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公开(公告)号：CN103105391A
公开(公告)日：2013-05-15
申请号：CN201210571577.9
申请日：2012-12-26
申请人： 重庆医科大学
IPC分类号： G01N21/78 , G01N21/31 , C07C323/62 , C07C319/22
摘要： 一种新型巯基显色剂、其制备方法与应用，该新型巯基显色剂为5，5′-二硫双-(2-硝基苯乙酸)，用3-氯苯乙酸硝化、与二硫化钠反应制备；该显色剂与烷基硫醇或巯基反应时二硫键被还原断裂，所释放的(2-硝基-5-巯基)-苯乙酸相对此显色剂的差吸收峰在405nm附近，适合用滤光片式酶标仪及分光光度计测定。
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公开(公告)号：CN103954762A
公开(公告)日：2014-07-30
申请号：CN201410190677.6
申请日：2014-05-08
申请人： 重庆医科大学
IPC分类号： G01N33/577 , G01N33/573
CPC分类号： G01N33/573
摘要： 一种快速比较未纯化融合酶及其突变体比活性的方法，(1)用寡聚组氨酸或类似标签融合表达酶及其突变体，制备诱导表达细胞裂解液为未纯化融合酶样品；(2)固定化抗标签单抗或其它亲和分离介质；(3)所有测定中所用固定化亲和分离介质的结合容量相同；(4)用来自相同未纯化融合酶样品的不同总蛋白量与固定化亲和分离介质反应，分离结合的融合酶测定其活性，获得结合的融合酶活性对反应体系总蛋白量的响应曲线；(5)据亲和反应的化学计量学建立上述响应的数学模型，用单抗为亲和分离介质时所用融合酶远多于固定化单抗结合容量而适用简化模型，用Ni2+-NTA需用非简化模型，预测结合的融合酶最大活性作为比活性的等效量进行比较。
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公开(公告)号：CN103954599A
公开(公告)日：2014-07-30
申请号：CN201410190645.6
申请日：2014-05-08
申请人： 重庆医科大学
摘要： 一种荧光滴定测定单抗活性位点浓度的方法，以340nm附近为激发峰且280nm为激发谷的荧光团为色氨酸FRET接受体，用非荧光半抗原、无色氨酸抗原表位为非荧光探针，非荧光探针与色氨酸FRET接受体加合物、色氨酸FRET接受体类半抗原为荧光探针；探针与纯单抗反应，280nm激发测定340nm荧光或色氨酸FRET接受体荧光得滴定曲线；基于可逆反应、探针静态和动态猝灭、荧光信号加和，建立荧光信号变化数学模型拟合滴定曲线确定单抗位点浓度。分析340nm信号变化时，用不收敛但拟合决定系数高于0.99参数计算信号变化一阶导数最大值为单抗340nm信号响应曲线斜率，再拟合相同滴定曲线得单抗位点浓度。
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公开(公告)号：CN103954599B
公开(公告)日：2016-06-08
申请号：CN201410190645.6
申请日：2014-05-08
申请人： 重庆医科大学
摘要： 一种荧光滴定测定单抗活性位点浓度的方法，以340nm附近为激发峰且280nm为激发谷的荧光团为色氨酸FRET接受体，用非荧光半抗原、无色氨酸抗原表位为非荧光探针，非荧光探针与色氨酸FRET接受体加合物、色氨酸FRET接受体类半抗原为荧光探针；探针与纯单抗反应，280nm激发测定340nm荧光或色氨酸FRET接受体荧光得滴定曲线；基于可逆反应、探针静态和动态猝灭、荧光信号加和，建立荧光信号变化数学模型拟合滴定曲线确定单抗位点浓度。分析340nm信号变化时，用不收敛但拟合决定系数高于0.99参数计算信号变化一阶导数最大值为单抗340nm信号响应曲线斜率，再拟合相同滴定曲线得单抗位点浓度。
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公开(公告)号：CN103105391B
公开(公告)日：2015-06-10
申请号：CN201210571577.9
申请日：2012-12-26
申请人： 重庆医科大学
IPC分类号： G01N21/78 , G01N21/31 , C07C323/62 , C07C319/22
