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公开(公告)号：CN110382693A
公开(公告)日：2019-10-25
申请号：CN201780086540.8
申请日：2017-08-16
发明人： 约翰·万德奥斯特 , 理查德·范克拉嫩堡 , 艾勒克·芬纳·博斯马 , 扬尼斯·莫加科斯 , 普拉塔纳·莫汉拉朱
IPC分类号： C12N9/22 , C12N15/113
摘要： 热稳定的Cas9核酸酶。本发明涉及遗传工程领域，并且更特别地涉及核酸编辑和基因组修饰。本发明提供了一种分离的Cas蛋白或其多肽片段，所述分离的Cas蛋白或其多肽片段具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1具有至少77％同一性的序列。Cas蛋白或多肽能够在20℃和100℃的范围中(包括端点)的温度结合、裂解、标记或修饰双链靶多核苷酸。本发明还提供了编码所述Cas9核酸酶的分离的核酸分子、表达载体和宿主细胞。本发明还提供了被Cas蛋白或多肽识别的PAM序列。本文所公开的Cas9核酸酶提供了通常用于(特别是，在升高的温度)进行遗传工程的新型工具，并且在嗜热生物体(特别地，微生物)的遗传操作中具有特别的价值。
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公开(公告)号：CN110352241A
公开(公告)日：2019-10-18
申请号：CN201780086541.2
申请日：2017-08-16
发明人： 约翰·万德奥斯特 , 理查德·范克拉嫩堡 , 艾勒克·芬纳·博斯马 , 扬尼斯·莫加科斯 , 普拉塔纳·莫汉拉朱
IPC分类号： C12N9/22 , C12N15/113
摘要： 本发明涉及遗传工程领域，并且更特别地涉及核酸编辑和基因组修饰。本发明提供了一种分离的Cas蛋白或其多肽片段，所述分离的Cas蛋白或其多肽片段具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1具有至少77％同一性的序列。Cas蛋白或多肽能够在20℃和100℃的范围中(包括端点)的温度结合、裂解、标记或修饰双链靶多核苷酸。本发明还提供了编码所述Cas9核酸酶的分离的核酸分子、表达载体和宿主细胞。本发明还提供了被Cas蛋白或多肽识别的PAM序列。本文所公开的Cas9核酸酶提供了通常用于(特别地，在升高的温度)进行遗传工程的新型工具。
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公开(公告)号：CN110312792A
公开(公告)日：2019-10-08
申请号：CN201680092098.5
申请日：2016-12-14
发明人： 约翰·万德奥斯特 , 理查德·范克拉嫩堡 , 艾勒克·芬纳·博斯马 , 扬尼斯·莫加科斯
IPC分类号： C12N9/22 , C12N15/113
摘要： 热稳定的Cas9核酸酶。本发明涉及遗传工程领域，并且更特别地涉及核酸编辑和基因组修饰。本发明提供了分离的Cas蛋白或其多肽片段，所述分离的Cas蛋白或其多肽片段具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1具有至少77％同一性的序列。Cas蛋白或多肽能够在30℃和100℃的范围中(包括端点)的温度结合、裂解、标记或修饰双链靶多核苷酸。本发明还提供了编码所述Cas9核酸酶的分离的核酸分子、表达载体和宿主细胞。本发明还提供了被Cas蛋白或多肽识别的PAM序列。本文所公开的Cas9核酸酶提供了用于在升高的温度进行遗传工程的新型工具，并且在嗜热生物体(特别地，微生物)的遗传操作中具有特别的价值。
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公开(公告)号：CN110352241B
公开(公告)日：2024-04-09
申请号：CN201780086541.2
申请日：2017-08-16
发明人： 约翰·万德奥斯特 , 理查德·范克拉嫩堡 , 艾勒克·芬纳·博斯马 , 扬尼斯·莫加科斯 , 普拉塔纳·莫汉拉朱
IPC分类号： C12N9/22 , C12N15/113
摘要： 本发明涉及遗传工程领域，并且更特别地涉及核酸编辑和基因组修饰。本发明提供了一种分离的Cas蛋白或其多肽片段，所述分离的Cas蛋白或其多肽片段具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1具有至少77％同一性的序列。Cas蛋白或多肽能够在20℃和100℃的范围中(包括端点)的温度结合、裂解、标记或修饰双链靶多核苷酸。本发明还提供了编码所述Cas9核酸酶的分离的核酸分子、表达载体和宿主细胞。本发明还提供了被Cas蛋白或多肽识别的PAM序列。本文所公开的Cas9核酸酶提供了通常用于(特别地，在升高的温度)进行遗传工程的新型工具。
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公开(公告)号：CN110431229B
公开(公告)日：2024-03-12
申请号：CN201780086546.5
