公开(公告)号：CN105745325A

公开(公告)日：2016-07-06

申请号：CN201480058873.6

申请日：2014-08-27

申请人： 韩美药品株式会社

发明人： 康喜哲 ,  金真荣 ,  李炳善 ,  金贤煜 ,  崔仁荣 ,  权世昌

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/12 ,  C12P21/02

CPC分类号： C12N9/6437 ,  C07K14/745 ,  C12N9/003 ,  C12N15/85 ,  C12P21/02 ,  C12Y105/01003 ,  C12Y304/21021

摘要： 本发明提供用于大量生产人凝血因子VII衍生物的方法，所述方法包括如下步骤：a)构建表达载体，所述表达载体包括i)其GC富集区缺少至少一个CCGCCC重复序列的二氢叶酸还原酶启动子的核苷酸序列、和与其可操作地连接的编码二氢叶酸还原酶(DHFR)的核苷酸序列，和ii)巨细胞病毒(CMV)的早期基因启动子的核苷酸序列、和与其可操作地连接的编码人凝血因子VII衍生物的核苷酸序列；b)用步骤a)的表达载体转染动物细胞系；c)通过在存在二氢叶酸还原酶抑制剂的情况下培养步骤b)的转染的动物细胞系，以选择能够高效表达人凝血因子VII衍生物的细胞系；和d)通过添加选自丁酸钠、维生素K和培养基添加剂的至少一种，培养从步骤c)选择的动物细胞系。本发明通过利用含有缺少GC富集重复序列的DHFR启动子的载体，可大规模高效表达人凝血因子VII衍生物，并因此可有效用于制备血友病治疗剂。