基于LwaCas13a的非扩增核酸检测组合物、试剂盒和方法

    公开(公告)号:CN117660609B

    公开(公告)日:2024-07-23

    申请号:CN202311591904.1

    申请日:2023-11-24

    Applicant: 湖北大学

    Abstract: 本发明公开了基于LwaCas13a的非扩增核酸检测组合物、试剂盒和方法,所述组合物和试剂盒中包括URH以及靶向该URH的crRNA‑1,所述URH为具有茎环结构的单链RNA分子,且其环的部分序列中带有U碱基位点,其茎的部分序列为与crRNA‑1识别互补的结合区域。本发明利用LwaCas13a和URH构建了荧光信号循环放大机制,能够有效增加核酸检测的灵敏度,而且检测结果可靠、检测时间仅需5‑10min、操作简便,本发明为无扩增核酸检测提供了一种新的途径和策略。

    一种真核生物来源的Cs_Argonaute蛋白质及其应用

    公开(公告)号:CN118256565A

    公开(公告)日:2024-06-28

    申请号:CN202410427777.X

    申请日:2024-04-10

    Applicant: 湖北大学

    Abstract: 本发明公开了一种真核生物来源的Cs_Argonaute蛋白质及其应用,所述Cs_Argonaute蛋白质为氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的蛋白质,或为与SEQ ID NO:1所示序列的非催化活性位点具有至少90%序列一致性且功能相同的蛋白质;该Cs_Argonaute蛋白质不仅具有对单链向导DNA、RNA互补配对的靶RNA具有专一性核酸酶活性,而且具有对单链向导RNA互补配对的靶DNA具有核酸酶活性,更特别之处在于具有对单链向导DNA互补配对的靶DNA具有核酸酶活性,这在之前的研究中鲜有报道。本发明为基于真核生物来源的Argonaute蛋白质的基因编辑、修饰及分子检测提供了一种新的工具。

    一种耐高温TnpB蛋白及其在核酸检测中的应用

    公开(公告)号:CN117512071B

    公开(公告)日:2024-06-04

    申请号:CN202311201983.0

    申请日:2023-09-15

    Applicant: 湖北大学

    Abstract: 本发明公开了一种耐高温TnpB蛋白及其在核酸检测中的应用,所述耐高温TnpB蛋白具有反式切割活性,且具体为Sis_TnpB蛋白、Sso_TnpB蛋白、Sto_TnpB蛋白、Tsi_TnpB蛋白、Tvo_TnpB蛋白中的一种。本发明所述的TnpB蛋白来源于嗜热微生物,同时具有顺式和反式切割活性,可实现体外核酸检测,而且所述TnpB蛋白的反式切割活性对TAM和靶标序列上的突变非常敏感,故其在区分病毒不同分型单碱基突变等方面具有独特的价值。本发明提供的核酸检测方法还能与等温扩增技术联用,提高检测灵敏度的同时还可实现一管式检测,避免交叉污染。因此,本发明提供的新型核酸检测工具在病原微生物检测、分子诊断等领域具有极大的应用前景。

    一种寨卡病毒核酸检测试剂盒和检测方法

    公开(公告)号:CN117487966A

    公开(公告)日:2024-02-02

    申请号:CN202311537812.5

    申请日:2023-11-15

    Applicant: 湖北大学

    Abstract: 本发明公开了一种寨卡病毒核酸检测试剂盒和检测方法,所述检测试剂盒包括PfAgo蛋白、序列如SEQ ID NO.1~3所示的gDNAs以及序列如SEQ ID NO.4所示的分子信标。本发明建立了一种新型的核酸检测系统,该系统基于PfAgo介导的核酸检测,靶向寨卡病毒基因组的非结构蛋白5区域。本发明方法在PCR预扩增的情况下,MDC约为10nM;而引入扩增步骤后,MDC可大幅降至8.3aM;此外,ZIKV‑PAND临床模拟样本的诊断结果显示与qRT‑PCR检测的一致性达到100%,这将有助于ZIKV感染的临床诊断和流行病学调查的分子检测。

    一种短糖链修饰的IsPETase及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN115927248B

    公开(公告)日:2023-11-07

    申请号:CN202210993069.3

    申请日:2022-08-18

    Applicant: 湖北大学

    Abstract: 本发明属于基因工程技术领域,公开了一种短糖链修饰的IsPETase及其制备方法和应用,其制备方法具体为:先构建IsPETase多拷贝串联表达载体,再将IsPETase多拷贝表达载体转化宿主细胞,发酵后收集上清,其中所述宿主细胞为真核生物细胞,采用滤膜过滤上清,然后加入Endo H进行反应即得。本发明所得的重组IsPETase具有短糖链修饰且具备高热稳定性和高活性,而且该制备方法通过基因剂量效应和高密度表达能有效提高产量,适用于工业化生产。

    一种仅具有RNA靶切割活性的原核Argonaute蛋白质在RNA编辑中的应用

    公开(公告)号:CN115927251B

    公开(公告)日:2023-10-20

    申请号:CN202210794665.9

    申请日:2022-07-07

    Applicant: 湖北大学

    Abstract: 本发明公开了一种仅具有RNA靶切割活性的原核Argonaute蛋白质在RNA编辑中的应用,所述Argonaute蛋白质来源于中温原核生物Verrucomicrobia bacterium,其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示或为与SEQ ID NO:1相似度极高且具有相同功能的蛋白质;该蛋白质对单链向导DNA具有结合活性,并且仅仅只对与单链向导DNA互补配对的RNA靶具有核酸酶活性,故可利用该蛋白质进行体内外靶向RNA编辑,为RNA编辑提供了一个全新的有力工具。

    蛋白酶K突变体及其制备方法

    公开(公告)号:CN113913412B

    公开(公告)日:2023-10-03

    申请号:CN202111193669.3

    申请日:2021-10-13

    Applicant: 湖北大学

    Abstract: 本发明公开了蛋白酶K突变体及其制备方法,属于蛋白质工程技术领域,其中所述突变体为:将如SEQ ID NO.1所示的野生型蛋白酶K的第44位氨基酸突变,具体为将第44位的丙氨酸突变为丝氨酸。本发明以蛋白酶K的晶体结构为基础,通过蛋白质工程和定点突变等技术对蛋白酶K进行改造,首次获得了如SEQ ID NO.3所示的突变体A44S。研究发现该突变体A44S的比酶活较野生型提高约21%,从而降低了蛋白酶K的应用成本,提高了该酶在洗涤、饲料和食品等多种行业的工业应用价值,同时为该酶的催化机理研究提供了重要线索。

    一种短糖链修饰的IsPETase及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN115927248A

    公开(公告)日:2023-04-07

    申请号:CN202210993069.3

    申请日:2022-08-18

    Applicant: 湖北大学

    Abstract: 本发明属于基因工程技术领域,公开了一种短糖链修饰的IsPETase及其制备方法和应用,其制备方法具体为:先构建IsPETase多拷贝串联表达载体,再将IsPETase多拷贝表达载体转化宿主细胞,发酵后收集上清,其中所述宿主细胞为真核生物细胞,采用滤膜过滤上清,然后加入Endo H进行反应即得。本发明所得的重组IsPETase具有短糖链修饰且具备高热稳定性和高活性,而且该制备方法通过基因剂量效应和高密度表达能有效提高产量,适用于工业化生产。

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