公开(公告)号：CN114806938B

公开(公告)日：2023-05-09

申请号：CN202210418689.4

申请日：2022-04-20

申请人： 齐鲁工业大学

发明人： 王腾飞 ,  陶泽坤 ,  袁海波 ,  刘洪玲 ,  黄迪 ,  蒋艺

IPC分类号： C12N1/20 ,  C12N13/00 ,  C12P19/26 ,  C12R1/46

摘要： 本发明主要涉及一株在低糖环境下生产透明质酸的马链球菌兽疫亚种及其应用，属于生物多糖生产技术领域。本发明筛选到的马链球菌兽疫亚种WTF101，于2022年1月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号，保藏编号为CCTCC NO：M 2022051。本发明的马链球菌兽疫亚种WTF101结合分批补料发酵技术，通过优化发酵培养基，平衡菌种生长与代谢之间的关系，最终在总糖含量为7.2％的条件下，透明质酸产量可达12.2g/L，发酵液的粘度可达74000mPa·s，原料与产物之间的转化效率可达16.9％，大大提高了透明质酸的生产效率，节约生产成本。

公开(公告)号：CN114836397B

公开(公告)日：2023-05-05

申请号：CN202210494671.2

申请日：2022-05-07

申请人： 齐鲁工业大学

发明人： 王腾飞 ,  刘学军 ,  蒋艺 ,  刘洪玲 ,  袁海波 ,  黄迪

IPC分类号： C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/18 ,  C12P19/12 ,  C12P19/00 ,  C12P19/04 ,  C12P19/02 ,  C12R1/19

摘要： 本发明提供了一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及应用，属于基因工程和酶工程技术领域，具体为氨基酸突变位点为环糊精葡萄糖基转移酶氨基酸序列SEQ ID NO.2的第33、119、122、216、255、258、394、566位氨基酸之一或两者以上，主要突变体为N33K、N33R、Y119R、Y122E、L216Q、H255Y、E258Y、E258Q、E566H、N33K/Y122E/E258Y/P394R，本发明中突变体的歧化反应活性相较于野生型明显提高，本发明对于环糊精葡萄糖基转移酶工业化生产具有一定意义，并提高该酶在医药、食品、生物行业中的应用前景。

公开(公告)号：CN113322250B

公开(公告)日：2022-12-23

申请号：CN202110204735.6

申请日：2021-02-23

申请人： 齐鲁工业大学

发明人： 王腾飞 ,  宋龙祥 ,  刘洪玲 ,  王冲 ,  张慧敏 ,  郑涵文

IPC分类号： C12N11/12 ,  C12N15/75 ,  C12N15/66 ,  C12N15/61 ,  C12N15/56 ,  C12P19/24 ,  C12P19/14 ,  C12P19/12 ,  C12R1/125

摘要： 本发明涉及一种MTSase固定化酶和MTHase固定化酶的制备方法及其在海藻糖生产中的应用，本发明以相互作用多肽对spyTag/spyCatcher为介导，利用spyTag/spyCatcher可以在体外特异性自组装形成共价键的相互作用短肽的特性，对麦芽寡糖基海藻糖合成酶MTSase和麦芽寡糖基海藻糖水解酶MTHase进行一步回收和固定化，并进行双酶转化生产海藻糖实验，通过实验发现以相互作用多肽对spyCatcher‑CBM为介导的固定化载体对细胞破碎液中重组酶进行固定化，发现通过固定化对重组酶的回收率达到80.3％，本发明涉及的固定化酶提高了酶温度稳定性，酶的活性以及酶的重复利用率。

公开(公告)号：CN114836397A

公开(公告)日：2022-08-02

申请号：CN202210494671.2

申请日：2022-05-07

申请人： 齐鲁工业大学

发明人： 王腾飞 ,  刘学军 ,  蒋艺 ,  刘洪玲 ,  袁海波 ,  黄迪

IPC分类号： C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/18 ,  C12P19/12 ,  C12P19/00 ,  C12P19/04 ,  C12P19/02 ,  C12R1/19

摘要： 本发明提供了一种环糊精葡萄糖基转移酶突变体及应用，属于基因工程和酶工程技术领域，具体为氨基酸突变位点为环糊精葡萄糖基转移酶氨基酸序列SEQ ID NO.2的第33、119、122、216、255、258、394、566位氨基酸之一或两者以上，主要突变体为N33K、N33R、Y119R、Y122E、L216Q、H255Y、E258Y、E258Q、E566H、N33K/Y122E/E258Y/P394R，本发明中突变体的歧化反应活性相较于野生型明显提高，本发明对于环糊精葡萄糖基转移酶工业化生产具有一定意义，并提高该酶在医药、食品、生物行业中的应用前景。

公开(公告)号：CN111647615B

公开(公告)日：2022-06-14

申请号：CN202010519285.5

申请日：2020-06-09

申请人： 齐鲁工业大学

发明人： 王腾飞 ,  刘洪玲 ,  王松

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N15/56 ,  C12N1/21 ,  C12P19/14 ,  C12P19/12 ,  C12R1/19

摘要： 本发明涉及一种构建自组装表达双酶菌株的方法及应用，本发明通过构建不同比例和不同结构的MTSase‑MTHase多酶复合体，获得大肠杆菌重组子；本发明发现不同比例的MTSase‑MTHase多酶复合体，获得的大肠杆菌重组子对海藻糖的转化率有一定影响；相同比例、结构不同的MTSase‑MTHase多酶复合体，获得的大肠杆菌重组子对海藻糖的转化率影响较大；为多酶体系发酵生产海藻糖的研究提供了理论依据。

