酶法制备柞蚕蛹低聚壳聚糖的方法

    公开(公告)号:CN112980904B

    公开(公告)日:2024-02-20

    申请号:CN202110250306.2

    申请日:2021-03-08

    申请人: 辽宁大学

    发明人: 胡风庆 李鋆一

    IPC分类号: C12P19/26 C12P19/14 C08B37/08

    摘要: 本发明涉及酶法制备柞蚕蛹低聚壳聚糖的方法。利用盐酸溶液脱去柞蚕蛹皮中的无机盐,氢氧化钠溶液水解其中的蛋白质,得到甲壳素,甲壳素用间歇式浓碱热化学法脱乙酰基,提纯处理,获得柞蚕蛹壳聚糖,利用纤维素酶降解壳聚糖,冷冻干燥后即可得到柞蚕蛹低聚壳聚糖。通过本发明可得到优质的柞蚕蛹壳聚糖,进一步酶解成低聚壳聚糖,提高了柞蚕蛹经济价值。

    一种恶臭假单胞菌烯醇酶基因克隆方法与应用

    公开(公告)号:CN112941090A

    公开(公告)日:2021-06-11

    申请号:CN202110275886.0

    申请日:2021-03-15

    申请人: 辽宁大学

    摘要: 本发明公开一种恶臭假单胞菌烯醇酶基因克隆方法与应用。本发明针对PHA合酶在粗甘油中耐受力比较弱的问题,从恶臭假单胞菌烯醇酶基因组出发,加入引物PCR成功扩增得到1290bp的片段,通过酶切连接成功构建了载体pET28a‑Eno,经酶切和测序验证正确后转化进入大肠杆菌BL21中获得表达重组菌。对重组菌诱导表达的两个条件IPTG浓度和温度进行优化,成功使Eno包涵体表达大量可溶表达。这对于利用价格低廉的生物柴油副产物甘油合成PHA,解决生物柴油副产物过度积累带来的环境问题,降低PHA的生产成本具有重要意义。

    一种用于生产PHA的新型发酵培养基及其应用

    公开(公告)号:CN105755061A

    公开(公告)日:2016-07-13

    申请号:CN201610297378.1

    申请日:2016-05-06

    申请人: 辽宁大学

    发明人: 胡风庆 王美玲

    IPC分类号: C12P7/62 C12N1/20 C12R1/38

    CPC分类号: C12P7/625 C12N1/20

    摘要: 本发明涉及一种用于生产PHA的新型发酵培养基及其应用。采用的技术方案是:将菌株接种入发酵培养基中,添加不同浓度比例的甘油和乙酰丙酸作为碳源,调节pH 7.0?7.2,保持温度30℃,转速200r/min,连续发酵72h,8000rpm离心10min收集菌体,冷冻干燥获得细胞干重。本发明通过以不同浓度甘油和乙酰丙酸作为发酵碳源进行菌体发酵,并通过气相色谱仪检测分析细胞干重和PHA组分及含量的关系,证明了假单胞菌可以在以甘油和乙酰丙酸为发酵碳源的培养基中产生PHB?PHV共聚物,实现高效生产PHA的同时也能解决生物柴油副产物带来的污染和浪费的问题。

    一种检测鹿茸酒中有效成分的方法

    公开(公告)号:CN105372189A

    公开(公告)日:2016-03-02

    申请号:CN201510600563.9

    申请日:2015-09-18

    申请人: 辽宁大学

    IPC分类号: G01N21/31 G01N21/78 G01N30/02

    摘要: 本发明涉及一种检测鹿茸酒中有效成分的方法。本发明以鹿茸酒为实验材料,利用考马斯亮蓝比色法、铁氰化钾滴定法、乙醚萃取法、2,6-二氯酚靛酚滴定法、高效液相色谱法、全自动氨基酸分析仪,依次对鹿茸酒中蛋白质、糖类、脂质、Vc含量、己烯雌酚、氨基酸做了分析测定。并通过最后的实验数据分析,清晰的了解到鹿茸酒所含的营养成分,旨在更好地诠释鹿茸酒的营养价值。

    一种动物原代肝脏细胞药物分析试剂盒及其应用

    公开(公告)号:CN105219833A

    公开(公告)日:2016-01-06

    申请号:CN201510623556.0

    申请日:2015-09-25

    申请人: 辽宁大学

    IPC分类号: C12Q1/02 C12N5/071

    摘要: 本发明涉及一种动物原代肝脏细胞药物分析试剂盒及其应用。采用的技术方案是:动物原代肝脏细胞药物分析试剂盒原代培养肝脏细胞、DMEM完全培养基、底物缓冲液、NAD+溶液和2,4-二硝基苯肼溶液构成,该试剂盒可用于分析药物对肝脏细胞的损伤。本发明能提供一种有效分离原代肝脏细胞的方法及用作药物分析的试剂盒,原代分离培养肝脏细胞易贴壁,复苏后培养肝脏细胞状态佳,试剂盒测量效果良好,可作为判断药物对肝细胞损伤的依据之一。本发明可广泛应用于肝脏生理功能探索,细胞病理学、药理和毒理学机制的研究,以及新型药物肝细胞毒性检测。

