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公开(公告)号：CN104073572B
公开(公告)日：2016-06-08
申请号：CN201410322816.6
申请日：2014-07-08
Applicant: 西南大学柑桔研究所
Abstract: 本发明提供了一种同时检测CiMV和SDV的实时荧光RT-PCR检测试剂盒，主要包括特异性引物以及PCR反应试剂，所述特异性引物序列为：上游引物：5’-CCGCTTAAGAGTGGCATTAGGT-3’；下游引物：5’-TCCTGGATCGGAAAGGGAAGAG-3’。本发明还提供了同时检测CiMV和SDV的实时荧光RT-PCR检测方法，所述方法包括：(1)提取柑桔待测样品总RNA；(2)样品总RNA经反转录获得其cDNA；(3)以样品cDNA为模板，加入特异性引物和PCR反应试剂，进行实时荧光RT-PCR检测。该方法检测特异性强，灵敏度高，稳定性好。
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公开(公告)号：CN116837120A
公开(公告)日：2023-10-03
申请号：CN202310523232.4
申请日：2023-05-10
Applicant: 西南大学柑桔研究所
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/01
Abstract: 本发明属于本发明属于植物病害检测技术领域，具体涉及一种柑橘黄龙病可视化快速检测试剂盒及其应用。本发明要解决的技术问题是为柑橘黄龙病田间可视化快速检测提供一种新选择。本发明的技术方案是一种柑橘黄龙病可视化快速检测试剂盒，包括RPA特异性引物对和exo探针；RPA特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示，exo探针为如SEQ ID No.3所示的单链核苷酸。本发明所提供试剂盒可以满足柑橘黄龙病田间快速检测需求，可为柑橘黄龙病菌早期检测、流行病学调查提供科学依据，具有良好的发展应用前景。
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公开(公告)号：CN105176934B
公开(公告)日：2018-09-18
申请号：CN201510678752.8
申请日：2015-10-16
Applicant: 西南大学柑桔研究所
IPC: C12N7/00
Abstract: 本发明公开了一种柑桔黄化脉明病毒长期离体保存方法，在有活性的柑桔黄化脉明病毒提取液中加入等体积的保护剂，颠倒混合后迅速置于液氮中2～3min，然后转移至‑80℃超低温冰箱保存；所述保护剂为用PBS缓冲液配制的含13～17％葡萄糖，5～7％蛋白胨以及10～30％甘油的溶液；所述的PBS缓冲液为：将NaCl 6.8～8g，Na2HPO4·12H2O 2.2～2.9g，KH2PO40.1～0.2g，KCl 0.15～0.2g，NaN30.2～0.5g，吐温‑200.5～1.5mL，1000mL去离子水溶解灭菌备用。本方法离体保存的柑桔黄化脉明病毒在保存2年后仍能保持极高的侵染活性。
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公开(公告)号：CN105176935B
公开(公告)日：2018-07-20
申请号：CN201510679111.4
申请日：2015-10-16
Applicant: 西南大学柑桔研究所
IPC: C12N7/00
Abstract: 本发明公开了一种快速、简捷提取有活性的柑桔黄化脉明病毒的方法，通过将病株组织于液氮中研磨后，加入提取缓冲液进行匀浆，纱布过滤后的滤液经4℃低速离心，上清用Miracloth滤膜过滤后进行超速离心，得到的粗提液混合后再次超速离心，即获得的具有极高侵染力的病毒颗粒。本方法在5h内即可完成病毒的提取，且能高效侵染多种柑桔品种，提取的病毒可应用于制备高度专一的抗血清，致病性鉴定、病毒特性分析，以及抗性品种测定。本发明方法简便、快捷、能高效保持柑桔黄化脉明病毒的活性。
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公开(公告)号：CN104862426B
公开(公告)日：2017-12-08
申请号：CN201510330728.5
申请日：2015-06-15
Applicant: 西南大学柑桔研究所
Abstract: 本发明公开了一种柑桔褪绿矮化相关病毒的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法，属于分子生物学技术领域。本发明提供了柑桔褪绿矮化相关病毒LAMP检测的外引物对F3、B3和内引物对FIP、BIP，以待测样品总DNA为模板，应用上述的内外引物对在63～65℃恒温反应条件下，进行环介导恒温扩增反应60～80min，扩增完成后78～82℃反应5～10min中止反应，然后根据浑浊度或利用荧光染料染色通过颜色变化或电泳条带进行可视化判断，鉴定植株样品是否感染柑桔褪绿矮化相关病毒。本发明操作简便、检测快速、不需要昂贵的核酸扩增仪器，几十分钟就可完成对样品的检测，重复性好、准确性高、灵敏度高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105176935A
公开(公告)日：2015-12-23
申请号：CN201510679111.4
申请日：2015-10-16
Applicant: 西南大学柑桔研究所
