大大增加了纯酶活性收率。本发明具有工艺简单、容易放大、产品单次制备量大、试剂成本低等特点，制备的肝素酶I比活高达223IU/mg，纯酶活性收率高达30％，与现有最新方法相比，比活增加了两倍多，纯化收率增加将近一倍。
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公开(公告)号：CN101885782B
公开(公告)日：2012-07-04
申请号：CN200910039361.6
申请日：2009-05-11
申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司
IPC分类号： C08B37/00
摘要： 本发明公开了一种从肝素副产物纯化硫酸皮肤素的方法，本发明以肝素副产物为原料，溶解后加入醋酸钾，以醋酸调节溶液的pH值产生沉淀，清液为硫酸多糖溶液，向硫酸多糖溶液加入斑氏试剂、饱和氢氧化钠溶液，离心收集沉淀，重沉淀，再将沉淀溶解，以阴离子交换性质的层析柱、氯化钠溶液洗去铜离子，再以氯化钠溶液线性梯度洗脱，收集洗脱液，将洗脱液蒸发浓缩以乙醇沉淀得到高纯度的硫酸皮肤素。本发明的纯化工艺简单、纯化收率高、成本低、容易放大、适于工业化生产。
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公开(公告)号：CN101885782A
公开(公告)日：2010-11-17
申请号：CN200910039361.6
申请日：2009-05-11
申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司
IPC分类号： C08B37/00
摘要： 本发明公开了一种从肝素副产物纯化硫酸皮肤素的方法，本发明以肝素副产物为原料，溶解后加入醋酸钾，以醋酸调节溶液的pH值产生沉淀，清液为硫酸多糖溶液，向硫酸多糖溶液加入斑氏试剂、饱和氢氧化钠溶液，离心收集沉淀，重沉淀，再将沉淀溶解，以阴离子交换性质的层析柱、氯化钠溶液洗去铜离子，再以氯化钠溶液线性梯度洗脱，收集洗脱液，将洗脱液蒸发浓缩以乙醇沉淀得到高纯度的硫酸皮肤素。本发明的纯化工艺简单、纯化收率高、成本低、容易放大，适于工业化生产。
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公开(公告)号：CN101885787A
公开(公告)日：2010-11-17
申请号：CN200910039359.9
申请日：2009-05-11
申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司
IPC分类号： C08B37/10
摘要： 本发明公开了一种从肝素副产物纯化硫酸乙酰肝素的方法，以肝素副产物为原料，溶解后加入醋酸钾，通过醋酸调节溶液的pH值，去沉淀后得到硫酸多糖溶液，向硫酸多糖溶液加入斑氏试剂和饱和氢氧化钠溶液、离心、收集清液，沉淀中再加入斑氏试剂和饱和氢氧化钠溶液、离心、收集清液，清液合并，上一根阴离子交换性质的层析柱，以氯化钠溶液洗去铜离子，再以氯化钠溶液线性梯度洗脱，收集洗脱液，将洗脱液蒸发浓缩以乙醇沉淀得到高纯度的硫酸乙酰肝素。本发明的纯化工艺简单、纯化收率高、成本低、容易放大，适于工业化生产。
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公开(公告)号：CN101886067B
公开(公告)日：2012-03-07
申请号：CN200910039360.1
申请日：2009-05-11
申请人： 深圳市海普瑞药业股份有限公司
摘要： 本发明提供了一种肝素酶I的制备方法，以肝素黄杆菌为原料，将肝素黄杆菌接到种子培养基中培养、再接到发酵培养基、离心收集沉淀、沉淀超声破碎、再离心而得到肝素黄杆菌肝素酶I的粗酶液，通过对粗酶液进行三次SP-Sepharose FF层析纯化得到高纯度的肝素黄杆菌肝素酶I。其中三次SP-Sepharo se FF层析纯化都由氯化钙全程保护，大大增加了纯酶活性收率。本发明具有工艺简单、容易放大、产品单次制备量大、试剂成本低等特点，制备的肝素酶I比活高达223IU/mg，纯酶活性收率高达30％，与现有最新方法相比，比活增加了两倍多，纯化收率增加将近一倍。
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