    酶解法制备鹿胎活性多肽

    公开(公告)号:CN102925523A

    公开(公告)日:2013-02-13

    申请号:CN201210457329.1

    申请日:2012-11-15

    申请人: 辽宁大学

    发明人: 胡风庆 倪裴 回晶

    IPC分类号: C12P21/06

    摘要: 本发明涉及酶解法制备鹿胎活性多肽。采用的技术方案是:取新鲜鹿胎盘除去筋、膜,剪碎;研磨机中研磨、充分匀浆;-40~-20℃冷冻,室温下融化,反复冷冻和融化3~5次,离心,上清液为鹿胎盘提取液,沉淀物备用;取鹿胎盘提取液,于30~35℃下预热10~15min,调节pH值为1.5-7.5,于35~50℃下,加入酶,酶解反应5~8h后,于65℃下加热灭菌30min,离心,取上清液,即为鹿胎活性多肽提取液;所得鹿胎活性多肽提取液经冷冻干燥制得鹿胎盘活性多肽干粉。本发明可从鹿胎中提取更多活性多肽物质,不仅使废弃多糖与脂类资源得到充分利用,又可降低其处理成本,同时避免造成环境污染。

    靶向肿瘤细胞抗肿瘤溶栓双效嵌合蛋白及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN102924606A

    公开(公告)日:2013-02-13

    申请号:CN201210465877.9

    申请日:2012-11-19

    申请人: 辽宁大学

    发明人: 胡风庆 林家帅

    摘要: 本发明涉及靶向肿瘤细胞抗肿瘤溶栓双效嵌合蛋白及其制备方法和应用。本发明嵌合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4或如SEQ ID NO.5所示。嵌合蛋白的制备方法如下:构建嵌合基因;将嵌合基因经酶切后,插入到载体质粒pET28a(+)的EcoRI/XhoI位点,构建重组质粒;将重组质粒转入大肠杆菌BL21感受态细胞中,得到重组大肠杆菌;将重组大肠杆菌摇瓶培养,超声波破碎,将收集的上清液过Ni-NTA亲和层析柱,经梯度洗脱和浓缩除盐,得到嵌合蛋白。本发明的嵌合蛋白,可使靶向肿瘤,抗肿瘤并抗血栓两种作用得以同时体现。

    以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂及其制备方法

    公开(公告)号:CN101708175A

    公开(公告)日:2010-05-19

    申请号:CN200910248730.2

    申请日:2009-12-24

    申请人: 辽宁大学

    发明人: 胡风庆 张月

    IPC分类号: A61K9/58 A61K47/34

    摘要: 本发明涉及一种以PHBHHx为载体的缓释微球药物制剂及其制备方法。公开了以PHBHHx为材料,制备缓释微球的方法,得到了能够缓慢释放药物的微球。方法主要将药物溶解和/或混悬和/或乳化分散在PHBHHx的有机溶剂溶液中,再乳化在水相中,形成乳状液,挥发除去有机溶剂,形成骨架型微小球状实体。本发明制备的缓释微球药物制剂具有在体内逐渐释放,延长药效,并使药效达到难以施药的部位的优点,应用到制药工业中,可以消除间歇给药和药量不均产生的峰、谷现象;可以长期稳定控制靶向部位药物浓度或血药浓度,提高药物的生物利用度,较小剂量即可达到疗效,降低副作用,提高治愈效果;可避免药物的迅速代谢,延长其在体内的半衰期。

    一种利用起皱假单胞菌Ⅱ型合酶生产PHA的方法

    公开(公告)号:CN112899316B

    公开(公告)日:2024-02-20

    申请号:CN202110214750.9

    申请日:2021-02-26

    申请人: 辽宁大学

    IPC分类号: C12N1/20 C12P7/62

    摘要: 本发明涉及PHA生物合成领域,具体涉及一种新型生产PHA的方法。具体实施方案是:以起皱假单胞菌为出发菌株,利用起皱假单胞菌pBBR1MCS2‑phaC1、pBBR1MCS2‑phaC2的表达质粒,选用果糖、甘油、月桂酸、葡萄糖酸钠、油酸钠等不同碳源验证起皱假单胞菌pBBR1MCS2‑phaC2合酶功能活性,结果表明重组菌可以利用油酸钠为碳源产生了PHA。从而保证了今后嵌合酶的成功构建,嵌合PHA合酶可以扩展其底物的广泛性,以提高PHA产量,极大的促进PHA的广泛应用。