公开(公告)号：CN115290883A

公开(公告)日：2022-11-04

申请号：CN202210729128.6

申请日：2022-06-24

申请人： 郑州大学

发明人： 吴拥军 ,  丁丽华 ,  屈凌波 ,  何磊良 ,  玉崧成 ,  于斐 ,  王艺琳 ,  菅宁歌 ,  杨瑞英 ,  王佳

IPC分类号： G01N33/533 ,  G01N33/68

摘要： 本发明提供了一种多种外泌体蛋白的同步检测方法，包括步骤：形成免疫磁珠MBs2@Ab1、形成多种Ab2‑W、形成MBs3 Track、形成双抗夹心复合物、形成多种核酸短链P、形成待测荧光液和荧光检测等七个步骤。该同步检测方法主要是先利用DNAzyme将外泌体蛋白转换为核酸，再利用CRISPR/Cas系统检测核酸，两者结合实现双重信号放大，然后通过荧光进行信号区分，最终实现多种外泌体蛋白浓度的同步定量检测，该同步检测方法灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单，而且有利于临床上实现同步定量检测多种外泌体蛋白。

公开(公告)号：CN113999894A

公开(公告)日：2022-02-01

申请号：CN202110918265.X

申请日：2021-08-11

申请人： 郑州大学

发明人： 何磊良 ,  段彦娟 ,  熊亚敏 ,  何泽良 ,  黄姗 ,  杨明霞 ,  吴拥军 ,  刘利娥 ,  王佳

IPC分类号： C12Q1/6841 ,  C12Q1/6886 ,  G01N21/64 ,  C09K11/06

摘要： 本发明公开了一种激活式荧光编码铁蛋白纳米探针、制备及应用检测方法，包括：实现自组装重新聚合为笼状结构，并获得荧光编码铁蛋白纳米颗粒溶液；获得核酸组装体S/A/R，获得激活式荧光编码铁蛋白纳米探针，该纳米探针分为两个功能区，其中荧光编码铁蛋白纳米颗粒用于定性分析；抛锚在荧光编码铁蛋白纳米颗粒表面的核酸组装体，则通过“激活式”信号模式产生信号，用于目标物定量检测。本发明在溶液中实现了对相应目标mRNA的高灵敏、高特异性检测，成功地应用于活的单细胞内7中肺癌相关mRNA的同步原位检测与成像分析，对激活式荧光编码铁蛋白纳米探针的简便制备，避免了复杂的功能化修饰过程，为功能纳米探针的构建提供了简易的制备方法。

公开(公告)号：CN113640515A

公开(公告)日：2021-11-12

申请号：CN202110907130.3

申请日：2021-08-09

申请人： 郑州大学

发明人： 熊亚敏 ,  何磊良 ,  关方霞 ,  熊慧敏 ,  赵雪颖 ,  王娅 ,  刘心连 ,  吴珑婕

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/574 ,  G01N33/58 ,  C12Q1/6818

摘要： 本发明涉及肿瘤来源的外泌体检测技术领域，具体涉及一种利用多种标志物联合检测外泌体方法及试剂盒，该试剂盒包括用于捕获外泌体的捕获探针、邻近探针P1和P2以及信号探针S，P1包含第一核酸适配体序列以及有荧光素标记的序列，P2包含第二核酸适配体序列以及有荧光素标记的序列，信号探针S由Sa和Sb组成，Sa包含与有荧光素标记的序列互补的序列，Sb包含与Sa互补的序列以及有罗丹明标记的序列。该试剂盒，利用邻近杂交介导荧光共振能量转移实现外泌体表面多种标志物联合检测，以期为提高肿瘤早期诊断的准确度提供检测方法。

公开(公告)号：CN109470691B

公开(公告)日：2021-04-06

申请号：CN201811357628.1

申请日：2018-11-15

申请人： 郑州大学

发明人： 何磊良 ,  邓猛聪 ,  赵梦瑶 ,  沙吉旦·布拉了 ,  高宁振 ,  刘焕 ,  岳帅 ,  汪俊 ,  朱星晨

IPC分类号： G01N21/76

摘要： 本发明公开了一种自组装核酸适配体/蛋白质复合纳米探针、制备方法、试剂盒及其应用，本发明将三种DNA探针，其中一种为包含有核酸适配体序列的DNA探针，一种标记有辣根过氧化物酶，进行杂交制得自组装核酸适配体/蛋白质复合纳米探针，采用核酸适配体功能化的磁纳米颗粒作为磁分离固相载体，用于血液中人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞(CCRF‑CEM)的特异性捕获，提升对目标物的捕获效率，与上述自组装核酸适配体/蛋白质复合纳米探针配合使用，检测CCRF‑CEM的线性范围宽、检测限低、精密度和准确度高，可实现对外周血样品中CCRF‑CEM的高灵敏度、高特异性和快速检测，对于白血病的辅助诊断、疗效评估和预后判断具有重大意义。

