公开(公告)号：CN115354067A

公开(公告)日：2022-11-18

申请号：CN202210041455.2

申请日：2022-01-14

申请人： 郑州大学第一附属医院 ,  江苏先声医学诊断有限公司

发明人： 赵杰 ,  王小强 ,  何贤英 ,  薛茹月 ,  杨梅佳 ,  张超 ,  曾彦达 ,  郭昊 ,  任用

IPC分类号： C12Q1/6806 ,  C40B50/06 ,  C12Q1/34

摘要： 本发明提供一种游离DNA甲基化建库的方法，有效的解决了甲基化双链建库在使用中成本较高、检测灵敏度低、冗余度高的问题；包括步骤：S1:提供样本DNA，使用TET酶对样本DNA中的5mC和5fmC进行氧化，分别转化为5caC/5gC，完成氧化并加入终止反应液，然后进行磁珠纯化；S2:将纯化产物变性为单链DNA，使用APOBEC酶，将未修饰的胞嘧啶转化形成尿嘧啶，然后进行磁珠纯化，得到完成C到U转化的单链DNA模板；S3:对纯化产物进行修复，使用单链连接酶进行第一接头连接，得到3’端连接有接头的产物单链DNA分子；一种游离DNA甲基化建库的方法，由于酶法甲基化转化条件温和，可最大程度的减少DNA在转化过程中的损失，提高了文库建库效率。