公开(公告)号：CN113640266B

公开(公告)日：2024-02-27

申请号：CN202110918246.7

申请日：2021-08-11

申请人： 郑州大学

发明人： 何磊良 ,  熊亚敏 ,  万珍珍 ,  于斐 ,  黄姗 ,  刘俊坤 ,  吴拥军 ,  杨瑞英 ,  玉崧成

IPC分类号： G01N21/64

摘要： 本发明公开了一种用于细胞中铁蛋白储存和释放铁的检测方法，包括以下操作步骤：S1：对细胞毒性进行考察的步骤；S2：功能铁蛋白的表征测试步骤；S3：功能铁蛋白的性能考察步骤；S4：溶液中铁离子进、出铁蛋白的检测步骤；S5：细胞内铁蛋白储存和释放铁的可视化原位检测。通过上述方式，本发明通过简单的混合构建功能铁蛋白的方式，在对溶液中铁离子进/出铁蛋白检测的基础上，进一步将其用于细胞内铁蛋白储存和释放铁的可视化原位检测，从而为铁蛋白储存和释放铁的研究以及铁相关疾病的诊断和治(56)对比文件Cuiping Han et al..Highly fluorescent carbon dots as selective andsensitive “ on-off-on” probes for iron(III) ion and apoferritin detection andimaging in living cells.Biosensors andBioelectronics.2016,第83卷全文.Gunther Jutz et al..Ferritin: AVersatile Building Block forBionanotechnology.Chem.Rev..2015,第115卷全文.Stephan Tetter and DonaldHilvert.Enzyme Encapsulation by aFerritin Cage.Angew.Chem.Int.Ed..2017,第56卷全文.Cuiping Han et al..Highly fluorescent carbon dots as selective andsensitive “ on-off-on” probes for iron(III) ion and apoferritin detection andimaging in living cells.Biosensors andBioelectronics.2016,第83卷全文.Leiliang He et al. .Apoferritin-basedtunable nano-indicator for intracellularpH sensing: Regulating responseperformances and minimizing effects ofsystem flctuations.Sensors & Actuators:B. Chemical .2020,第323卷全文.林庆梅,乔玉欢,黄河清.铁蛋白反应器储存有毒金属离子的初步研究.厦门大学学报(自然科学版).1999,(第06期),全文.杨彩云等.铁蛋白表面修饰及其应用.化学进展.2016,(第01期),全文.王琪;王蓓蓓;马美湖;蔡朝霞.荧光纳米材料应用于蛋白质分析的研究进展.食品科学.2015,(第05期),全文.刘文营;张建;童军茂;赵广华.铁蛋白脱铁机制的建立及脱铁前后光谱变化的研究.光谱学与光谱分析.2011,(第09期),全文.

公开(公告)号：CN115992144A

公开(公告)日：2023-04-21

申请号：CN202211038908.2

申请日：2022-08-29

申请人： 郑州大学

发明人： 何磊良 ,  王娅 ,  熊亚敏 ,  宋露露 ,  姚峰 ,  吴拥军

IPC分类号： C12N15/115 ,  C12N15/10 ,  C12N5/09 ,  C12N5/071

摘要： 本发明公开了一种靶向调控细胞膜表面EGFR二聚化的DNA结构，所述DNA结构为利用核酸自组装构建的双链DNA桥，所述双链DNA桥包括适配体探针A和适配体探针B，以及和适配体探针A和适配体探针B互补的互补链C。本发明利用适配体探针A和B与细胞膜上受体EGFR特异性识别并结合后，各暴露出一段DNA序列，当有互补链C存在时，适配体探针A和B上的暴露序列可以与互补链C通过碱基互补配对原则发生自组装，形成双链DNA桥。通过不同长度的双链DNA桥，实现对EGFR二聚化的距离调控。由此获得有效抑制受体二聚化的空间距离，最终达到抑制细胞行为的目的。为有效调控癌症的发生发展提供了一种新的思路，对癌症的靶向治疗具有重要意义。

公开(公告)号：CN113916852A

公开(公告)日：2022-01-11

申请号：CN202111143245.6

申请日：2021-09-28

申请人： 郑州大学

发明人： 吴拥军 ,  丁丽华 ,  屈凌波 ,  玉崧成 ,  何磊良 ,  刘利娥 ,  王艺琳 ,  王威

IPC分类号： G01N21/64

摘要： 本发明提供了一种血浆外泌体浓度和外泌体膜蛋白浓度的同步检测方法，包括步骤：提供磁性纳米杨梅颗粒；加CD63适配体形成AptCD63‑磁性纳米杨梅颗粒；加外泌体使其与AptCD63‑磁性纳米杨梅颗粒结合形成外泌体复合物；加三种荧光探针分别结合所述外泌体表面的EGFR、EpCAM、或嵌入外泌体脂质双分子层中；用荧光光谱仪检测三种荧光探针的荧光强度，利用荧光强度与外泌体浓度、外泌体膜蛋白EGFR浓度、外泌体膜蛋白EpCAM浓度之间的相关关系，实现对外泌体浓度及外泌体膜蛋白EGFR和EpCAM浓度的同步检测。所以，本发明提供的上述同步检测方法具有潜在的临床应用价值。

