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公开(公告)号：CN106755306B
公开(公告)日：2019-08-20
申请号：CN201611020857.5
申请日：2016-11-21
申请人： 陕西师范大学
IPC分类号： C12Q1/6862 , C12Q1/25
摘要： 本发明公开了一种连接酶在检测N6甲基腺嘌呤中的应用，其中所述的连接酶是T3 DNA连接酶或T4 RNA连接酶2。本发明首次发现与腺嘌呤(A)相比，N6甲基腺嘌呤(m6A)可以抑制T3 DNA连接酶和T4 RNA连接酶2的连接活性，基于该特性，以RNA(含的A的RNA和含有m6A的RNA)为模板，建立了基于连接‑聚合酶链式反应定量测定m6A百分比含量的方法。本发明操作简单、灵敏度高、特异性好，能够用于信使RNA、长非编码RNA、核糖体RNA、转运RNA和小RNA等RNA中m6A百分比含量测定。
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公开(公告)号：CN105821138B
公开(公告)日：2018-05-08
申请号：CN201610316771.0
申请日：2016-05-12
申请人： 陕西师范大学
IPC分类号： C12Q1/6844
摘要： 本发明公开了一种基于连接反应构建双茎环结构DNA模板检测核酸的方法，该方法利用连接酶连接与待测核酸互补的含有茎环结构的探针形成双茎环结构DNA模板，该模板可以引发快速、高效的环介导等温扩增反应，从而实现高灵敏度的核酸检测，同时该方法能够特异性地区分含有单碱基差异的核酸。本发明首次提出通过高特异性的连接反应构建双茎环结构DNA，为下一步环介导等温扩增反应提供了特异性的扩增模板，该方法无需荧光标记，成本低廉，避免了PCR过程精确的热循环过程，在恒温条件下即可实现待测核酸的快速扩增。本发明能够用于RNA或DNA的定量分析、甲基化检测、SNP检测等，为高灵敏的核酸分析及癌症早期诊断等研究提供了新的策略。
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公开(公告)号：CN106755306A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201611020857.5
申请日：2016-11-21
申请人： 陕西师范大学
摘要： 本发明公开了一种连接酶在检测N6甲基腺嘌呤中的应用，其中所述的连接酶是T3 DNA连接酶或T4 RNA连接酶2。本发明首次发现与腺嘌呤(A)相比，N6甲基腺嘌呤(m6A)可以抑制T3 DNA连接酶和T4 RNA连接酶2的连接活性，基于该特性，以RNA(含的A的RNA和含有m6A的RNA)为模板，建立了基于连接‑聚合酶链式反应定量测定m6A百分比含量的方法。本发明操作简单、灵敏度高、特异性好，能够用于信使RNA、长非编码RNA、核糖体RNA、转运RNA和小RNA等RNA中m6A百分比含量测定。
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公开(公告)号：CN104849448B
公开(公告)日：2016-08-24
申请号：CN201510240185.8
申请日：2015-05-12
申请人： 陕西师范大学
IPC分类号： G01N33/542 , G01N33/573 , G01N33/543
摘要： 本发明公开了一种基于荧光猝灭的蛋白激酶活性分析方法，该方法首先将靶标蛋白激酶与其对应的荧光标记多肽底物混合，使底物多肽中的特定氨基酸位点发生磷酸化反应，然后利用纳米二氧化铈能够快速、高选择性的吸附生成的磷酸化荧光标记多肽底物，导致其荧光发生猝灭，而未磷酸化的荧光多肽底物与二氧化铈的相互作用非常微弱，不会造成荧光信号的猝灭，因此，通过监测体系中荧光信号的猝灭情况，即可实现蛋白激酶活性的准确分析。本发明只需将蛋白激酶反应体系与纳米二氧化铈混合后即可直接进行荧光信号的测量，利用简便的操作步骤实现了蛋白激酶活性的即混即测型快速分析。同时本发明方法可应用于蛋白激酶抑制剂的筛选。
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公开(公告)号：CN105842219A
公开(公告)日：2016-08-10
申请号：CN201610348232.5
申请日：2016-05-24
申请人： 陕西师范大学
IPC分类号： G01N21/64
CPC分类号： G01N21/6486
摘要： 本发明公开了一种酪氨酸酶辅助的荧光增强型酪氨酸蛋白激酶活性分析方法，该方法首先将靶标酪氨酸蛋白激酶与其对应的荧光标记的多肽底物混合，使多肽中酪氨酸发生磷酸化，酪氨酸酶能够将未磷酸化酪氨酸残基上的酚羟基氧化成邻苯醌而猝灭底物的荧光，而磷酸化底物上酪氨酸酚羟基被磷酸基团保护不会被氧化，对多肽上标记的荧光分子不会产生猝灭作用。因此，在酪氨酸酶的辅助作用下，通过检测体系中荧光信号的增强情况，即可实现酪氨酸蛋白激酶活性的定量分析。本发明只需将蛋白激酶反应体系与酪氨酸酶混合后即可进行荧光信号的测量，利用简便的操作步骤实现了酪氨酸蛋白激酶活性的快速灵敏分析。同时本发明可用于酪氨酸蛋白激酶抑制剂的筛选。
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公开(公告)号：CN105842219B
公开(公告)日：2018-08-24
申请号：CN201610348232.5
申请日：2016-05-24
申请人： 陕西师范大学
IPC分类号： G01N21/64