公开(公告)号：CN115838783A

公开(公告)日：2023-03-24

申请号：CN202211039026.8

申请日：2022-08-29

申请人： 郑州大学

发明人： 何磊良 ,  吴珑婕 ,  熊亚敏 ,  李嘉颖 ,  苏超杰 ,  冯斐斐

IPC分类号： C12Q1/682 ,  C12Q1/6886

摘要： 本发明涉及一种β‑CD作为增强剂的PGM检测miR‑21试剂盒及其应用，属于miR‑21检测技术领域。该β‑CD作为增强剂的PGM检测miR‑21试剂盒，包括MNPs‑CDNA、ADNA/H1、自组装信号放大探针以及底物溶液；所述MNPs‑CDNA为链霉亲和素修饰的用于捕获miR‑21的捕获探针；所述ADNA/H1为杂交探针1‑蔗糖酶复合物与辅助探针的混合物；自组装信号放大探针为杂交探针1‑蔗糖酶复合物与杂交探针2的混合物；所述底物溶液为蔗糖与信号增强剂β‑CD的混合溶液。该β‑CD作为增强剂的PGM检测miR‑21试剂盒，在使用PGM检测血清中miR‑21时，添加了信号增强剂β‑CD以增强蔗糖酶的活性，实现对检测信号的放大，提高了血清中miR‑21的检测灵敏度和特异性。

公开(公告)号：CN109406772A

公开(公告)日：2019-03-01

申请号：CN201811286030.8

申请日：2018-10-31

申请人： 郑州大学

发明人： 吴拥军 ,  于斐 ,  刘贝贝 ,  玉崧成 ,  何磊良 ,  刘利娥 ,  屈凌波 ,  田咏梅 ,  王佳 ,  王威 ,  王艺琳

IPC分类号： G01N33/543 ,  G01N33/535 ,  G01N33/541 ,  G01N21/76

摘要： 本发明提供了一种基于磁性分离的化学发光酶联免疫检测DNMT1的方法，包括：封闭预处理、加磁性单克隆抗体、加抗原、加多克隆抗体、加酶标二抗、加化学发光底液、发光检测及建立回归方程等步骤。本发明提供的上述方法构建一种新型的化学发光新体系HRP-Luminol-H2O2-BIP，以免疫磁珠作为固相载体，结合聚苯乙烯微孔板多样本同时检测的统一性和磁珠磁分离的优点，将化学发光的高灵敏性、抗原抗体反应的高特异性和酶催化的高效专一性三者有机结合起来，建立双抗夹心法对DNMT1进行测定。

公开(公告)号：CN109382052A

公开(公告)日：2019-02-26

申请号：CN201811470560.8

申请日：2018-12-04

申请人： 郑州大学

发明人： 玉崧成 ,  吴拥军 ,  合思甜 ,  何磊良 ,  付晓丽 ,  曾鑫 ,  董佳佳 ,  杨军辉 ,  侯一心 ,  丁帅

IPC分类号： B01J19/00

CPC分类号： B01J19/0046

摘要： 一种可视化全自动偶联反应装置，可实现羧基和氨基的共价偶联，其特征在于：所述反应装置由活化室、光源、光电传感器、电磁铁和反应池构成；其中所述活化室用于羧基的EDC/sulfo-NHS活化，并应用功能化磁性纳米颗粒为指示剂反映活化程度而启动后续的偶联反应；其中所述的光源和光电传感器用于捕捉羧基活化的信号，启动电磁铁；其中所述电磁铁用于分离指示剂和羧基活化液；其中所述反应池用于氨基与活化后的羧基共价偶联。本发明基于功能化磁性纳米颗粒的性质实现羧基活化的可视化及偶联反应控制的自动化，有效解决EDC/sulfo-NHS偶联反应的偶联效率低和重复性差的问题，可广泛应用于科研和生产，具有广阔的市场前景。