公开(公告)号：CN113322250A

公开(公告)日：2021-08-31

申请号：CN202110204735.6

申请日：2021-02-23

申请人： 齐鲁工业大学

发明人： 王腾飞 ,  宋龙祥 ,  刘洪玲 ,  王冲 ,  张慧敏 ,  郑涵文

IPC分类号： C12N11/12 ,  C12N15/75 ,  C12N15/66 ,  C12N15/61 ,  C12N15/56 ,  C12P19/24 ,  C12P19/14 ,  C12P19/12 ,  C12R1/125

摘要： 本发明涉及一种MTSase固定化酶和MTHase固定化酶的制备方法及其在海藻糖生产中的应用，本发明以相互作用多肽对spyTag/spyCatcher为介导，利用spyTag/spyCatcher可以在体外特异性自组装形成共价键的相互作用短肽的特性，对麦芽寡糖基海藻糖合成酶MTSase和麦芽寡糖基海藻糖水解酶MTHase进行一步回收和固定化，并进行双酶转化生产海藻糖实验，通过实验发现以相互作用多肽对spyCatcher‑CBM为介导的固定化载体对细胞破碎液中重组酶进行固定化，发现通过固定化对重组酶的回收率达到80.3％，本发明涉及的固定化酶提高了酶温度稳定性，酶的活性以及酶的重复利用率。

公开(公告)号：CN112111441A

公开(公告)日：2020-12-22

申请号：CN202011024026.1

申请日：2020-09-25

申请人： 齐鲁工业大学

发明人： 刘开泉 ,  王瑞明 ,  宿春丽 ,  李玲 ,  王腾飞

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/78 ,  C12N15/64 ,  C12P17/12 ,  C12R1/38

摘要： 本发明提供一株高产吩嗪‑1‑甲酰胺的基因工程菌株及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明以相对安全的绿针假单胞菌为出发菌株，通过基因工程技术在其基因组上敲除具有负调控作用的双元调控系统相关基因，最终使得PCN产量由初始270.4mg/L提升至5787.2mg/L，使得吩嗪‑1‑甲酰胺的产量大幅提高，能够更加有效用于生物防治，因此具有良好的实际应用之价值，为PCN的大规模生产奠定重要基础。

公开(公告)号：CN112111440A

公开(公告)日：2020-12-22

申请号：CN202011024021.9

申请日：2020-09-25

申请人： 齐鲁工业大学

发明人： 刘开泉 ,  王瑞明 ,  李玲 ,  王腾飞 ,  李丕武

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/78 ,  C12P17/12 ,  C12R1/38

摘要： 本发明提供一株用于生产吩嗪‑1‑甲酰胺的基因工程菌及其制备方法和用途，属于基因工程技术领域。本发明是以绿针假单胞菌Qlu‑1为出发菌株，通过基因工程技术从Qlu‑1菌株基因组中phzO基因替换为外源的phzH基因，然后再敲除lon基因、rsmE基因、psrA基因、parS基因和rpeA基因，同时导入phzC基因、aroB基因、aroD基因、aroE基因、tktA基因和ppsA基因，并敲除pykF基因，通过构建相应基因工程菌株，使得吩嗪‑1‑甲酰胺的产量大幅提高。其中，基因工程菌株QPCN‑8具有最佳效果，其PCN产量高达10378.5mg/L，同时生长性能良好，因此具有良好的实际应用之价值。

公开(公告)号：CN109679887B

公开(公告)日：2020-12-22

申请号：CN201811490196.1

申请日：2018-12-06

申请人： 齐鲁工业大学

发明人： 王腾飞 ,  刘洪玲 ,  王希晖 ,  王松

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12P19/12 ,  C12N15/75 ,  C12R1/125

摘要： 本发明涉及一种利用高效分泌表达的双酶融合酶耦合发酵生产海藻糖的方法，本发明首次通过采用向枯草芽孢杆菌中插入启动子P43、信号肽PhoD、麦芽寡糖基海藻糖合成酶MTSase和麦芽寡糖基海藻糖水解酶MTHase，同时敲除裂解基因Xpf、SkfA、LytC和SdpC后，构建获得重组工程菌pHT01‑P43‑PhoD‑MTSase‑MTHase(LM1234)，并采用了特殊序列的刚性连接，从而实现了目标酶的功能表达；通过实际发酵生产海藻糖后，惊奇的发现，由于改造后的重组菌胞外酶活能够占到总酶活的70％，实现了胞外产酶与转化的同步进行，从而省去了传统发酵液中需要先进行酶分离然后再进行海藻糖生产的过程，实现了重组菌的发酵与海藻糖的生产同于耦合化。

公开(公告)号：CN106434715B

公开(公告)日：2019-11-26

申请号：CN201610937023.4

申请日：2016-10-25

申请人： 齐鲁工业大学

发明人： 王瑞明 ,  薛乐平 ,  王腾飞 ,  汪俊卿

IPC分类号： C12N15/61 ,  C12N9/90 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/12

摘要： 本发明涉及麦芽寡糖基海藻糖合成酶及其表达基因与应用。麦芽寡糖基海藻糖合成酶表达基因MTSase，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；麦芽寡糖基海藻糖合成酶MTSase，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还涉及麦芽寡糖基海藻糖合成酶MTSase在制备生产海藻糖中的应用。本发明首次发现了由氧化节杆菌(Arthrobacter oxydans)提取获得的麦芽寡糖基海藻糖合成酶表达基因MTSase，该基因表达的麦芽寡糖基海藻糖合成酶MTSase显著优于现有已知的麦芽寡糖基海藻糖合成酶MTSase，该酶与同样来源于氧化节杆菌(Arthrobacter oxydans)的MTHase共同作用生产海藻糖时，产率高，具有广阔的应用前景。