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公开(公告)号：EP0232326B1
公开(公告)日：1994-10-05
申请号：EP86904699.5
申请日：1986-07-17
发明人： LING, Nicholas, Chai-Kwan , YING, Shao-Yao , ESCH, Fred, Stephen , GUILLEMIN, Roger, Charles, Louis
CPC分类号： C07K14/575 , A61K38/00 , Y10S930/26
摘要： Two 32,000-dalton proteins with inhibin activity were isolated from porcine follicular fluid using heparin-Sepharose affinity chromatography, followed by gel filtration on Sephacryl S-200 and then four steps of reverse-phase high-performance liquid chromatography. Each isolated molecule is composed of two chains having molecular weights of about 18,000 and about 14,000 daltons, respectively, which are bound together by disulfide bonding. Microsequencing revealed the NH2-terminal portion of the 18K chain of both to be Ser-Thr-Ala-Pro-Leu-Pro-Trp-Pro-Trp-Ser-Pro-Ala-Ala-Leu-Arg-Leu-Leu-Gln-Arg-Pro-Pro-Glu-Glu-Pro-Ala-Val, of one of the 14K chains to be Gly-Leu-Glu-Cys-Asp-Gly-Arg-Thr-Asn-Leu-Cys-Cys-Arg-Gln-Gln-Phe-Phe-Ile-Asp-Phe-Arg-Leu-Ile-Gly-Trp, and of the other 14K chain to be Gly-Leu-Glu-Cys-Asp-Gly-Lys-Val-Asn-Ile-Cys-Cys-Lys-Lys-Gln-Phe-Phe-Val-Ser-Phe-Lys-Asp-Ile-Gly-Trp-Asn-Asp-Trp-Ile-Ile-Ala-Pro. Both proteins have now been completely characterized, each having a first chain 134 residues long linked by disulfide bonding to a second chain 116 or 115 residues long. The first chain is believed to be glycosylated, which accounts for the disparity between the number of residues and the apparent molecular weight of 18K. These 32K proteins specifically inhibit basal secretion of FSH, but not of LH, in a rat anterior pituitary monolayer culture system. The half-maximal effective dose of one is 450 pg/ml and of the other is 900 pg/ml.
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公开(公告)号：EP0232326A1
公开(公告)日：1987-08-19
申请号：EP86904699.0
申请日：1986-07-17
发明人： LING, Nicholas, Chai-Kwan , YING, Shao-Yao , ESCH, Fred, Stephen , GUILLEMIN, Roger, Charles, Louis
CPC分类号： C07K14/575 , A61K38/00 , Y10S930/26
摘要： Deux protéines de 32,000-daltons présentant une activité d'inhibine ont été isolés à partir du fluide folliculaire porcin par chromatographie à affinité héparine-sépharose, suivie par filtration sur gel sur du Séphacryl S-200 et après quatre étapes de chromatographie à l'état liquide de haut rendement à phase inversée. Chaque molécule isolée se compose de deux chaînes possédant des points moléculaires d'environ 18000 et 14000 daltons, respectivement, liées entre elles par un lien bisulfure. Le microséquencement a révélé que la partie terminale NH2 de la chaine 18K des deux protéines est égale à Ser-Thr-Ala-Pro-Leu-Pro-Trp-Pro-Trp-Ser-Pro-Ala-Ala-Leu-Arg-Leu-Leu-Gln-Arg-Pro-Pro-Glu-Glu-Pro-Ala-Val, que la partie terminale de l'une des chaînes 14K est égale à Gly-Leu-Glu-Cys-Asp-Gly-Arg-Thr-Asn-Leu-Cys-Cys-Arg-Gln-Gln-Phe-Phe-Ile-Asp-Phe-Arg-Leu-Ile-Gly-Trp, et que la partie terminale de l'autre chaine 14K est égale à Gly-Leu-Glu-Cys-Asp-Gly-Lys-Val-Asn-Ile-Cys-Cys-Lys-Lys-Gln-Phe-Phe-Val-Ser-Phe-Lys-Asp-Ile-Gly-Trp-Asn-Asp-Trp-Ile-Ile-Ala-Pro. Les deux protéines ont maintenant été caractérisées, chacune comprenant une première chaine longue de 134 résidus liés par un lien bisulfure à une deuxième chaine longue de 116 ou 115 résidus. On pense que la première chaîne est glycosylée, ce qui explique la différence entre le nombre de résidus et le poids moléculaire apparent de 18K. Ces protéines 32K inhibent spécifiquement la sécrétion basale de FSH, mais non pas celle de LH, dans une souris avant le système de culture monocouche pituitaire. La dose efficace demi-maximale est égale à 450 pg/ml pour l'une et 900 pg/ml pour l'autre.
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