公开(公告)号：CN105842451B

公开(公告)日：2017-10-27

申请号：CN201610324656.8

申请日：2016-05-17

申请人： 郑州大学

发明人： 吴拥军 ,  刘利娥 ,  熊亚敏 ,  玉崧成 ,  于斐 ,  何磊良 ,  屈凌波 ,  王华栋

IPC分类号： G01N33/577 ,  G01N21/64

摘要： 本发明提供一种基于量子点荧光免疫检测DNMT1的方法，包括以Fe3O4纳米颗粒为固相载体，制备出表面被DNMT1单克隆抗体共价修饰的免疫磁性颗粒，将DNMT1标准品或待测样品采用所述免疫磁性颗粒捕获并富集分离，然后向分离后所得的产物中加入被量子点标记的DNMT1多克隆抗体，使抗体与待测抗原结合，采用多功能微孔板读数仪以270 nm激发下进行荧光检测，根据荧光强度与DNMT1标准品或待测样品浓度的关系建立回归方程。该方法步骤简单且由该方法建立的回归方程对DNMT1检测的线性范围宽、检测限低、精密度、准确度高且具有良好的特异性。

公开(公告)号：CN118777614A

公开(公告)日：2024-10-15

申请号：CN202410764570.1

申请日：2024-06-13

申请人： 郑州大学

发明人： 吴拥军 ,  合思甜 ,  丁丽华 ,  玉崧成 ,  何磊良 ,  杨潇楠 ,  于斐 ,  杨瑞英 ,  王艺琳 ,  吴迪 ,  菅宁歌 ,  刘利娥

IPC分类号： G01N33/68 ,  G01N33/58 ,  G01N33/569 ,  G01N21/64 ,  G01N15/14

摘要： 本发明提供了DSA‑PPh3分子在制备循环肿瘤细胞检测试剂中的用途及检测试剂和试剂盒。所述DSA‑PPh3分子为两端修饰正电荷三苯基膦盐（TPP）基团的二苯乙烯基蒽。所述循环肿瘤细胞检测试剂包括DSA‑PPh3分子和 PolyA‑TSP‑AuNPs，DSA‑PPh3分子作为线粒体荧光探针标记待测样品中的循环肿瘤细胞；所述PolyA‑TSP‑AuNPs识别所述循环肿瘤细胞的端粒酶，并进行特异性延长，以增强肿瘤细胞和白细胞的荧光差异。因此，基于线粒体和端粒酶活性，利用本发明提供的检测试剂、试剂盒或检测系统可以实现CTCs的高对比度双锚定鉴定，可以显著提升鉴定效率，而且能够实现对富集后CTCs的无损鉴定，此外，还具有所需材料合成简单便捷，操作时间短、灵敏度高及保持细胞活性等特点。

公开(公告)号：CN113999894B

公开(公告)日：2023-06-20

申请号：CN202110918265.X

申请日：2021-08-11

申请人： 郑州大学

发明人： 何磊良 ,  段彦娟 ,  熊亚敏 ,  何泽良 ,  黄姗 ,  杨明霞 ,  吴拥军 ,  刘利娥 ,  王佳

IPC分类号： C12Q1/6841 ,  C12Q1/6886 ,  G01N21/64 ,  C09K11/06

摘要： 本发明公开了一种激活式荧光编码铁蛋白纳米探针、制备及应用检测方法，包括：实现自组装重新聚合为笼状结构，并获得荧光编码铁蛋白纳米颗粒溶液；获得核酸组装体S/A/R，获得激活式荧光编码铁蛋白纳米探针，该纳米探针分为两个功能区，荧光编码铁蛋白纳米颗粒用于定性分析；抛锚在荧光编码铁蛋白纳米颗粒表面的核酸组装体，通过“激活式”信号模式产生信号，用于目标物定量检测。本发明实现了对相应目标mRNA的高灵敏、高特异性检测，应用于活的单细胞内7中肺癌相关mRNA的同步原位检测与成像分析，对激活式荧光编码铁蛋白纳米探针的简便制备，避免了复杂的功能化修饰，为功能纳米探针的构建提供了简易的制备方法。