申请日：2017-12-14
发明人： 约翰·万德奥斯特 , 理查德·范克拉嫩堡 , 艾勒克·芬纳·博斯马 , 扬尼斯·莫加科斯 , 普拉塔纳·莫汉拉朱
IPC分类号： C12N9/22 , C12N15/113 , C12N15/90
摘要： 编码来自热脱氮地芽孢杆菌(Geobacillus thermodenitrificans)的ThermoCas9蛋白的多核苷酸和组成型启动子被用于工程化真核细胞，例如真菌、酵母或藻类，使得ThermoCas9核酸内切酶被整合并从细胞的基因组表达。然后，使用第二表达质粒转染这些表达ThermoCas9的细胞，第二质粒包含诱导型启动子和编码指导RNA(guide RNA)的多核苷酸。指导RNA与ThermoCas9组合，以提供靶向的核酸内切酶活性，以在期望的基因座或感兴趣的基因处裂解细胞DNA。还向细胞提供了修复寡聚物，由此在DNA裂解后，同源重组发生在具有修复寡聚物的细胞中，使得在感兴趣的基因座或基因中实现核苷酸的缺失或取代。描述了表达载体和使用所述载体以实现ThermoCas9介导的基因编辑的方法，由此使用更高的温度，例如大于30℃。
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公开(公告)号：CN110382693B
公开(公告)日：2024-04-09
申请号：CN201780086540.8
申请日：2017-08-16
发明人： 约翰·万德奥斯特 , 理查德·范克拉嫩堡 , 艾勒克·芬纳·博斯马 , 扬尼斯·莫加科斯 , 普拉塔纳·莫汉拉朱
IPC分类号： C12N9/22 , C12N15/113
摘要： 热稳定的Cas9核酸酶。本发明涉及遗传工程领域，并且更特别地涉及核酸编辑和基因组修饰。本发明提供了一种分离的Cas蛋白或其多肽片段，所述分离的Cas蛋白或其多肽片段具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1具有至少77％同一性的序列。Cas蛋白或多肽能够在20℃和100℃的范围中(包括端点)的温度结合、裂解、标记或修饰双链靶多核苷酸。本发明还提供了编码所述Cas9核酸酶的分离的核酸分子、表达载体和宿主细胞。本发明还提供了被Cas蛋白或多肽识别的PAM序列。本文所公开的Cas9核酸酶提供了通常用于(特别是，在升高的温度)进行遗传工程的新型工具，并且在嗜热生物体(特别地，微生物)的遗传操作中具有特别的价值。
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公开(公告)号：CN110312792B
公开(公告)日：2024-04-09
申请号：CN201680092098.5
申请日：2016-12-14
发明人： 约翰·万德奥斯特 , 理查德·范克拉嫩堡 , 艾勒克·芬纳·博斯马 , 扬尼斯·莫加科斯
IPC分类号： C12N9/22 , C12N15/113
摘要： 热稳定的Cas9核酸酶。本发明涉及遗传工程领域，并且更特别地涉及核酸编辑和基因组修饰。本发明提供了分离的Cas蛋白或其多肽片段，所述分离的Cas蛋白或其多肽片段具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1具有至少77％同一性的序列。Cas蛋白或多肽能够在30℃和100℃的范围中(包括端点)的温度结合、裂解、标记或修饰双链靶多核苷酸。本发明还提供了编码所述Cas9核酸酶的分离的核酸分子、表达载体和宿主细胞。本发明还提供了被Cas蛋白或多肽识别的PAM序列。本文所公开的Cas9核酸酶提供了用于在升高的温度进行遗传工程的新型工具，并且在嗜热生物体(特别地，微生物)的遗传操作中具有特别的价值。
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公开(公告)号：CN110431229A
公开(公告)日：2019-11-08
申请号：CN201780086546.5
申请日：2017-12-14
发明人： 约翰·万德奥斯特 , 理查德·范克拉嫩堡 , 艾勒克·芬纳·博斯马 , 扬尼斯·莫加科斯 , 普拉塔纳·莫汉拉朱
IPC分类号： C12N9/22 , C12N15/113 , C12N15/90
摘要： 编码来自热脱氮地芽孢杆菌(Geobacillus thermodenitrificans)的ThermoCas9蛋白的多核苷酸和组成型启动子被用于工程化真核细胞，例如真菌、酵母或藻类，使得ThermoCas9核酸内切酶被整合并从细胞的基因组表达。然后，使用第二表达质粒转染这些表达ThermoCas9的细胞，第二质粒包含诱导型启动子和编码指导RNA(guide RNA)的多核苷酸。指导RNA与ThermoCas9组合，以提供靶向的核酸内切酶活性，以在期望的基因座或感兴趣的基因处裂解细胞DNA。还向细胞提供了修复寡聚物，由此在DNA裂解后，同源重组发生在具有修复寡聚物的细胞中，使得在感兴趣的基因座或基因中实现核苷酸的缺失或取代。描述了表达载体和使用所述载体以实现ThermoCas9介导的基因编辑的方法，由此使用更高的温度，例如大于30℃。
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