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公开(公告)号：CN111077317A
公开(公告)日：2020-04-28
申请号：CN201911418774.5
申请日：2019-12-31
申请人： 贵州省烟草科学研究院 , 浙江大学
IPC分类号： G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/558
摘要： 本发明涉及一种免疫金标速测卡，应用双抗体夹心免疫层析的原理，检测植物样本中的番茄斑点枯萎病毒TSWV。检测时，首先向加样孔中加入待检样本，如果样本中含该病毒，在样本层析移动的过程中，病毒会与金标垫上的胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，然后被NC膜相应病毒检测线（T线）上的抗体沉积，相应病毒的检测线（T线）显色，多余的金标单克隆抗体在继续移动过程中被控制线上的二抗沉积，控制线（C线）显色；如果样本中不含上述病毒，则检测线（T线）不显色，控制线（C线）显色。应用该速测卡可现场对各种样品中TSWV进行准确、快速和灵敏的检测。
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公开(公告)号：CN111596062A
公开(公告)日：2020-08-28
申请号：CN201911424627.9
申请日：2019-12-31
申请人： 贵州省烟草科学研究院 , 浙江大学
IPC分类号： G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/558
摘要： 本发明涉及一种免疫金标速测卡，应用双抗体夹心免疫层析的原理，同时检测植物样本中的烟草花叶病毒（TMV）和马铃薯Y病毒（PVY）。检测时，首先向加样孔中加入待检样本，如果样本中含有两种病毒或其中的一种，在样本层析移动的过程中，病毒会与金标垫上的胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，然后被NC膜相应病毒检测线（T线）上的抗体沉积，相应病毒的检测线（T线）显色，多余的金标单克隆抗体在继续移动过程中被控制线上的二抗沉积，控制线（C线）显色；如果样本中不含上述两种病毒，则两条检测线（T线）均不显色，控制线（C线）显色。应用该速测卡可现场对各种样品中TMV、PVY进行准确、快速和灵敏的检测。
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公开(公告)号：CN107557437B
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN201710939902.5
申请日：2017-09-30
申请人： 贵州省烟草科学研究院 , 浙江大学
IPC分类号： C12Q1/6895 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种鉴定烟草低降烟碱突变体杂交后代基因型的引物对，其特征在于：所述的引物对的引物1为Seq ID No.1所示序列，引物2为Seq ID No.2所示序列，Seq ID No.1：5’GATGAGATGTGTGCATACTTG 3’；Seq ID No.2:5’CCAAATTAGAAAAACTCGTACTG 3’。利用本发明获得引物结合HRM可以对大量杂交后代群体进行筛选，可有效区分非突变、突变杂合体与突变纯合体，从而准确高效鉴定出含烟草CYP82E4突变基因的材料。
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公开(公告)号：CN107557437A
公开(公告)日：2018-01-09
申请号：CN201710939902.5
申请日：2017-09-30
申请人： 贵州省烟草科学研究院 , 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种鉴定烟草低降烟碱突变体杂交后代基因型的引物对，其特征在于：所述的引物对的引物1为Seq ID No.1所示序列，引物2为Seq ID No.2所示序列，Seq ID No.1：5’GATGAGATGTGTGCATACTTG 3’；Seq ID No.2:5’CCAAATTAGAAAAACTCGTACTG 3’。利用本发明获得引物结合HRM可以对大量杂交后代群体进行筛选，可有效区分非突变、突变杂合体与突变纯合体，从而准确高效鉴定出含烟草CYP82E4突变基因的材料。
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公开(公告)号：CN116590424A
公开(公告)日：2023-08-15
申请号：CN202310243586.3
申请日：2023-03-14
申请人： 贵州省烟草科学研究院
IPC分类号： C12Q1/6888 , C12Q1/686 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种快速检测人干扰素活性的方法，其特征在于：包含以下步骤：(1)植物源人干扰素的获得；(2)细胞培养及加药处理；(3)RNA提取；(4)RNA反转录cDNA；(5)Real‑Time PCR：利用qPCR试剂盒检测基因MX1、ISG15、IFITM3、APOBEC1的表达量变化。本申请中采用MX1、ISG15、IFITM3和APOBEC1基因基本涵盖了I型干扰素和II型干扰素相应刺激的代表性基因，用他们的表达情况基本可以反应干扰素的活性问题。
