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发明公开
含sn-1,3定向脂肪酶的融合蛋白及其全程可视化制备方法和应用审中-实审

公开(公告)号：CN117586421A

公开(公告)日：2024-02-23

申请号：CN202311596081.1

申请日：2023-11-24

申请人： 湖北大学

发明人： 翟超 , 杨茗钧 , 马立新 , 王飞

IPC分类号： C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/70 , C12N11/08 , C12P7/62

摘要： 本发明提供了一种含sn‑1,3定向脂肪酶的融合蛋白及其全程可视化制备方法和应用，所述融合蛋白由sn‑1,3定向脂肪酶与sfGFP突变体通过连接肽构建而成，其中sfGFP突变体净带负电荷且其融合表达在sn‑1,3定向脂肪酶的C端，连接肽由2～10个酸性氨基酸组成。本发明通过融合净带负电荷的sfGFP突变体和添加酸性氨基酸的方式，有效促进了目的蛋白的分泌表达，而且可采用阴离子交换树脂直接对培养上清中的目的蛋白进行吸附从而获得固定化酶。本发明方案具有操作简便、制备成本低、酶的纯度高、全程可视化等优点，且提供的融合蛋白的酶活性与市售的定向脂肪酶相当，工业应用潜力大。