公开(公告)号：CN113640266A

公开(公告)日：2021-11-12

申请号：CN202110918246.7

申请日：2021-08-11

申请人： 郑州大学

发明人： 何磊良 ,  熊亚敏 ,  万珍珍 ,  于斐 ,  黄姗 ,  刘俊坤 ,  吴拥军 ,  杨瑞英 ,  玉崧成

IPC分类号： G01N21/64

摘要： 本发明公开了一种用于细胞中铁蛋白储存和释放铁的检测方法，包括以下操作步骤：S1：对细胞毒性进行考察的步骤；S2：功能铁蛋白的表征测试步骤；S3：功能铁蛋白的性能考察步骤；S4：溶液中铁离子进、出铁蛋白的检测步骤；S5：细胞内铁蛋白储存和释放铁的可视化原位检测。通过上述方式，本发明通过简单的混合构建功能铁蛋白的方式，在对溶液中铁离子进/出铁蛋白检测的基础上，进一步将其用于细胞内铁蛋白储存和释放铁的可视化原位检测，从而为铁蛋白储存和释放铁的研究以及铁相关疾病的诊断和治疗提供新的方法和技术手段。

公开(公告)号：CN110208236A

公开(公告)日：2019-09-06

申请号：CN201910575736.4

申请日：2019-06-28

申请人： 郑州大学

发明人： 何磊良 ,  冯娇迪 ,  吴拥军 ,  熊亚敏 ,  丁丽华 ,  玉崧成 ,  于斐 ,  王佳 ,  吴予明

IPC分类号： G01N21/64

摘要： 本发明公开了基于脱铁铁蛋白的比率型荧光pH纳米探针的制备方法，包括以下步骤：(1)取脱铁铁蛋白加入水中，调pH至酸性使脱铁铁蛋白解聚；(2)将上述步骤(1)的溶液震荡均匀后逐滴加入由pH敏感和pH不敏感的两种染料组成的混合液，继续震荡一段时间，调节溶液pH至中性使脱铁铁蛋白重新聚合；(3)将上述步骤(2)的混合液室温震荡后过滤，取滤液，超滤离心后收集截留液，即得含有基于脱铁铁蛋白的比率型荧光pH纳米探针的溶液，4℃保存备用。本发明通过将pH敏感和pH不敏感的两种染料经简便的一步混合同时封装到脱铁铁蛋白内部空腔，构建了用于检测细胞内pH值的比率型荧光纳米探针，该探针具有制备简便、稳定性好，抗干扰能力强，细胞毒性低、生物相容性好的特点。

公开(公告)号：CN105842451A

公开(公告)日：2016-08-10

申请号：CN201610324656.8

申请日：2016-05-17

申请人： 郑州大学

发明人： 吴拥军 ,  刘利娥 ,  熊亚敏 ,  玉崧成 ,  于斐 ,  何磊良 ,  屈凌波 ,  王华栋

IPC分类号： G01N33/577 ,  G01N21/64

CPC分类号： G01N33/577 ,  G01N21/6486

摘要： 本发明提供一种基于量子点荧光免疫检测DNMT1的方法，包括以Fe3O4纳米颗粒为固相载体，制备出表面被DNMT1单克隆抗体共价修饰的免疫磁性颗粒，将DNMT1标准品或待测样品采用所述免疫磁性颗粒捕获并富集分离，然后向分离后所得的产物中加入被量子点标记的DNMT1多克隆抗体，使抗体与待测抗原结合，采用多功能微孔板读数仪以270 nm激发下进行荧光检测，根据荧光强度与DNMT1标准品或待测样品浓度的关系建立回归方程。该方法步骤简单且由该方法建立的回归方程对DNMT1检测的线性范围宽、检测限低、精密度、准确度高且具有良好的特异性。

公开(公告)号：CN105256005A

公开(公告)日：2016-01-20

申请号：CN201510615669.6

申请日：2015-09-24

申请人： 郑州大学

发明人： 王威 ,  段晓冉 ,  吴拥军 ,  冯斐斐 ,  李尊税 ,  王团伟 ,  王彭彭 ,  李春阳 ,  姚武 ,  杨永利 ,  施学忠

IPC分类号： C12Q1/68

摘要： 测定人TERT基因rs2735940位点多态性的方法及试剂盒。该方法，包括：提供待测人基因组DNA；提供扩增人TERT基因rs2735940位点附近序列的上游引物和下游引物，其中下游引物具有错配碱基C；以所述待测人基因组DNA为模板，利用上游引物和下游引物进行PCR扩增反应以获得含CYGG或CCYGG片段的扩增产物，其中Y为人TERT基因rs2735940位点上的待定碱基C或T；提供限制性内切酶；利用限制性内切酶对所得扩增产物进行酶切以获得相应的酶切产物；以及根据所得酶切产物来确定人TERT基因rs2735940位点上的待定碱基Y是C还是T。限制性内切酶为能够切开CCGG片段与CTGG片段之一的限制性内切酶,或能够切开CCCGG片段与CCTGG片段之一的限制性内切酶。本发明的测定手段不但快速可靠，而且测定成本大大降低。

