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    一种蛋白错配二硫键的分析方法
    1.
    发明授权
    一种蛋白错配二硫键的分析方法 有权

    公开(公告)号：CN110824096B

    公开(公告)日：2022-11-29

    申请号：CN201810917942.4

    申请日：2018-08-13

    申请人： 齐鲁制药有限公司

    发明人： 安振明 ,  李道远 ,  王亚宁 ,  刘飞飞 ,  王庆民 ,  孙丽霞

    IPC分类号： G01N30/96

    摘要： 本发明涉及一种蛋白错配二硫键的分析方法，其步骤包括：制备测试组样品；制备鉴别组样品；对鉴别组样品和测试组样品进行肽质量指纹谱图分析。本发明的方法可以用于检测蛋白药物中的错配二硫键杂质组分，解决了现有二硫键分析方法中仅关注正确配对二硫键而忽视错误配对二硫键的不足，对于提高蛋白药物的结构表征分析水平、保障生物药物的安全性及有效性具有较大的实用价值。

    一种大规模哺乳动物工程细胞培养方法
    2.
    发明公开
    一种大规模哺乳动物工程细胞培养方法 有权

    公开(公告)号：CN103320390A

    公开(公告)日：2013-09-25

    申请号：CN201310239477.0

    申请日：2013-06-17

    申请人： 齐鲁制药有限公司

    发明人： 周凯松 ,  王庆民 ,  孙丽霞 ,  曹平 ,  夏庭坤 ,  崔午阳

    IPC分类号： C12N5/10 ,  C12N5/02

    摘要： 本发明涉及一种大规模哺乳动物工程细胞培养方法。该方法包括（1）细胞复苏及摇床培养，（2）扩培罐培养，包括在培养基中于悬浮液中培养细胞，分三级进行；（3）生产罐培养。本发明将在生产罐中典型的15天的细胞培养缩短为8天，在扩培罐中培养生长7天，待细胞密度达到对数生长期后，再将细胞以高密度稀释到生产细胞罐中，继续生长培养8天至结束。本发明的细胞培养方法使得每一批次生产的周期缩短为典型培养的一半；该工艺使扩培罐和生产罐得到最大效率的利用，提高了设备的利用率。

    利用酵母表达系统生产DSPAα1的方法
    7.
    发明授权
    利用酵母表达系统生产DSPAα1的方法 失效

    公开(公告)号：CN101487015B

    公开(公告)日：2011-06-01

    申请号：CN200810013776.1

    申请日：2008-01-15

    申请人： 齐鲁制药有限公司

    发明人： 李剑凤 ,  武国栋 ,  王庆民 ,  闫岩 ,  孙丽霞 ,  王晶翼

    IPC分类号： C12N15/58 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12N9/48 ,  C12R1/84

    摘要： 本发明公开了一种利用毕赤酵母表达系统生产DSPAαl的方法，步骤包括(1)合成DSPAαl基因的核苷酸序列或按照毕赤酵母偏好密码子序列优化DSPAαl基因的核苷酸序列；(2)双酶切合成的或优化的DSPAαl基因序列，构建重组表达质粒X-DSPAαl；(3)转化毕赤酵母菌株细胞及平板筛选阳性转化子；(4)毕赤酵母重组菌株发酵筛选；(5)由毕赤酵母重组菌株表达上清液中分离纯化DSPAαl。本发明的方法成本低、周期短、技术上容易实现，摇瓶发酵表达量达到75mg/L，初步达到工业化生产水平，并且分离纯化后的DSPAαl最终纯度大于97％以上，可以直接用于制剂的研究和制备。

    去氨普酶α1突变体
    8.
    发明公开
    去氨普酶α1突变体 失效

    公开(公告)号：CN101748110A

    公开(公告)日：2010-06-23

    申请号：CN200810237709.8

    申请日：2008-12-01

    申请人： 齐鲁制药有限公司

    发明人： 李剑凤 ,  阎岩 ,  武国栋 ,  王庆民 ,  赵雪娜 ,  宫新江 ,  孙丽霞 ,  王晶翼

    IPC分类号： C12N9/50 ,  C12N15/58 ,  A61K38/49 ,  A61P7/02

    摘要： 本发明公开了一种去氨普酶α1突变体，是改变野生型DSPAα1激活环区的195位的氨基酸，将所述野生型DSPAα1肽链中195位的苯丙氨酸替换成缬氨酸，命名为DSMa；或在DSMa基础上继续改变其210～213位的氨基酸，将所述肽链中210～213位的四个氨基酸谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸、精氨酸替换成四个丙氨酸，命名为DSMb；其中所述DSMa的核苷酸序列和氨基酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；所述DSMb的核苷酸序列和氨基酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。本发明所述的去氨普酶α1突变体相对于野生型DSPAα1而言，具有比活性提高、表达量提高、半衰期延长、溶栓活性提高的特点，更具有开发成新型有效的溶栓药物的潜在应用价值。