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公开(公告)号：CN108251550B
公开(公告)日：2021-11-16
申请号：CN201711320346.X
申请日：2017-12-12
申请人： 贵州省烟草科学研究院 , 浙江大学
IPC分类号： C12Q1/6895 , C12Q1/686 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种HRM检测烟草镉转运基因NtHMA4突变的方法，其特征在于：包含以下步骤：(1)采用CTAB法提取烟草样品苗期叶片基因组DNA；(2)以所述基因组DNA为模板，利用引物对进行PCR扩增；(3)PCR扩增产物利用HRM检测仪器LightScanner96进行突变位点扫描；(4)根据HRM曲线结果，判断烟草待检样品的基因型；当待测样品的HRM曲线与野生型对照贵烟1号一致时，则为野生型材料；如果出现其他曲线类型，且HRM荧光曲线峰值ΔF≥0.05，则为疑似基因突变材料；(5)DNA测序验证HRM筛选结果；(6)NtHMA4材料的镉表型测定。
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公开(公告)号：CN107904323B
公开(公告)日：2021-02-09
申请号：CN201711322924.3
申请日：2017-12-12
申请人： 贵州省烟草科学研究院 , 浙江大学
IPC分类号： C12Q1/6895 , C12Q1/6858 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种鉴定烟草低镉突变体杂交后代基因型的引物对，其特征在于：所述引物对的引物1为Seq ID No.1所示序列，引物2为Seq ID No.2所示序列，Seq ID No.1：5’GAAATAGAGGGTGATAGTTTCA 3’；Seq ID No.2：5’CATTTCAGCGTAATGCAGAATTA 3’。利用本发明所述的基因特异性引物结合HRM技术可高通量、快速对NtHMA4突变材料杂交后代的大量分离群体进行筛选，准确区分野生型、纯合突变型及杂合突变型材料，进而鉴定出含烟草NtHMA4突变基因的低镉烟草材料。
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公开(公告)号：CN107557437B
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN201710939902.5
申请日：2017-09-30
申请人： 贵州省烟草科学研究院 , 浙江大学
IPC分类号： C12Q1/6895 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种鉴定烟草低降烟碱突变体杂交后代基因型的引物对，其特征在于：所述的引物对的引物1为Seq ID No.1所示序列，引物2为Seq ID No.2所示序列，Seq ID No.1：5’GATGAGATGTGTGCATACTTG 3’；Seq ID No.2:5’CCAAATTAGAAAAACTCGTACTG 3’。利用本发明获得引物结合HRM可以对大量杂交后代群体进行筛选，可有效区分非突变、突变杂合体与突变纯合体，从而准确高效鉴定出含烟草CYP82E4突变基因的材料。
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公开(公告)号：CN107557437A
公开(公告)日：2018-01-09
申请号：CN201710939902.5
申请日：2017-09-30
申请人： 贵州省烟草科学研究院 , 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种鉴定烟草低降烟碱突变体杂交后代基因型的引物对，其特征在于：所述的引物对的引物1为Seq ID No.1所示序列，引物2为Seq ID No.2所示序列，Seq ID No.1：5’GATGAGATGTGTGCATACTTG 3’；Seq ID No.2:5’CCAAATTAGAAAAACTCGTACTG 3’。利用本发明获得引物结合HRM可以对大量杂交后代群体进行筛选，可有效区分非突变、突变杂合体与突变纯合体，从而准确高效鉴定出含烟草CYP82E4突变基因的材料。
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公开(公告)号：CN108251550A
公开(公告)日：2018-07-06
申请号：CN201711320346.X
申请日：2017-12-12
申请人： 贵州省烟草科学研究院 , 浙江大学
IPC分类号： C12Q1/6895 , C12Q1/686 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种HRM检测烟草镉转运基因NtHMA4突变的方法，其特征在于：包含以下步骤：(1)采用CTAB法提取烟草样品苗期叶片基因组DNA；(2)以所述基因组DNA为模板，利用引物对进行PCR扩增；(3)PCR扩增产物利用HRM检测仪器LightScanner96进行突变位点扫描；(4)根据HRM曲线结果，判断烟草待检样品的基因型；当待测样品的HRM曲线与野生型对照贵烟1号一致时，则为野生型材料；如果出现其他曲线类型，且HRM荧光曲线峰值ΔF≥0.05，则为疑似基因突变材料；(5)DNA测序验证HRM筛选结果；(6)NtHMA4材料的镉表型测定。