摘要： 一种新型巯基显色剂、其制备方法与应用，该新型巯基显色剂为5，5′-二硫双-(2-硝基苯乙酸)，用3-氯苯乙酸硝化、与二硫化钠反应制备；该显色剂与烷基硫醇或巯基反应时二硫键被还原断裂，所释放的(2-硝基-5-巯基)-苯乙酸相对此显色剂的差吸收峰在405nm附近，适合用滤光片式酶标仪及分光光度计测定。
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公开(公告)号：CN102879343B
公开(公告)日：2014-10-29
申请号：CN201210355606.8
申请日：2012-09-21
申请人： 重庆医科大学
CPC分类号： C12Q1/25 , C12Q1/00 , C12Q2334/00 , G01N21/272 , G01N21/31 , G01N21/33 , G01N2021/3125 , G01N2333/904 , G01N2333/91074 , G01N2333/916 , G01N2333/938
摘要： 本发明公开了一种用多波长吸收单通道同步测量多种酶活性的方法；基于光吸收线性加和性及酶显色底物与其对应显色产物的等吸收波长，建立多波长吸收同步测量单通道同步测定多种酶活性所需显色底物组合设计原理及消除吸收光谱重叠干扰的数据处理方法，并以数值积分的速度方程分析酶反应过程测定最大反应速度消除各种底物及产物对待测酶活性的干扰，使单通道同步测定多种酶活性的范围及检测限都与单独测定时相当；该方法可用于同步测定生物样品多种酶活性、酶标记免疫分析同步测定多组分含量、同步筛选不同靶酶的抑制剂，可用于临床生化分析和临床免疫检验、卫生检验、酶抑制剂筛选等常规实践，也可用于这类酶法分析技术适用的各种基础研究。
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公开(公告)号：CN102879343A
公开(公告)日：2013-01-16
申请号：CN201210355606.8
申请日：2012-09-21
申请人： 重庆医科大学
CPC分类号： C12Q1/25 , C12Q1/00 , C12Q2334/00 , G01N21/272 , G01N21/31 , G01N21/33 , G01N2021/3125 , G01N2333/904 , G01N2333/91074 , G01N2333/916 , G01N2333/938
摘要： 本发明公开了一种用多波长吸收单通道同步测量多种酶活性的方法；基于光吸收线性加和性及酶显色底物与其对应显色产物的等吸收波长，建立多波长吸收同步测量单通道同步测定多种酶活性所需显色底物组合设计原理及消除吸收光谱重叠干扰的数据处理方法，并以数值积分的速度方程分析酶反应过程测定最大反应速度消除各种底物及产物对待测酶活性的干扰，使单通道同步测定多种酶活性的范围及检测限都与单独测定时相当；该方法可用于同步测定生物样品多种酶活性、酶标记免疫分析同步测定多组分含量、同步筛选不同靶酶的抑制剂，可用于临床生化分析和临床免疫检验、卫生检验、酶抑制剂筛选等常规实践，也可用于这类酶法分析技术适用的各种基础研究。
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公开(公告)号：CN103954762B
公开(公告)日：2016-08-24
申请号：CN201410190677.6
申请日：2014-05-08
申请人： 重庆医科大学
IPC分类号： G01N33/577 , G01N33/573
摘要： 一种快速比较未纯化融合酶及其突变体比活性的方法，(1)用寡聚组氨酸或类似标签融合表达酶及其突变体，制备诱导表达细胞裂解液为未纯化融合酶样品；(2)固定化抗标签单抗或其它亲和分离介质；(3)所有测定中所用固定化亲和分离介质的结合容量相同；(4)用来自相同未纯化融合酶样品的不同总蛋白量与固定化亲和分离介质反应，分离结合的融合酶测定其活性，获得结合的融合酶活性对反应体系总蛋白量的响应曲线；(5)据亲和反应的化学计量学建立上述响应的数学模型，用单抗为亲和分离介质时所用融合酶远多于固定化单抗结合容量而适用简化模型，用Ni2+?NTA需用非简化模型，预测结合的融合酶最大活性作为比活性的等效量进行比较。
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