摘要： 本发明公开了一种酪氨酸酶辅助的荧光增强型酪氨酸蛋白激酶活性分析方法，该方法首先将靶标酪氨酸蛋白激酶与其对应的荧光标记的多肽底物混合，使多肽中酪氨酸发生磷酸化，酪氨酸酶能够将未磷酸化酪氨酸残基上的酚羟基氧化成邻苯醌而猝灭底物的荧光，而磷酸化底物上酪氨酸酚羟基被磷酸基团保护不会被氧化，对多肽上标记的荧光分子不会产生猝灭作用。因此，在酪氨酸酶的辅助作用下，通过检测体系中荧光信号的增强情况，即可实现酪氨酸蛋白激酶活性的定量分析。本发明只需将蛋白激酶反应体系与酪氨酸酶混合后即可进行荧光信号的测量，利用简便的操作步骤实现了酪氨酸蛋白激酶活性的快速灵敏分析。同时本发明可用于酪氨酸蛋白激酶抑制剂的筛选。
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公开(公告)号：CN105525010B
公开(公告)日：2018-03-06
申请号：CN201610056612.1
申请日：2016-01-28
申请人： 陕西师范大学
IPC分类号： C12Q1/6886 , C12Q1/686 , C12Q1/25 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种茎环结构组合探针及其应用，该探针由两个具有茎环结构的DNA序列组成，探针I和探针II从5′端到3′端依次为茎环区、检测物识别区，其可用于端粒酶活性、RNA和DNA检测及端粒酶抑制剂筛选，检测物为端粒酶，探针I检测物识别区是端粒酶底物序列，探针Ⅱ检测物识别区是与端粒酶延伸序列中8～40个碱基互补的序列；检测物为RNA或DNA，探针I检测物识别区是与待测RNA或DNA的邻近3′端8～40个碱基互补的序列，探针II检测物识别区是与待测RNA或DNA的邻近5′端8～40个碱基相同的序列。本发明组合探针不需要荧光标记和放射性元素标记，其特有的颈环结构为核酸扩增反应提供了特异性的扩增模板，实现了恒温下信号快速放大，具有高的灵敏度和扩增效率。
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公开(公告)号：CN104849448A
公开(公告)日：2015-08-19
申请号：CN201510240185.8
申请日：2015-05-12
申请人： 陕西师范大学
IPC分类号： G01N33/542 , G01N33/573 , G01N33/543
CPC分类号： G01N33/542 , G01N33/54346 , G01N33/573
摘要： 本发明公开了一种基于荧光猝灭的蛋白激酶活性分析方法，该方法首先将靶标蛋白激酶与其对应的荧光标记多肽底物混合，使底物多肽中的特定氨基酸位点发生磷酸化反应，然后利用纳米二氧化铈能够快速、高选择性的吸附生成的磷酸化荧光标记多肽底物，导致其荧光发生猝灭，而未磷酸化的荧光多肽底物与二氧化铈的相互作用非常微弱，不会造成荧光信号的猝灭，因此，通过监测体系中荧光信号的猝灭情况，即可实现蛋白激酶活性的准确分析。本发明只需将蛋白激酶反应体系与纳米二氧化铈混合后即可直接进行荧光信号的测量，利用简便的操作步骤实现了蛋白激酶活性的即混即测型快速分析。同时本发明方法可应用于蛋白激酶抑制剂的筛选。
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公开(公告)号：CN105821138A
公开(公告)日：2016-08-03
申请号：CN201610316771.0
申请日：2016-05-12
申请人： 陕西师范大学
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： C12Q1/6844 , C12Q2531/119 , C12Q2521/501 , C12Q2563/107
摘要： 本发明公开了一种基于连接反应构建双茎环结构DNA模板检测核酸的方法，该方法利用连接酶连接与待测核酸互补的含有茎环结构的探针形成双茎环结构DNA模板，该模板可以引发快速、高效的环介导等温扩增反应，从而实现高灵敏度的核酸检测，同时该方法能够特异性地区分含有单碱基差异的核酸。本发明首次提出通过高特异性的连接反应构建双茎环结构DNA，为下一步环介导等温扩增反应提供了特异性的扩增模板，该方法无需荧光标记，成本低廉，避免了PCR过程精确的热循环过程，在恒温条件下即可实现待测核酸的快速扩增。本发明能够用于RNA或DNA的定量分析、甲基化检测、SNP检测等，为高灵敏的核酸分析及癌症早期诊断等研究提供了新的策略。
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公开(公告)号：CN105525010A
公开(公告)日：2016-04-27
申请号：CN201610056612.1
申请日：2016-01-28
申请人： 陕西师范大学
CPC分类号： C12Q1/6886 , C12Q1/686 , C12Q2600/136 , C12Q2600/158 , C12Q2545/113 , C12Q2561/113 , C12Q2563/107 , C12Q2521/113
摘要： 本发明公开了一种茎环结构组合探针及其应用，该探针由两个具有茎环结构的DNA序列组成，探针I和探针II从5′端到3′端依次为茎环区、检测物识别区，其可用于端粒酶活性、RNA和DNA检测及端粒酶抑制剂筛选，检测物为端粒酶，探针I检测物识别区是端粒酶底物序列，探针Ⅱ检测物识别区是与端粒酶延伸序列中8～40个碱基互补的序列；检测物为RNA或DNA，探针I检测物识别区是与待测RNA或DNA的邻近3′端8～40个碱基互补的序列，探针II检测物识别区是与待测RNA或DNA的邻近5′端8～40个碱基相同的序列。本发明组合探针不需要荧光标记和放射性元素标记，其特有的颈环结构为核酸扩增反应提供了特异性的扩增模板，实现了恒温下信号快速放大，具有高的灵敏度和扩增效率。
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