公开(公告)号：CN101487015B

公开(公告)日：2011-06-01

申请号：CN200810013776.1

申请日：2008-01-15

申请人： 齐鲁制药有限公司

发明人： 李剑凤 ,  武国栋 ,  王庆民 ,  闫岩 ,  孙丽霞 ,  王晶翼

IPC分类号： C12N15/58 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12N9/48 ,  C12R1/84

摘要： 本发明公开了一种利用毕赤酵母表达系统生产DSPAαl的方法，步骤包括(1)合成DSPAαl基因的核苷酸序列或按照毕赤酵母偏好密码子序列优化DSPAαl基因的核苷酸序列；(2)双酶切合成的或优化的DSPAαl基因序列，构建重组表达质粒X-DSPAαl；(3)转化毕赤酵母菌株细胞及平板筛选阳性转化子；(4)毕赤酵母重组菌株发酵筛选；(5)由毕赤酵母重组菌株表达上清液中分离纯化DSPAαl。本发明的方法成本低、周期短、技术上容易实现，摇瓶发酵表达量达到75mg/L，初步达到工业化生产水平，并且分离纯化后的DSPAαl最终纯度大于97％以上，可以直接用于制剂的研究和制备。

公开(公告)号：CN101487015A

公开(公告)日：2009-07-22

申请号：CN200810013776.1

申请日：2008-01-15

申请人： 齐鲁制药有限公司

发明人： 李剑凤 ,  武国栋 ,  王庆民 ,  闫岩 ,  孙丽霞 ,  王晶翼

IPC分类号： C12N15/58 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12N9/48 ,  C12R1/84

摘要： 本发明公开了一种利用毕赤酵母表达系统生产DSPAα1的方法，步骤包括(1)合成DSPAα1基因的核苷酸序列或按照毕赤酵母偏好密码子序列优化DSPAα1基因的核苷酸序列；(2)双酶切合成的或优化的DSPAα1基因序列，构建重组表达质粒X－DSPAα1；(3)转化毕赤酵母菌株细胞及平板筛选阳性转化子；(4)毕赤酵母重组菌株发酵筛选；(5)由毕赤酵母重组菌株表达上清液中分离纯化DSPAα1。本发明的方法成本低、周期短、技术上容易实现，摇瓶发酵表达量达到75mg/L，初步达到工业化生产水平，并且分离纯化后的DSPAα1最终纯度大于97％以上，可以直接用于制剂的研究和制备。