摘要:
1. Claims for the Contracting States : BE, CH, DE, FR, GB, IT, LI, LU, NL, SE A group of at least two shuttle vectors which are compatible in Streptomycetes and have an E. Coli replicon and various Streptomycetes replicons deriving from the plasmids pSG2, pSG5 (obtainable from Streptomyces ghanaensis DSM 2932) and pSVH1. 1. Claim for the Contracting State : AT The use of at least two of the replicons from the group of Streptomycetes plasmids pSG2, pSG5 (obtainable from Streptomyces ghanaensis DSM 2932) and pSVH1 for the construction of mutually compatible shuttle vectors with an E. coli replicon.
摘要:
Durch Selektion von Streptomyces viridochromogenes DSM 4112 gegen Phosphinothricyl alanyl alanin (PTT) erhält man PTT-resistente Selektanten. Aus der Gesamt-DNA dieser Selektanten erhält man durch Schneiden mit Nco I, Klonieren eines 2,7 kb großen Fragments und Selektion auf PTT-Resistenz das DNA-Fragment, welches das Phosphinothricin (PTC)-Resistenzgen trägt. Dieses ist zur Herstellung PTC-resistenter Pflanzen, aber auch als Resistenz-Marker geeignet.
摘要:
Das aus dem Genom von Streptomyces viridochromogenes DSM 40736 isolierte Phosphinothricin (PTC)-Resistenzgen wird - nach Anpassung an den Codongebrauch in Pflanzen - synthetisiert und in Genstrukturen eingebaut, die nach Expression in Pflanzen diese resistent gegen PTC machen.
摘要:
Mutanten lassen sich sehr einfach dadurch gewinnen, daß man aus dem zu mutierenden Stamm die gesamte DNA isoliert, diese nach Spalten in kleine Fragmente in ein temperatursensitives Plasmid mit einem weiteren Selektionsmarker integriert, die so erhaltene Hybridplasmid-Population in den Ausgangsstamm transformiert, durch Selektion auf den Marker die Transformanten selektiert, durch Erhöhung der Temperatur über den Schwellenwert des temperatursensitiven Plasmids die Hybridplasmide eliminiert und durch erneute Selektion auf den Marker die Mutanten selektiert. Da auf diese Weise das mutierte Gen markiert ist, kann dieses leicht isoliert und durch Hybridisierung aus einer Genbank des Wildtyps das nicht mutierte Gen isoliert werden.
摘要:
DNA-Abschnitte aus Mutanten lassen sich sehr einfach dadurch gewinnen, daß man aus dem zu mutierenden Stamm die gesamte DNA isoliert, diese nach Spalten in kleine Fragmente in ein temperatursensitives Plasmid mit einem weiteren Selektionsmarker, der in E. coli selektierbar ist, integriert, die so erhaltene Hybridplasmid-Population in den Ausgangsstamm transformiert, durch Selektion auf den Marker die Transformanten selektiert, durch Erhöhung der Temperatur über den Schwellenwert des temperatursensitiven Plasmids die Hybridplasmide eliminiert und durch erneute Selektion auf den Marker die Mutanten selektiert. Legt man nun mit der DNA dieser Mutanten eine Cosmid-Genbank an, so erhält man durch Selektion auf den eingeführten, in E. coli selektionierbaren Marker und den Cosmid-eigenen Marker direkt Cosmide, die das mutierte Gen enthalten.
摘要:
Das Streptomyceten-Plasmid pSG5 ist temperatursensitiv. Mit Hilfe des pSG5-Replikons können somit temperatursensitive Hybridplasmide hergestellt werden. Diese eignen sich zum "screening" auf DNA-Abschnitte, die zu DNA-Segmenten des Hybridplasmid homolog sind.
摘要:
Aus Streptomyces coelicolor DSM 3030 erhält man durch totale Verdauung der Gesamt-DNA, Klonierung in einen geeigneten Vektor und Transformation eines Streptomyceten-Empfängerstamms intensiv blau-schwarze Kolonien. Durch Reisolierung der Plasmid-DNA und Schneiden mit Bam HI erhält man eine 5,5 kb-Fragment, auf dem das Farbstoffgen lokalisiert ist. Dieses eignet sich als Marker, insbesondere als Inaktivierungsmarker, in Streptomyceten.