公开(公告)号：CN118837417A

公开(公告)日：2024-10-25

申请号：CN202410788645.X

申请日：2024-06-18

申请人： 郑州大学

发明人： 杨瑞英 ,  耿文超 ,  薛林生 ,  吴拥军 ,  余增丽 ,  丁丽华 ,  季江颖 ,  原鑫鑫 ,  严志怡

IPC分类号： G01N27/327 ,  G01N27/30 ,  G01N33/50

摘要： 本发明属于检测循环肿瘤细胞的光电化学传感器技术领域，具体涉及基于多功能纳米酶和EXO III‑DNAzyme的循环肿瘤细胞光电化学传感器。该循环肿瘤细胞传感器包括偶联在氨基化磁珠上的捕获探针1/循环肿瘤细胞核酸适配体的双链、发夹探针1、发夹探针2、EXO III酶、锌离子、修饰有捕获探针2的TiO2/ITO电极、修饰有链霉亲和素的多功能纳米酶。本发明基于循环肿瘤细胞核酸适配体/探针的竞争识别、EXO III‑DNAzyme信号放大反应和多功能纳米酶催化沉淀等技术，成功构建了一种基于多功能纳米酶的光电化学细胞传感器，可用于人血液中循环肿瘤细胞的检测，在生物传感领域具有潜在的应用价值。

公开(公告)号：CN115219569B

公开(公告)日：2024-03-12

申请号：CN202210711574.4

申请日：2022-06-22

申请人： 郑州大学

发明人： 阿有梅 ,  杨瑞英 ,  苏纾瑶 ,  薛林生 ,  李玉玲 ,  刘慧敏 ,  刘利娥 ,  吴拥军

IPC分类号： G01N27/26 ,  G01N27/27 ,  G01N27/30 ,  G01N27/327

摘要： 本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种人工酶检测肿瘤细胞的传感器及其制备方法和应用。该传感器包括捕获电极、循环肿瘤细胞、信号放大器和底物；捕获电极为负载有捕获抗体的电极；信号放大器为人工酶‑检测抗体共轭物，人工酶催化底物得到沉淀物，沉淀物为电子受体且沉积在电极表面，检测抗体和捕获抗体均为循环肿瘤细胞表面抗原的特异性抗体。上述传感器是基于人工酶的高纳米酶活性催化沉淀、竞争吸收光能和消耗电子供体以及免疫夹心反应，进行光电流信号放大设计，利用上述传感器能够实现检测循环肿瘤细胞，并具有灵敏度高、选择性高、重现性好、稳定性高等优点。

公开(公告)号：CN116789163A

公开(公告)日：2023-09-22

申请号：CN202310795134.6

申请日：2023-06-30

申请人： 郑州大学

发明人： 杨瑞英 ,  刘慧敏 ,  薛林生 ,  李玉玲 ,  原鑫鑫 ,  季江颖 ,  刘利娥 ,  丁丽华 ,  吴拥军

IPC分类号： C01G3/02 ,  C01F17/212 ,  C01F17/10 ,  G01N27/30 ,  G01N27/36

摘要： 本发明提供了一种双金属氧化物及其制备方法和信号翻转检测抗生素的应用。所述双金属氧化物为由Sc2O3和CuO组成的八面体晶体结构Sc2O3@CuO。本发明还提供一种双金属氧化物复合材料，主要由Sc2O3@CuO和吸附在Sc2O3@CuO八面体表面的纳米金颗粒组成的复合材料Sc2O3@CuO@AuNPs。本发明还提供一种光电流信号翻转型光电化学传感器，包括TiO2/ITO电极以及修饰在TiO2/ITO电极表面的发夹探针HP2、标记有生物素的辅助探针S2和信号探针，该信号探针为包裹有链霉亲和素的Sc2O3@CuO@AuNPs，探针S2打开探针HP2，使信号探针修饰至TiO2/ITO电极表面，形成光电信号与TiO2/ITO电极相反的Sc2O3@CuO@AuNPs/TiO2/ITO电极。如此，该传感器通过结合光电流方向翻转策略和酶切信号放大技术构建，能消除背景信号的干扰，增加信号输出，从而提高了检测抗生素的选择性和灵敏度。