公开(公告)号：CN105505966A

公开(公告)日：2016-04-20

申请号：CN201510788469.0

申请日：2015-11-17

申请人： 苏州浩欧博生物医药有限公司

发明人： 周延庆 ,  钱林 ,  毛海燕 ,  徐梦凯 ,  夏波 ,  彭会军 ,  李庆春

IPC分类号： C12N15/66 ,  C12N15/70 ,  C07K14/435

摘要： 本发明公开了一种重组人肝细胞溶质抗原Ⅰ真核表达载体构建和表达方法，包括步骤为：合成人肝细胞溶质抗原Ⅰ基因；将所述人肝细胞溶质抗原Ⅰ基因经过限制性内切酶消化后与经过限制性内切酶消化的真核表达载体进行连接，再转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，经过鉴定得到带有人肝细胞溶质抗原Ⅰ基因片段的重组载体；将鉴定后的所述重组载体转染进入真核细胞中表达得到重组蛋白；对所述重组蛋白进行亲和纯化，得到目的蛋白。通过上述方式，本发明能实现重组的LC-1抗原成功表达，使用重组的LC-1在免疫学检测中能解决间接免疫荧光图案被遮盖的问题。

公开(公告)号：CN105504064A

公开(公告)日：2016-04-20

申请号：CN201510787513.6

申请日：2015-11-17

申请人： 苏州浩欧博生物医药有限公司

发明人： 毛海燕 ,  钱林 ,  徐梦凯 ,  周延庆 ,  夏波 ,  彭会军 ,  李庆春

IPC分类号： C07K19/00 ,  C12N15/70 ,  C07K1/13

摘要： 本发明公开了一种PCNA融合蛋白及表达方法和生物素化方法，所述PCNA融合蛋白的序列包括849个碱基，共编码283个氨基酸，前261个氨基酸为PCNA序列，方法为将分别用限制性内切酶切的PCNA基因的PCR产物、表达载体连接进行连接，再转入细胞中表达并诱导培养得到，并与生物素连接酶、生物素等孵育得到生物素化的PCNA融合蛋白。通过上述方式，本发明得到的PCNA融合蛋白能够特异性偶联生物素，其氨基酸序列包含人PCNA，同时在C末端带有一段序列标签-AviTag。几乎所有的蛋白质都可以在一个独特的Avi-tag位点轻易且有效地被生物素化，该方法不会对蛋白的抗原活性产生影响。