IPC: C12N7/00
Abstract: 本发明公开了一种快速、简捷提取有活性的柑桔黄化脉明病毒的方法，通过将病株组织于液氮中研磨后，加入提取缓冲液进行匀浆，纱布过滤后的滤液经4℃低速离心，上清用Miracloth滤膜过滤后进行超速离心，得到的粗提液混合后再次超速离心，即获得的具有极高侵染力的病毒颗粒。本方法在5h内即可完成病毒的提取，且能高效侵染多种柑桔品种，提取的病毒可应用于制备高度专一的抗血清，致病性鉴定、病毒特性分析，以及抗性品种测定。本发明方法简便、快捷、能高效保持柑桔黄化脉明病毒的活性。
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公开(公告)号：CN105176934A
公开(公告)日：2015-12-23
申请号：CN201510678752.8
申请日：2015-10-16
Applicant: 西南大学柑桔研究所
IPC: C12N7/00
Abstract: 本发明公开了一种柑桔黄化脉明病毒长期离体保存方法，在有活性的柑桔黄化脉明病毒提取液中加入等体积的保护剂，颠倒混合后迅速置于液氮中2～3min，然后转移至-80℃超低温冰箱保存；所述保护剂为用PBS缓冲液配制的含13～17％葡萄糖，5～7％蛋白胨以及10～30％甘油的溶液；所述的PBS缓冲液为：将NaCl 6.8～8g，Na2HPO4·12H2O 2.2～2.9g，KH2PO40.1～0.2g，KCl 0.15～0.2g，NaN30.2～0.5g，吐温-200.5～1.5mL，1000mL去离子水溶解灭菌备用。本方法离体保存的柑桔黄化脉明病毒在保存2年后仍能保持极高的侵染活性。
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公开(公告)号：CN104862426A
公开(公告)日：2015-08-26
申请号：CN201510330728.5
申请日：2015-06-15
Applicant: 西南大学柑桔研究所
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/6844 , C12Q2531/119
Abstract: 本发明公开了一种柑桔褪绿矮化相关病毒的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法，属于分子生物学技术领域。本发明提供了柑桔褪绿矮化相关病毒LAMP检测的外引物对F3、B3和内引物对FIP、BIP，以待测样品总DNA为模板，应用上述的内外引物对在63～65℃恒温反应条件下，进行环介导恒温扩增反应60～80min，扩增完成后78～82℃反应5～10min中止反应，然后根据浑浊度或利用荧光染料染色通过颜色变化或电泳条带进行可视化判断，鉴定植株样品是否感染柑桔褪绿矮化相关病毒。本发明操作简便、检测快速、不需要昂贵的核酸扩增仪器，几十分钟就可完成对样品的检测，重复性好、准确性高、灵敏度高。
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公开(公告)号：CN104745725A
公开(公告)日：2015-07-01
申请号：CN201510103671.5
申请日：2015-03-10
Applicant: 西南大学柑桔研究所
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/686 , C12Q2537/143 , C12Q2531/113
Abstract: 本发明提供了一种同时检测CYVCV和CCDaV的一步法PCR检测引物对、试剂盒及方法。引物对包括CYVCV检测引物对：CYVCV-4f/CYVCV--4r；CCDaV检测引物对：CCDV-2f/CCDV-2r；COX基因检测引物对：Ant1/Sen1。同时检测CYVCV和CCDaV的一步法PCR检测方法，包括步骤：(1)提取柑橘待测样品的总核酸；(2)将提取到的总核酸进行多重PCR扩增；(3)对扩增产物进行检测是否含有CYVCV、CCDaV和COX基因的扩增片段，从而判断样品是否感染CYVCV或CCDaV。本发明方法检测特异性强，灵敏度高，稳定性好，工序简单，节约成本，适用于大规模推广。
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公开(公告)号：CN104328220A
公开(公告)日：2015-02-04
申请号：CN201410620927.5
申请日：2014-11-06
Applicant: 西南大学柑桔研究所
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/6844 , C12Q2531/119 , C12Q2561/101
Abstract: 本发明涉及一种柑桔黄脉病毒的RT-LAMP引物组、检测方法及试剂盒,属于分子生物学技术领域。本发明提供了柑桔黄脉病毒RT-LAMP检测的外引物对F3、B3和内引物对FIP、BIP，以待测样品总RNA为模板，应用上述的内外引物对在60～63℃恒温反应条件下，进行环介导恒温扩增反应70～100min，扩增完成后80℃再反应5～10min，然后利用琼脂糖凝胶电泳或荧光染料染色，鉴定植株样品是否感染柑桔黄脉病毒。本发明操作简便、检测快速、不需要昂贵的核酸扩增仪器，几十分钟就可完成对RNA的检测，重复性好、准确性高、灵敏度高，适合田间样品的大规模测定和茎尖嫁接脱毒苗的快速评价。
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