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公开(公告)号：CN107904323A
公开(公告)日：2018-04-13
申请号：CN201711322924.3
申请日：2017-12-12
申请人： 贵州省烟草科学研究院 , 浙江大学
IPC分类号： C12Q1/6895 , C12Q1/6858 , C12N15/11
CPC分类号： C12Q1/6895 , C12Q1/6858 , C12Q2600/156 , C12Q2600/172 , C12Q2531/113 , C12Q2527/107
摘要： 本发明公开了一种鉴定烟草低镉突变体杂交后代基因型的引物对，其特征在于：所述引物对的引物1为Seq ID No.1所示序列，引物2为Seq ID No.2所示序列，Seq ID No.1：5’GAAATAGAGGGTGATAGTTTCA 3’；Seq ID No.2：5’CATTTCAGCGTAATGCAGAATTA 3’。利用本发明所述的基因特异性引物结合HRM技术可高通量、快速对NtHMA4突变材料杂交后代的大量分离群体进行筛选，准确区分野生型、纯合突变型及杂合突变型材料，进而鉴定出含烟草NtHMA4突变基因的低镉烟草材料。
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公开(公告)号：CN102925480B
公开(公告)日：2014-05-07
申请号：CN201210430894.9
申请日：2012-11-02
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种植物表达载体及培育低植酸水稻的方法，该植物表达载体包括插入原始载体的amiRNA结构单元和特异性启动子，所述特异性启动子为启动子Oleosin？18，其核苷酸序列如SEQ？ID？No.1所示。该方法包括：(1)构建所述植物表达载体；(2)将所述植物表达载体通过农杆菌介导转化水稻愈伤组织；(3)将水稻愈伤组织转移到选择性培养基上继续培养，待分化成苗，移栽大田，筛选获得低植酸水稻植株。本发明利用种子特异性启动子Oleosin？18控制基因表达，使基因沉默仅发生在种子胚和糊粉层，能够有效避免水稻其他组织部位植酸合成受到影响。
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公开(公告)号：CN102864156A
公开(公告)日：2013-01-09
申请号：CN201210364575.2
申请日：2012-09-26
申请人： 浙江大学
IPC分类号： C12N15/29 , C07K14/415 , A01H1/06 , C12N15/84 , A01H5/00
摘要： 本发明公开了一种水稻植酸相关基因ZJU-LPA1及培育低植酸水稻的方法，该基因的碱基序列如SEQ ID NO.1所示；本发明还公开了培育低植酸水稻的方法，包括：构建包含水稻ZJU-LPA1基因的发夹结构单元；将所述发夹结构单元连入原始载体，构建植物表达载体；将所述植物表达载体通过农杆菌介导转化水稻愈伤组织；将水稻愈伤组织转移到选择性培养基上继续培养，待分化成苗，移栽大田，筛选获得低植酸水稻植株。该基因编码含有Sulfate Transporter和STAS两个结构域的表达蛋白，不仅丰富了植酸代谢的网络途径，也为利用该基因进行水稻LPA育种和分子设计育种提供新的基因资源和理论指导。
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公开(公告)号：CN105671057A
公开(公告)日：2016-06-15
申请号：CN201610157873.2
申请日：2016-03-18
申请人： 浙江大学
CPC分类号： C07K14/415 , A01H1/02 , C12N15/8218
摘要： 本发明公开了OsTPPC基因在调控水稻籽粒总磷和植酸含量中的应用，所述OsTPPC基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过两个水稻突变体低总磷、低植酸的籽粒表型，采用图位克隆技术克隆获得调控水稻籽粒总磷和植酸含量的OsTPPC基因，并通过遗传互补转化、RNA干扰等技术，验证了OsTPPC基因在调控水稻籽粒总磷和植酸含量中的作用。
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公开(公告)号：CN102864167B
公开(公告)日：2014-04-09
申请号：CN201210364073.X
申请日：2012-09-26
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种植物表达载体及培育低植酸水稻的方法，该植物表达载体包括插入原始载体的发夹结构单元和特异性启动子，所述特异性启动子为启动子Oleosin 18，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。该方法包括：(1)构建所述植物表达载体；(2)将所述植物表达载体通过农杆菌介导转化水稻愈伤组织；(3)将水稻愈伤组织转移到选择性培养基上继续培养，待分化成苗，移栽大田，筛选获得低植酸水稻植株。本发明利用种子特异性启动子Oleosin 18控制基因表达，使基因沉默仅发生在种子胚和糊粉层，能够有效避免水稻其他组织部位植酸合成受到影响。
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