一种基于硼亲和色谱的精氨酸二甲基化肽段富集方法

    公开(公告)号:CN116973493A

    公开(公告)日:2023-10-31

    申请号:CN202210430713.6

    申请日:2022-04-22

    IPC分类号: G01N30/08 G01N30/02 G01N30/72

    摘要: 本发明涉及一种基于硼酸亲和色谱的精氨酸二甲基化肽段富集方法。首先,利用二酮类化合物选择性地封闭全蛋白质酶解液中无修饰与单甲基化修饰的精氨酸侧链胍基;然后,将邻二羰基类化合物与硼亲和色谱材料同时加入肽段溶液中,利用硼亲和色谱材料选择性地捕获由邻二羰基类化合物与二甲基化精氨酸残基反应生成的顺式邻二醇中间体,从而实现精氨酸二甲基化肽段的富集。本方法结合质谱检测及软件分析可规模化鉴定蛋白质中的精氨酸二甲基化修饰位点。与传统的免疫亲和富集法相比,本发明具有富集特异性高,鉴定效果好以及实验成本低等优势。

    一种亲水性整体材料及其制备和应用

    公开(公告)号:CN113145088B

    公开(公告)日:2023-03-28

    申请号:CN202010073705.1

    申请日:2020-01-22

    摘要: 本发明涉及一种新型亲水性整体材料及其在毛细管液相色谱和糖肽富集中的应用。具体是将单体异氰尿酸三缩水甘油酯(triglycidyl isocyanurate,TGIC)和1,4,7,10‑四氮杂环十二烷(1,4,7,10‑Tetraazacyclododecane,cyclen)在有机溶剂中超声溶解,然后在加热条件下发生环氧‑胺开环聚合反应形成整体材料。由于环氧与胺反应会生成大量的羟基,因此得到的整体材料具有良好的亲水性。将该整体材料作为毛细管亲水液相色谱的固定相可用于极性小分子化合物的分离;作为亲水作用色谱的吸附剂可用于生物样品中糖肽的分离富集。采用该方法制备亲水整体材料过程非常简单,仅需一歩加热反应即可,免去了传统亲水材料制备过程繁杂,需要多步修饰的缺憾,简化了制备过程。

    一种上清和沉淀协同定量的蛋白质热稳定性分析方法

    公开(公告)号:CN112924693B

    公开(公告)日:2022-09-27

    申请号:CN201911240774.0

    申请日:2019-12-06

    发明人: 叶明亮 阮成飞

    IPC分类号: G01N33/68 G01N27/62

    摘要: 本发明涉及一种基于上清和沉淀协同定量的蛋白质热稳定性分析新方法用于鉴定与配基分子有相互作用的蛋白质。取等份蛋白质样品,分别加入和不加入配基分子,孵育后在特定温度下进行加热,然后分离加热后得到的上清液和沉淀,最后对加入和不加入配基分子的上清样品和沉淀样品分别进行酶解以及定量蛋白质组学分析来确定与配基分子相互作用的靶蛋白。由于可以在同一个温度点进行加热使得整个实验操作过程变的非常简单,并且得益于综合利用了上清样品和沉淀样品中蛋白质的互补信息,本发明相比于传统的蛋白质热稳定性分析方法具有更高灵敏度和选择性。因此可用于不同亲和力的配基分子和蛋白质的相互作用研究。

    一种利用活细胞作为基质亲和富集的方法

    公开(公告)号:CN114150037A

    公开(公告)日:2022-03-08

    申请号:CN202010927177.1

    申请日:2020-09-07

    IPC分类号: C12Q1/02 G01N33/68 G01N33/53

    摘要: 本发明公开了一种活细胞作为基质亲和富集分析方法,向活细胞中加入待分析样品溶液。孵育,清洗,孵育溶液中与暴露在细胞表面的蛋白质存在相互作用的生物分子由于亲和作用而可能被保留在细胞上。通过对保留在活细胞表面的生物分子进行选择性分子从而实现低丰度生物分子的高灵敏度检测分析。该方法一方面得益于细胞质膜的屏障作用,另一方面得益于细胞表面蛋白质的特殊组成,即很多细胞表面蛋白质为受体蛋白质,转运蛋白质,离子通道蛋白质,酶等,与生物分子具有广泛的相互作用,从而有望利用活细胞作为富集基质实现对生物分子的选择性高灵敏度分析。该方法操作简单,价格低廉,选择性好,可实现对生物分子的高灵敏度分析,具有广泛的应用价值。