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公开(公告)号：CN115568416B
公开(公告)日：2023-06-16
申请号：CN202210157127.9
申请日：2022-02-21
申请人： 贵州省烟草科学研究院
摘要： 本发明公开了一种利用烟草白粉病抗性筛选烟草单倍体及评估诱导率的方法，包括：1）以携带烟草单倍体诱导基因的植株A作为父本，以携带烟草白粉病抗性基因的植株B作为母本，杂交收获F1代种子；2）在F1代种子播种后进行白粉病接种鉴定，感白粉病的植株即为四倍体烟草，抗白粉病的植株即为单倍体烟草；3）分别统计感白粉病和抗白粉病的植株数量，抗白粉病的植株数量占感白粉病和抗白粉病的植株总数的百分比，即为单倍体诱导系的诱导率。本发明方法中白粉病抗性由双隐性基因控制，相比于植株形态和种子形态鉴定方法，准确性更高；相比于染色体数目鉴定、解剖学鉴定和放射性鉴定方法，操作简单，成本低，可用于大规模单倍体筛选和诱导率评估。
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公开(公告)号：CN111650374A
公开(公告)日：2020-09-11
申请号：CN201911418790.4
申请日：2019-12-31
IPC分类号： G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/558
摘要： 本发明涉及一种免疫金标速测卡，应用双抗体夹心免疫层析的原理，同时检测植物样本中的烟草花叶病毒（TMV）和烟草脉带花叶病毒（TVBMV）。检测时，首先向加样孔中加入待检样本，如果样本中含有两种病毒或其中的一种，在样本层析移动的过程中，病毒会与金标垫上的胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，然后被NC膜相应病毒检测线（T线）上的抗体沉积，相应病毒的检测线（T线）显色，多余的金标单克隆抗体在继续移动过程中被控制线上的二抗（羊抗小鼠）沉积，控制线（C线）显色；如果样本中不含上述两种病毒，则两条检测线（T线）均不显色，控制线（C线）显色。应用该速测卡可现场对各种样品中TMV、TVBMV进行准确、快速和灵敏的检测。
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公开(公告)号：CN104152541A
公开(公告)日：2014-11-19
申请号：CN201410217600.3
申请日：2014-09-03
申请人： 贵州省烟草科学研究院
CPC分类号： C12Q1/686 , C12Q2537/143 , C12Q2545/101
摘要： 本发明公开了一种快速检测转基因烤后烟叶的四重PCR引物及方法。该方法所涉及的引物由烟草内源基因元件NR(硝酸还原酶基因)及外源基因元件(包括35S启动子、NOS终止子、NPTII筛选标记基因)组成。通过四重PCR扩增，在一次PCR反应中可同时检测NR基因及3个外源基因，检测方法包括以下步骤：四对引物稀释成等摩尔浓度后按1:1:1:1(V/V)比例混合，在20μL反应体系中添加Mg2+1.5mmol/L、dNTP125μmol/L、Taq酶1U、混合引物1μmol/L，DNA100ng，在退火温度65℃，循环数35个的PCR反应条件下，能够有效检测出烤后烟叶百分比含量为0.9％(V/V)的转基因成分。本发明的效果是：重复性强、稳定性好、操作简单、节约成本。
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公开(公告)号：CN107574256A
公开(公告)日：2018-01-12
申请号：CN201710802892.0
申请日：2017-09-08
申请人： 贵州省烟草科学研究院
IPC分类号： C12Q1/6895 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种用于烟草白粉病广谱抗性资源快速鉴定筛选的分子标记。本发明所提供的分子标记用于快速鉴定由于烟草基因突变形成的白粉病广谱抗性资源，该烟草抗白粉病资源的分子标记引物为分子标记引物对M1和分子标记引物对M2，并与白粉病抗性性状共分离。使用这2对引物同时对烟草种质资源进行PCR扩增，如果两对引物能同时扩增出相应大小的特异片段，则此材料即为抗白粉病资源，对此标记鉴定出的抗性资源进行白粉病接种和鉴定，结果都表现出抗病性，吻合率达100％。本发明公开的分子标记只需对烟草种质资源DNA进行PCR扩增即可鉴定出此类白粉病抗性，不需接种白粉病，即节省了大量工作，又保证植株正常生长。
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公开(公告)号：CN107338323A
公开(公告)日：2017-11-10
申请号：CN201710802860.0
申请日：2017-09-08
申请人： 贵州省烟草科学研究院
CPC分类号： C12Q1/6895 , C12Q2600/13
摘要： 本发明公开了一种与烤烟品种TT7白粉病抗性紧密连锁的分子标记及其在辅助选择育种中的用途，属于农业生物技术范畴。以抗白粉病烟草TT7和感病烟草K326杂交构建F1、F2及BC群体，利用连锁定位在定位区段内开发分子标记S1、R1和S2、R2，与白粉病抗病表型共分离。使用这4对标记对后代进行PCR扩增，不同引物能扩增出相应大小的特异片段并可有效区分杂合基因型，属共显性分子标记，可追踪烟草TT7中的抗白粉病基因在后代中的遗传情况，明确后代的基因型，并可用于白粉病抗病后代筛选。
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